凝集反应

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由于抗原颗粒大,反应表面积相对较小,为防止抗体过量,试验时需稀释抗体,以利于合理配比抗原抗体,形成可见凝集
反应效价多以抗体稀释度来判定
凝集反应的优点
反应敏感、快速,操作简便,无需特殊仪器设备,适应性强
凝集反应的用途
检测各种抗原
检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体
用于青霉素抗体、花粉抗体等抗体的检测
2、反向间接凝集试验
用已知抗体致敏载体颗粒,检测样本中的抗原。可检测新型隐球菌荚膜抗原,乙肝表面抗原等
3、间接凝集抑制试验
用已知抗原致敏载体颗粒,检测样本中是否含有相同的抗原(正向)。亦可用已知抗体致敏载体颗粒,检测样本中是否含有同样的抗体(反向)。
4、间接血凝试验(IHA):是以红细胞作为载体的间接凝集试验
使用前醛化,可增强吸附蛋白的能力,能耐60℃加热,可长期保存不溶血。且延长保存期,不易溶血
聚苯乙烯胶乳颗粒:人工合成颗粒,带负电
物理方法吸附蛋白,但结合牢固性较差
羧化后,带化学活性基团,可化学交联蛋白,性能稳定,保存期长
间接凝集反应的类型
1、正向间接凝集试验
用已知抗原致敏载体颗粒,检测样本中的抗体。常用于检测病原微生物相关的抗体
参与反应的抗原称凝集原,抗体称凝集素。
凝集反应:直接凝集反应
间接凝集反应
凝来自百度文库反应的影响因素
电解质:0.85% NaCl溶液,降低颗粒性抗原的电荷
pH值:合适pH值为6~8,pH在3左右出现细菌的自凝现象,称为酸凝
温度:过冷反应速度慢,过热破坏蛋白结构
抗体与抗原的比例什么现象?
一、直接凝集试验
颗粒性抗原直接与相应抗体结合,在适量电解质存在的条件下,出现肉眼可见的凝集现象
小结
凝集反应试验是以颗粒性抗原或致敏载体微粒的凝集为判定结果的检验方法,包括直接凝集法和间接凝集法
直接凝集试验中的玻片法是一种定性试验,常用于鉴定血型、细菌等;试管法是一种半定量试验,以效价判定结果.
载体微球的条件
1、不溶于水,理化性质稳定,无化学活性和免疫学活性
2、大小均匀一致,密度与生理盐水等介质相近,短时间内不致下沉
3、可直接吸附或偶联结合抗原或抗体,且不影响其特性
致敏所用的抗原或抗体需要纯度高,且免疫活性较好
常用载体:
红细胞:绵羊、家兔、鸡红细胞,人O型血红细胞
吸附多糖抗原较好,吸附蛋白抗原较差
凝集反应
抗原-抗体反应
分为两个阶段
特异性结合阶段:抗原和抗体迅速识别、结合
可见反应阶段:受电解质、酸碱度、温度等环境因素影响,发生凝集、沉淀、溶解、补体结合介导的溶血等可见现象,反应慢
凝集反应agglutination
颗粒性抗原,或与载体颗粒结合后的可溶性抗原(或抗体),与抗体(或抗原)结合后,在适当条件下,出现肉眼可见的凝集现象。
1、玻片法
简便、快速的定性试验,敏感度低
如:人类ABO血型鉴定,细菌分离株的鉴定与分型
2、试管法
半定量试验:了解抗体及其含量
二、间接凝集试验
将可溶性抗原吸附或偶联在大小适当、与免疫无关的载体微粒上,制成致敏颗粒,再与相应的抗体作用,在适宜电解质存在时,出现特异性凝集现象,也称被动凝集试验
致敏:
将可溶性抗原吸附或偶联到载体微球上的过程称为致敏,致敏后的载体微球称为致敏微球。致敏后的颗粒反应面积增加,敏感性提高。
5、协同凝集试验
用金葡菌作为载体,其表面A蛋白(SPA)可与IgG的Fc非特异性结合,可看做IgG致敏的金葡菌,检测样本中与IgG结合的抗原。可用于细菌的快速鉴定和分型,细菌中和病毒等可溶性抗原的测定。
凝集反应的特点
凝集反应所用的抗原是较大的颗粒性物质,在介质中分散成均匀的颗粒悬液
反应所形成的凝集物主要由抗原物质组成
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