组织切片精品PPT课件
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第三篇 电子显微镜技术
第四篇 其它现代实验技术
组织芯片技术 显微切割技术 流式细胞术 鱼虾贝细胞培养技术
第一篇 显微制片技术的一般原理与方法
第一章 概述 第二章 固定与固定剂 第三章 染色、染料及染色剂 第四章 脱水、透明与封固 第五章 非切片法 第六章 切片法 第七章 特殊制片技术
第一章 概 述
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（一）切片法的一般过程（石蜡包埋切片法为例） 6.切片、贴片
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（一）切片法的一般过程（石蜡包埋切片法为例） 7. 染色
8. 脱水、透明、封片
纤毛虫
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（二）非切片法 1. 整体制片法 2. 涂片法
血涂片
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（二）非切片法 3.分离法 4.铺片法 5.压片法 6.滴片法
第一章 概 述
三、制片技术的一般概பைடு நூலகம் 切片是否合格（即制片成功与否）的标准？
• 制片是否保持原有的形态，不能有人工假象 • 染色对比是否明显 • 脱水是否干净 • 透明是否达到光学标准 • 颜色是否能长期保存
复习题
1 制片方法归结为哪几类? 2 制片是否成功的标准？
写在最后
成功的基础在于好的学习习惯
The foundation of success lies in good habits
25
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End
2. 切片法：用一些具有支持能力又便于切割的介质浸
透到组织内部，起填充和支持作用，形成 具有一定硬度的包埋块，再在切片机上切 片，叫包埋切片法 。 如：石蜡包埋切片法、冰冻切片法、碳蜡切片法 等
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（一）切片法的一般过程（石蜡包埋切片法为例）
1. 杀死、取材、固定 哺乳动物：氯仿、乙醚等麻醉，或断头法、空气栓塞法等 海产无脊椎动物：薄荷冰、水合氯醛、硫酸镁、淡水等麻醉 固定方法： 浸泡固定，注射或灌流法固定，活体原位固定或微波固定等
石蜡包埋切片法
切片机
厚2μm
第一章 概 述
一、显微制片技术的发展概况
显微镜发展：
超薄切片技术
• 1934年，第一台电镜诞生（德国） • 1939年，德国Siemens公司生产第一台商品电镜（10nm）
• 我国1958年开始制造电镜 点分辨率优于0.3nm
• 上世纪50-70年代，制成多种用途显微镜
？ 生物实验技术
方法学
生物显微技术
生物学研究的基础 实验方法
研究生物体在形态学和功能方 面的基础研究方法。目的是为 在显微镜下有效地观察生物体 提供适当的标本。
淋巴囊肿病毒病
光镜技术
电镜技术
组织化学技术
免疫组织化学技术
大竹蛏肠上皮
碱性磷酸酶 酸性磷酸酶
课程结构与内容：
第一篇 显微制片技术的一般原理与方法 第二篇 显微镜与显微摄影技术
SUCCESS
THANK YOU
2020/12/13
可编辑
13
扫描探针显微镜
扫
硅表面结构
描
隧 道 显 微 镜 原
Bining 和 Rohner （1982）， 获得了1986年的诺 贝尔奖 分辨率10-9m
理
第一章 概 述
二、制片方法的种类
1. 非切片法：在制片过程中不经过切片机切片而制成
标本。 如：整体制片法，涂片法，浸泽分离法，压片法等
一、显微制片技术的发展概况
生物学
研究方法
研究工具 标本制备技术
显微镜
固定 染色 切片技术
第一章 概 述
一、显微制片技术的发展概况
0.2μm
显微镜发展：20世纪30年代，光学显微镜分辨率达到极限
1590
Janssen
1665
Robert Hooke Cella
（cell）
1667
Leeuwenhoek
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（一）切片法的一般过程（石蜡包埋切片法为例） 2. 冲洗与保存
据所使用固定剂的不同选用适当的溶剂将固定剂洗净。 70%Alc（长期保存可在70%Alc中加10%甘油）中保存 。
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（一）切片法的一般过程（石蜡包埋切片法为例） 3. 脱水： 有利于保存或后面的透明和透蜡处理 。 70%Alc中可长期保存，在80%Alc中可隔夜。 4.透明：将脱水剂替换出来，便于下一步透蜡。 5.透蜡、包埋
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
暗视野显微镜 相差显微镜
微分干涉显微镜
荧光显微镜
数字摄影显微镜
显微操纵系统 （倒置显微镜）
激光扫描共聚焦显微镜
新型扫描显微成像系统 • 克服了光镜与电镜的不足 •具有纵向分辨率，对样品进行
无损伤的“光学切片” ，“显微CT” • 对每一层面的信息进行处理和分析 • 三维结构的重组和立体结构的分析 • 具备时间分辨力，可对观察标本进行动态观察
300×，细菌、血球、精子
第一章 概 述
一、显微制片技术的发展概况
标本制备技术：
固定方面 ： 单一固定剂
混合固定剂
19世纪，氯化汞、铬酸、冰醋酸、酒精、重 铬酸钾、四氧化锇、甲醛 Flemming、Bouin
染色方面： 藏红花 胭脂红、苏木精
1862年，Beneke，苯胺染料
组织学革命
切片技术方面： 徒手切片法
第四篇 其它现代实验技术
组织芯片技术 显微切割技术 流式细胞术 鱼虾贝细胞培养技术
第一篇 显微制片技术的一般原理与方法
第一章 概述 第二章 固定与固定剂 第三章 染色、染料及染色剂 第四章 脱水、透明与封固 第五章 非切片法 第六章 切片法 第七章 特殊制片技术
第一章 概 述
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（一）切片法的一般过程（石蜡包埋切片法为例） 6.切片、贴片
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（一）切片法的一般过程（石蜡包埋切片法为例） 7. 染色
8. 脱水、透明、封片
纤毛虫
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（二）非切片法 1. 整体制片法 2. 涂片法
血涂片
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（二）非切片法 3.分离法 4.铺片法 5.压片法 6.滴片法
第一章 概 述
三、制片技术的一般概பைடு நூலகம் 切片是否合格（即制片成功与否）的标准？
• 制片是否保持原有的形态，不能有人工假象 • 染色对比是否明显 • 脱水是否干净 • 透明是否达到光学标准 • 颜色是否能长期保存
复习题
1 制片方法归结为哪几类? 2 制片是否成功的标准？
写在最后
成功的基础在于好的学习习惯
The foundation of success lies in good habits
25
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End
2. 切片法：用一些具有支持能力又便于切割的介质浸
透到组织内部，起填充和支持作用，形成 具有一定硬度的包埋块，再在切片机上切 片，叫包埋切片法 。 如：石蜡包埋切片法、冰冻切片法、碳蜡切片法 等
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（一）切片法的一般过程（石蜡包埋切片法为例）
1. 杀死、取材、固定 哺乳动物：氯仿、乙醚等麻醉，或断头法、空气栓塞法等 海产无脊椎动物：薄荷冰、水合氯醛、硫酸镁、淡水等麻醉 固定方法： 浸泡固定，注射或灌流法固定，活体原位固定或微波固定等
石蜡包埋切片法
切片机
厚2μm
第一章 概 述
一、显微制片技术的发展概况
显微镜发展：
超薄切片技术
• 1934年，第一台电镜诞生（德国） • 1939年，德国Siemens公司生产第一台商品电镜（10nm）
• 我国1958年开始制造电镜 点分辨率优于0.3nm
• 上世纪50-70年代，制成多种用途显微镜
？ 生物实验技术
方法学
生物显微技术
生物学研究的基础 实验方法
研究生物体在形态学和功能方 面的基础研究方法。目的是为 在显微镜下有效地观察生物体 提供适当的标本。
淋巴囊肿病毒病
光镜技术
电镜技术
组织化学技术
免疫组织化学技术
大竹蛏肠上皮
碱性磷酸酶 酸性磷酸酶
课程结构与内容：
第一篇 显微制片技术的一般原理与方法 第二篇 显微镜与显微摄影技术
SUCCESS
THANK YOU
2020/12/13
可编辑
13
扫描探针显微镜
扫
硅表面结构
描
隧 道 显 微 镜 原
Bining 和 Rohner （1982）， 获得了1986年的诺 贝尔奖 分辨率10-9m
理
第一章 概 述
二、制片方法的种类
1. 非切片法：在制片过程中不经过切片机切片而制成
标本。 如：整体制片法，涂片法，浸泽分离法，压片法等
一、显微制片技术的发展概况
生物学
研究方法
研究工具 标本制备技术
显微镜
固定 染色 切片技术
第一章 概 述
一、显微制片技术的发展概况
0.2μm
显微镜发展：20世纪30年代，光学显微镜分辨率达到极限
1590
Janssen
1665
Robert Hooke Cella
（cell）
1667
Leeuwenhoek
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（一）切片法的一般过程（石蜡包埋切片法为例） 2. 冲洗与保存
据所使用固定剂的不同选用适当的溶剂将固定剂洗净。 70%Alc（长期保存可在70%Alc中加10%甘油）中保存 。
第一章 概 述
三、制片技术的一般概述
（一）切片法的一般过程（石蜡包埋切片法为例） 3. 脱水： 有利于保存或后面的透明和透蜡处理 。 70%Alc中可长期保存，在80%Alc中可隔夜。 4.透明：将脱水剂替换出来，便于下一步透蜡。 5.透蜡、包埋
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
暗视野显微镜 相差显微镜
微分干涉显微镜
荧光显微镜
数字摄影显微镜
显微操纵系统 （倒置显微镜）
激光扫描共聚焦显微镜
新型扫描显微成像系统 • 克服了光镜与电镜的不足 •具有纵向分辨率，对样品进行
无损伤的“光学切片” ，“显微CT” • 对每一层面的信息进行处理和分析 • 三维结构的重组和立体结构的分析 • 具备时间分辨力，可对观察标本进行动态观察
300×，细菌、血球、精子
第一章 概 述
一、显微制片技术的发展概况
标本制备技术：
固定方面 ： 单一固定剂
混合固定剂
19世纪，氯化汞、铬酸、冰醋酸、酒精、重 铬酸钾、四氧化锇、甲醛 Flemming、Bouin
染色方面： 藏红花 胭脂红、苏木精
1862年，Beneke，苯胺染料
组织学革命
切片技术方面： 徒手切片法