硫酸铜对大蒜根尖细胞微核效应的实验

硫酸铜对大蒜根尖细胞微核效应的研究

一、原理

微核(micronuclei)简称MCN,是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应有主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，整条染色体或几条染色体也能形成微核。

二、步骤：

1、大蒜幼根的培养：提前3~5天进行培养，将大蒜瓣剥去外边膜质枯皮，下端可见许多微微凸起的根原体，将蒜瓣架在烧杯（大小与蒜瓣适宜）口上，杯中盛满清水，使蒜瓣的下部浸入水中，置温暖处，注意每天换水，经3~5天后，即可长出1-2cm的嫩根。

2、处理根尖：每组选择6-8粒发芽良好的种子，用配制好的不同浓度的硫酸铜溶液（（（（1g/L、、、、5g/L、、、、10g/L））））染毒处理6小时后（使根尖完全浸入处理水样中，）取出后用蒸馏水冲洗（3次,每次2-3分钟），并移至蒸馏水中修复培养24小时（蒸馏水浸住根尖）。，对照用自来水处理，处理时间24h。

3、恢复培养：处理后的根尖用自来水浸洗3次，每次2-3min，洗净后在水中恢复培养24h。

4、固定：用甲醛：冰醋酸（3：1）固定液固定24h后弃去固定液，或换入70％酒精中保存。

5、酸解：弃去固定液，用清水漂洗2-3次，吸净水，加入6M盐酸，于室温解离10min，弃去盐酸，漂洗根尖2-3次，彻底洗净盐酸。

6、染色：截下1-2mm长的根尖，滴加石炭酸品红染液，染色10min，加盖玻片，压片观察。

三、理论补充

1、微核是无着丝点的染色体断片，在有丝分裂后期不能向两极移动，所以游离于细胞质中，在间期细胞核形成时，即可在它附近看到一到几个很小的圆形结构，直径大约是细胞直径的1／20－1／5，这就是微核（micronucleus）。微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。

3、固定是借助于物理方法或化学药剂的作用，迅速透入组织和细胞将之杀死，并且使其结构和内含物如：蛋白质，脂肪，糖类以及核物质与细胞器等，在形态结构上尽可能保持生活时的完整和真实状态，同时更易于染色，可以较清楚的显现细胞在生活时不易看清的结构。

4、分离的作用是去除未固定的蛋白质, 同时使胞间层的果胶类物质解体，细胞分散而易于观察。

实验结果

3.2 CuSO4溶液下蚕豆根尖微核数的统计

CuSO4浓度（g/L）0（对照组）1 5 10

有无微核无有（少）无无

3.3 由实验结果可以看到，对照组没有出现微核，CuSO4溶液浓度在1g/L的时候，蚕豆根尖细胞产生微核，而在5g/L和10g/L硫酸铜溶液时没有微核出现，原因可能是：高浓度的重金属溶液处理蚕豆根尖导致微核率下降，但细胞受损伤的程度更为严重，使细胞周期不能正常运转，细胞不能得到更新，植物体生命活动受到更严重的影响。