细菌生理生化实验
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原理:
有些细菌能产生尿素酶,将尿素分解、产生2个分子得氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色。尿素酶不就是诱导酶,因为不论底物尿素就是否存在,细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7、０。
培养基配制方法：
蛋白胨:1 g；NaCｌ:5 g；KＨ2PO4:２g ;葡萄糖1 g ;琼脂:15 g;酚红:0、０12g;蒸馏水100０ml。
结果记录:阳性:+,阴性：-。
（五）菌膜形成试验
有些菌在液体培养基中能形成菌膜，利用这一特征可进行不同细菌得区别。
培养基配制方法:蛋白胨:5g;氯化钠:5g；牛肉膏:１０g;蒸馏水：1000mL;pH :7、2。121℃灭菌15~3０ｍin。
试验方法:接种后于30℃培养2４小时，观察培养物就是否有菌膜形成,有菌膜为阳性。
（六)明胶(Geｌａtin)液化试验
原理:
有些细菌具有明胶酶(亦称类蛋白水解酶),能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸,失去凝胶性质而液化。
培养基配制方法:蛋白胨:5g，明胶:1２0ｇ，蒸馏水:100０mＬ。PＨ:7、2~7、４,分装试管,毎管装约４～５ｃm,11５℃灭菌2０ｍin。
试验方法:
淀粉水解系逐步进行得过程,因而试验结果与菌种产生淀粉酶得能力、培养时间,培养基含有淀粉量与pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH７、2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱,因而以临用时制备为妥。
结果记录:分解:+，不分解:-。
(三)Ｖ-P试验
原理：
菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下,被空气中得氧氧化为二乙酰,二乙酰与蛋白胨中得胍基生成红色化合物，称V－Ｐ(+)反应。
(NＨ4)２HPO4:1g ,MgSＯ4：0、2g,KCl:0、2g，酵母膏：0、２g,糖(醇、糖苷):1%水洗琼脂:5～6g ,蒸馏水:1000ｍＬ,溴甲酚紫：0、4％乙醇液2ｍL,PH:６、８～７、0。先调ＰH后再加指示剂。
将以上培养基分装试管,培养基高度约为4~5cm ,1１5℃灭菌20miｎ。
挑取18~2４h待试菌培养物,以较大量穿刺接种于明胶高层约２/3深度。于2０～２2℃培养7~14天。明胶高层亦可培养于3６±1℃。每天观察结果,若因培养温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观察其就是否被细菌液化,如确被液化，即为试验阳性。否则为阴性。
（七)尿酶(Urease)试验
试剂:甲基红:0、1g,９5%乙醇:３00mL,蒸馏水:200mL。
试验方法：
挑取新得待试纯培养物少许,接种于通用培养基,培养于3６±１°C或30°C(以３0°C较好）３～5天,从第二天起,每日取培养液1ｍl,加甲基红指示剂１～2滴,阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5天仍为阳性、即可判定结果。
细菌生理生化试验—小木虫
微生物生理生化反应就是指用化学反应来测定微生物得代谢产物,生理生化反应常用来鉴别一些在形态与其它方面不易区分得微生物。因此微生物生理生化反应就是微生物分类鉴定中得重要依据之一，微生物鉴定中常用得生理生化反应如下所示:
(一)糖、醇发酵试验
原理:
不同微生物分解利用糖类得能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者,或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。有些细菌分解某些糖(醇、苷）产酸(符号:＋)、产气(符号:○)，培养基由紫(蓝)变黄(指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄得结果),并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄;有些不分解糖类（符号:－），培养基仍为紫（蓝)色。
培养基Fra Baidu bibliotek制方法:
蛋白胨5g；葡萄糖５g;ＮａCl(K2ＰO4)：5ｇ；蒸馏水:1000mL;PH:7、０～7、２,分装试管,毎管装约4～5cm，1１5℃灭菌2０mｉn。
试剂：４0%NａOH(或ＫOH),a-萘酚。
试验方法：
将试验菌接种于上述培养基,于3６±１°C培养4天、培养液2、5mｌ先加入a萘酚(２－na-phthol)纯酒精溶液０、6ml,再加40％氢氧化钾水溶液0、２mｌ，摇动２～5ｍin，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现,静置于室温或36±1°Ｃ恒温箱，如2ｈ内仍不显现红色、可判定为阴性。
结果记录:阳性:+,阴性:-。
(四）甲基红(MethylRed)试验
原理：
有些细菌能发酵葡萄糖,在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸,进一步分解中,由于糖代谢得途径不同，可产生乳酸,琥珀酸、醋酸与甲酸等大量酸性产物,可使培养基ＰＨ值下降至pH4、5以下，使甲基红指示剂变红。
培养基配制方法:
与V－P试验培养基一致。
结果记录:
产酸:+，产气:○,不产酸长气：-。
(二)淀粉水解试验
原理：
某些细菌可以产生分解淀粉得酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后,遇碘不再变蓝色。
培养基配制:
牛肉膏5g;NaCｌ:5g;可溶性淀粉5g;琼脂：20g；蒸馏水1００0mＬ。ＰＨ：7、2
121℃灭菌20mｉn。
试验方法：
以18~2４h得纯培养物,点接于淀粉琼脂平板(一个平板可分区接种)或直接移种于淀粉肉汤中,于3６±1℃培养24～4８ｈ，或于20℃培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面,若为液体培养物,则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果,阳性反应(淀粉被分解)为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明圈、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明圈或肉汤呈深蓝色。
培养基配制:
一般细菌常用休与李夫森二氏培养基：
蛋白胨:2ｇ,Ｋ2HPO4 :０、2ｇ,NaCｌ:5g ,糖(醇、糖苷）：１％,水洗琼脂:５～６ｇ，蒸馏水:1000mL,PH:6、8～7、０,溴百里酚蓝：１%水溶液3mL（先用少量得9５%乙醇溶解后,再加水配成１%水溶液)。先调PＨ后再加指示剂。
芽孢杆菌培养基配制:
测定得糖(醇、糖苷)类可以包括:葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖(1、5％)、半乳糖(1、5%)、D-山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。
注意：以上亦可用液体培养基。
接种与观察结果:
用1８～24h得幼龄菌种，用穿刺针接种于培养基中，适温培养1d,3ｄ,5d后观察,颜色变黄为阳性,不变为阴性;有气泡产生为产气。
有些细菌能产生尿素酶,将尿素分解、产生2个分子得氨,使培养基变为碱性,酚红呈粉红色。尿素酶不就是诱导酶,因为不论底物尿素就是否存在,细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7、０。
培养基配制方法：
蛋白胨:1 g；NaCｌ:5 g；KＨ2PO4:２g ;葡萄糖1 g ;琼脂:15 g;酚红:0、０12g;蒸馏水100０ml。
结果记录:阳性:+,阴性：-。
（五）菌膜形成试验
有些菌在液体培养基中能形成菌膜，利用这一特征可进行不同细菌得区别。
培养基配制方法:蛋白胨:5g;氯化钠:5g；牛肉膏:１０g;蒸馏水：1000mL;pH :7、2。121℃灭菌15~3０ｍin。
试验方法:接种后于30℃培养2４小时，观察培养物就是否有菌膜形成,有菌膜为阳性。
（六)明胶(Geｌａtin)液化试验
原理:
有些细菌具有明胶酶(亦称类蛋白水解酶),能将明胶先水解为多肽，又进一步水解为氨基酸,失去凝胶性质而液化。
培养基配制方法:蛋白胨:5g，明胶:1２0ｇ，蒸馏水:100０mＬ。PＨ:7、2~7、４,分装试管,毎管装约４～５ｃm,11５℃灭菌2０ｍin。
试验方法:
淀粉水解系逐步进行得过程,因而试验结果与菌种产生淀粉酶得能力、培养时间,培养基含有淀粉量与pH等均有一定关系。培养基pH必须为中性或微酸性，以pH７、2最适。淀粉琼脂平板不宜保存于冰箱,因而以临用时制备为妥。
结果记录:分解:+，不分解:-。
(三)Ｖ-P试验
原理：
菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸缩合,脱羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下,被空气中得氧氧化为二乙酰,二乙酰与蛋白胨中得胍基生成红色化合物，称V－Ｐ(+)反应。
(NＨ4)２HPO4:1g ,MgSＯ4：0、2g,KCl:0、2g，酵母膏：0、２g,糖(醇、糖苷):1%水洗琼脂:5～6g ,蒸馏水:1000ｍＬ,溴甲酚紫：0、4％乙醇液2ｍL,PH:６、８～７、0。先调ＰH后再加指示剂。
将以上培养基分装试管,培养基高度约为4~5cm ,1１5℃灭菌20miｎ。
挑取18~2４h待试菌培养物,以较大量穿刺接种于明胶高层约２/3深度。于2０～２2℃培养7~14天。明胶高层亦可培养于3６±1℃。每天观察结果,若因培养温度高而使明胶本身液化时应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观察其就是否被细菌液化,如确被液化，即为试验阳性。否则为阴性。
（七)尿酶(Urease)试验
试剂:甲基红:0、1g,９5%乙醇:３00mL,蒸馏水:200mL。
试验方法：
挑取新得待试纯培养物少许,接种于通用培养基,培养于3６±１°C或30°C(以３0°C较好）３～5天,从第二天起,每日取培养液1ｍl,加甲基红指示剂１～2滴,阳性呈鲜红色，弱阳性呈淡红色，阴性为黄色。迄至发现阳性或至第5天仍为阳性、即可判定结果。
细菌生理生化试验—小木虫
微生物生理生化反应就是指用化学反应来测定微生物得代谢产物,生理生化反应常用来鉴别一些在形态与其它方面不易区分得微生物。因此微生物生理生化反应就是微生物分类鉴定中得重要依据之一，微生物鉴定中常用得生理生化反应如下所示:
(一)糖、醇发酵试验
原理:
不同微生物分解利用糖类得能力有很大差异，或能利用或不能利用，能利用者,或产气或不产气。可用指示剂及发酵管检验。有些细菌分解某些糖(醇、苷）产酸(符号:＋)、产气(符号:○)，培养基由紫(蓝)变黄(指示剂溴甲酚紫或溴百里酚蓝由紫或蓝遇酸变黄得结果),并有气泡；有些产酸，仅培养基变黄;有些不分解糖类（符号:－），培养基仍为紫（蓝)色。
培养基Fra Baidu bibliotek制方法:
蛋白胨5g；葡萄糖５g;ＮａCl(K2ＰO4)：5ｇ；蒸馏水:1000mL;PH:7、０～7、２,分装试管,毎管装约4～5cm，1１5℃灭菌2０mｉn。
试剂：４0%NａOH(或ＫOH),a-萘酚。
试验方法：
将试验菌接种于上述培养基,于3６±１°C培养4天、培养液2、5mｌ先加入a萘酚(２－na-phthol)纯酒精溶液０、6ml,再加40％氢氧化钾水溶液0、２mｌ，摇动２～5ｍin，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现,静置于室温或36±1°Ｃ恒温箱，如2ｈ内仍不显现红色、可判定为阴性。
结果记录:阳性:+,阴性:-。
(四）甲基红(MethylRed)试验
原理：
有些细菌能发酵葡萄糖,在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸,进一步分解中,由于糖代谢得途径不同，可产生乳酸,琥珀酸、醋酸与甲酸等大量酸性产物,可使培养基ＰＨ值下降至pH4、5以下，使甲基红指示剂变红。
培养基配制方法:
与V－P试验培养基一致。
结果记录:
产酸:+，产气:○,不产酸长气：-。
(二)淀粉水解试验
原理：
某些细菌可以产生分解淀粉得酶,把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后,遇碘不再变蓝色。
培养基配制:
牛肉膏5g;NaCｌ:5g;可溶性淀粉5g;琼脂：20g；蒸馏水1００0mＬ。ＰＨ：7、2
121℃灭菌20mｉn。
试验方法：
以18~2４h得纯培养物,点接于淀粉琼脂平板(一个平板可分区接种)或直接移种于淀粉肉汤中,于3６±1℃培养24～4８ｈ，或于20℃培养5天。然后将碘试剂直接滴浸于培养表面,若为液体培养物,则加数滴碘试剂于试管中。立即检视结果,阳性反应(淀粉被分解)为琼脂培养基呈深蓝色、菌落或培养物周围出现无色透明圈、或肉汤颜色无变化。阴性反应则无透明圈或肉汤呈深蓝色。
培养基配制:
一般细菌常用休与李夫森二氏培养基：
蛋白胨:2ｇ,Ｋ2HPO4 :０、2ｇ,NaCｌ:5g ,糖(醇、糖苷）：１％,水洗琼脂:５～６ｇ，蒸馏水:1000mL,PH:6、8～7、０,溴百里酚蓝：１%水溶液3mL（先用少量得9５%乙醇溶解后,再加水配成１%水溶液)。先调PＨ后再加指示剂。
芽孢杆菌培养基配制:
测定得糖(醇、糖苷)类可以包括:葡萄糖、蔗糖、甘露糖、乳糖(1、5％)、半乳糖(1、5%)、D-山梨醇、果糖、阿拉伯糖、麦芽糖、纤维二糖、木糖、水杨苷等。
注意：以上亦可用液体培养基。
接种与观察结果:
用1８～24h得幼龄菌种，用穿刺针接种于培养基中，适温培养1d,3ｄ,5d后观察,颜色变黄为阳性,不变为阴性;有气泡产生为产气。