蜜蜂囊状幼虫病病毒的基因型分析
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１ ２ 方 法 ．
１２ １ Ｒ ．． ＮＡ 的 提 取 取 样 本 浸 出 液 ５ Ｌ～ ０肚 １ ０ Ｌ Ｔ ｉ ｌ １ｍＬ， ０ 加 ｒ ｏ 至 ｚ 混匀 后室 温 静置 １ ｎ ５ｍｉ ，
加 入 ２ ０“ ５ Ｌ氯仿充 分振 荡后 静置 １ ｎ 在 ４℃以 ５ｍｉ，
１ ０ ／ ｎ 心 １ ｉ。取 上清 加 入 等体 积 异 丙 ２０ ０ｒｍｉ离 ５ｒ ｎ Leabharlann Baidu 醇 ， 匀 ， 一２ 混 在 Ｏ℃下静 置 １ｈ 在 ４℃ 以 １ ０ ／ ， ２０ ０ｒ
关 键词 ： 囊状 幼 虫病病毒 ； ＮＡ 依 赖 的 Ｒ Ｒ ＮＡ 聚合酶 基 因 ； 因型 ； 基 蜜蜂
中图 分 类 号 ：８ ２ ２ ￥ ５ ．７ 文献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７５ ３ （０ ２ ０—０ １０ １０ —０ ８ ２ １） １０ ４ —４
蜜 蜂囊 状幼 虫病 （ ａｂ ｏ ｄ 是 由囊 状 幼 虫 病 病 Ｓ ｅｒ ｏ ） 毒 （ ａ ｂｏ ｄｖｒ ｓＳ Ｖ） 染 引起 的传 染 病 。该 病 Ｓ ｃ ｒ ｏ ｉ ， Ｂ 感 ｕ 最早 于 １ １ 年 发 现于西 方蜜 蜂 （ ｐ ｓ ｌ ｆ ｒ ， ９３ Ａ ｉ ｍｅｌ ｅａ） ｉ
幼虫 病 的发病 率仍 在 ５ ～７ 。 Ｏ Ｏ／ ９ ６
已有 的研 究 表 明 ， 离 自不 同蜜 蜂 种 类 和 地 理 分 种群 蜜蜂 宿主 的囊状 幼虫 病病 毒 的基 因组 序 列存 在 差异 。Ｇｒｂ ｎ ｔｉｅ ａ ｅ ｓｅｎ ｒＥ等 ［ 依 据 扩 增 自 ６个 国家 １ １ ６份 西蜂 样 本 的 占基 因组 ３ ． 的 不 同 区域 的 ５ ７７ 个 片段 序 列 ， Ｓ Ｖ 进 行 系 统进 化 分 析 ， 致 性 地 对 Ｂ 一 得 出至少 可将 其 分成 欧 洲 型 、 东 型 和 南 非 型 ３个 远 基 因型 。 中蜂 患囊 状幼 虫病 习惯 上称 为 中蜂 囊状 幼
１１ １ 样 本 ．．
采 自重 庆 地 区 中蜂 场 具 有 典 型囊 状
幼 虫病 特征 的死 幼虫 ， 样本 于 一２ Ｏ℃保 存 。 １ １ ２ 序 列 应 用 ＲＴ Ｐ Ｒ 扩 增 自所 采 集 的 样 ． ． —Ｃ
或 ｅＢｎ Ｂ 具 主要 传染 病 。中蜂 （ ｉ ｃｒ ｎ ｅａ ａ） Ａｐ ｓ ｅａ ａ ｃｒ ｎ 蜂群 囊 状 本 ， 下载 自 Ｇ ｎ ａ ｋ登 录 的 Ｓ Ｖ 序 列 ， 体 参 见
ＲＮ 聚合酶基 因片段序 列 对该病 毒进行 基 因型 分析 。结 果表 明 ， 病毒 主 要 分 为 欧洲 型 、 东型 和 南非 型 Ａ 该 远 ３个基 因型 。欧洲基 因型分为 中欧和 英 国亚型 ， 东基 因型 分 为 东方 蜜蜂 和 西蜂 亚 型 。提 示 蜜蜂 囊状 幼 虫 远
病 病毒 总体 上按 地域分 型 。
动物 医学 进展 。０ ２ ３ （ ） ４ —４ ２ １ ，３ １ ： １４
Ｐｒ ｇｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｉｉ ｏ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄ ｃｎｅ
蜜 蜂 囊 状 幼 虫 病 病 毒 的基 因型 分 析
曹 兰 沈克 飞 张 邑帆 罗 文 华 王瑞 生 任 勤 郭 军 ， 志冬 。 戴 荣 国 ， ， ， ， ， ， 王 ，
组分 ［ 、 原性 上有 所 不 同 ， 不 发 生 交 叉 感 染 。 ３抗 ］ 且 ］ 对 流行 于 国内 的 Ｃ Ｂ 基 因 组序 列 的分 析 发 现 ， ＳＶ 不 同地 区 Ｃ Ｂ 分 离 株 存 在 序 列 差 异［ 。那 么 ， ＳＶ ５ 分
ｍｉ 心 １ ｎ ｎ离 ０ｍｉ 。沉 淀 以 ７ ０ｍＬ Ｌ 乙醇 洗 １次 ， ０ ／ 吸 干上清 ， 淀溶解 于 １ ０ Ｌ经 Ｄ Ｐ 沉 ０ Ｅ Ｃ处理 的去 离
国的印度 蜜蜂 体 内分 离 到 Ｓ Ｖ。在流 行 的早 期 ， Ｂ 囊 状幼 虫病 对蜂 群 损 害较 大 ， 之后 蜂 群 会 产 生 一 定 的
１ 材 料 与方 法
１ １ 材 料 ．
抵抗 性 ， 群 发病 率 降低 。 现在 一 般 认 为 该 病 不 是 蜂
西蜂 的 主 要 疾 病 。然 而 ， 状 幼 虫 病 对 东 方 蜜 蜂 囊 （ ｉ ｃｒ ｎ 的危 害 仍 十 分 严 重 ， 侵 害幼 虫 的 Ａｐ ｓ ｅａ ａ） 是
虫病 ， 病 原 称 为 中 蜂 囊 状 幼 虫 病 病 毒 （ ｈｎ ｓ 其 Ｃ ｉｅｅ
ｓｃ ｒ ｏ ｉ ｓ Ｃ Ｂ 。早 期 研 究 指 出 ， Ｓ Ｖ 和 ａ ｂｏ ｄｖｒ ， Ｓ Ｖ） ｕ Ｃ Ｂ Ｓ Ｖ 除 了在生 理 和生 化 特 性 上 相似 外 ［ ， 蛋 白质 Ｂ ２ 在 ］
（ ．重庆市畜牧科学院 ， １ 重庆荣 昌 ４ ２ ６ ；．吉林省舒化市上 营农业 技术 推广站 ， ０ ４０ ２ 吉林舒化 １２０） ３ ６７
摘 要 ： 了解 蜜蜂 囊状 幼 虫病 病 毒 的遗 传 进 化 规律 ， 据 Ｓ １ ｆＳ １ ｒ引物 所 扩 增 的 Ｒ 为 依 Ｂ ４／ Ｂ ５ ＮＡ 依 赖 的
Ｓ Ｖ ＲＮＡ 依 赖 的 ＲＮＡ 聚 合 酶 （ ＮＡ ｄ ｐ ｎ ｅ ｔ Ｂ Ｒ ｅ ｅ ｄ ｎ ＲＮＡ ｐ ｌｍｅａｅ Ｒ Ｒ ） 因 片 段 序 列 ， 于 系 统 ｏｙ ｒｓ ， ｄ ｐ 基 基
进 化 角度分 析囊 状幼 虫病 病毒 的基 因型 关系 。
１ ７ 年 中国广东暴 发 中蜂囊 状 幼虫 病 ，９ １年从 泰 ９１ １８
表 １ 。
１１３ 试剂 ．．
ｒａ Ｎ 聚合酶 、Ｎ Ｐ及 ｐ １一 Ｔ ｑＤ Ａ ｄＴ ＭＤ ８Ｔ、
ＴｉｌＡ ｒ ｏ 、 ＭＶ Ｒ ｖｒｅＴａ ｓｒ ｔ ｅ Ｒ ｓ ｈｂ ｏ 为 ｚ ｅｅｓ ｒｎｃ ｐａ 、 Ｎａｅｉ ｉ ｔｒ ｉ ｓ ｎ ｉ
宝生物工程 （ 大连） 限公司产品。 有
１２ １ Ｒ ．． ＮＡ 的 提 取 取 样 本 浸 出 液 ５ Ｌ～ ０肚 １ ０ Ｌ Ｔ ｉ ｌ １ｍＬ， ０ 加 ｒ ｏ 至 ｚ 混匀 后室 温 静置 １ ｎ ５ｍｉ ，
加 入 ２ ０“ ５ Ｌ氯仿充 分振 荡后 静置 １ ｎ 在 ４℃以 ５ｍｉ，
１ ０ ／ ｎ 心 １ ｉ。取 上清 加 入 等体 积 异 丙 ２０ ０ｒｍｉ离 ５ｒ ｎ Leabharlann Baidu 醇 ， 匀 ， 一２ 混 在 Ｏ℃下静 置 １ｈ 在 ４℃ 以 １ ０ ／ ， ２０ ０ｒ
关 键词 ： 囊状 幼 虫病病毒 ； ＮＡ 依 赖 的 Ｒ Ｒ ＮＡ 聚合酶 基 因 ； 因型 ； 基 蜜蜂
中图 分 类 号 ：８ ２ ２ ￥ ５ ．７ 文献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７５ ３ （０ ２ ０—０ １０ １０ —０ ８ ２ １） １０ ４ —４
蜜 蜂囊 状幼 虫病 （ ａｂ ｏ ｄ 是 由囊 状 幼 虫 病 病 Ｓ ｅｒ ｏ ） 毒 （ ａ ｂｏ ｄｖｒ ｓＳ Ｖ） 染 引起 的传 染 病 。该 病 Ｓ ｃ ｒ ｏ ｉ ， Ｂ 感 ｕ 最早 于 １ １ 年 发 现于西 方蜜 蜂 （ ｐ ｓ ｌ ｆ ｒ ， ９３ Ａ ｉ ｍｅｌ ｅａ） ｉ
幼虫 病 的发病 率仍 在 ５ ～７ 。 Ｏ Ｏ／ ９ ６
已有 的研 究 表 明 ， 离 自不 同蜜 蜂 种 类 和 地 理 分 种群 蜜蜂 宿主 的囊状 幼虫 病病 毒 的基 因组 序 列存 在 差异 。Ｇｒｂ ｎ ｔｉｅ ａ ｅ ｓｅｎ ｒＥ等 ［ 依 据 扩 增 自 ６个 国家 １ １ ６份 西蜂 样 本 的 占基 因组 ３ ． 的 不 同 区域 的 ５ ７７ 个 片段 序 列 ， Ｓ Ｖ 进 行 系 统进 化 分 析 ， 致 性 地 对 Ｂ 一 得 出至少 可将 其 分成 欧 洲 型 、 东 型 和 南 非 型 ３个 远 基 因型 。 中蜂 患囊 状幼 虫病 习惯 上称 为 中蜂 囊状 幼
１１ １ 样 本 ．．
采 自重 庆 地 区 中蜂 场 具 有 典 型囊 状
幼 虫病 特征 的死 幼虫 ， 样本 于 一２ Ｏ℃保 存 。 １ １ ２ 序 列 应 用 ＲＴ Ｐ Ｒ 扩 增 自所 采 集 的 样 ． ． —Ｃ
或 ｅＢｎ Ｂ 具 主要 传染 病 。中蜂 （ ｉ ｃｒ ｎ ｅａ ａ） Ａｐ ｓ ｅａ ａ ｃｒ ｎ 蜂群 囊 状 本 ， 下载 自 Ｇ ｎ ａ ｋ登 录 的 Ｓ Ｖ 序 列 ， 体 参 见
ＲＮ 聚合酶基 因片段序 列 对该病 毒进行 基 因型 分析 。结 果表 明 ， 病毒 主 要 分 为 欧洲 型 、 东型 和 南非 型 Ａ 该 远 ３个基 因型 。欧洲基 因型分为 中欧和 英 国亚型 ， 东基 因型 分 为 东方 蜜蜂 和 西蜂 亚 型 。提 示 蜜蜂 囊状 幼 虫 远
病 病毒 总体 上按 地域分 型 。
动物 医学 进展 。０ ２ ３ （ ） ４ —４ ２ １ ，３ １ ： １４
Ｐｒ ｇｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｉｉ ｏ ｅ ｓ ｉ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄ ｃｎｅ
蜜 蜂 囊 状 幼 虫 病 病 毒 的基 因型 分 析
曹 兰 沈克 飞 张 邑帆 罗 文 华 王瑞 生 任 勤 郭 军 ， 志冬 。 戴 荣 国 ， ， ， ， ， ， 王 ，
组分 ［ 、 原性 上有 所 不 同 ， 不 发 生 交 叉 感 染 。 ３抗 ］ 且 ］ 对 流行 于 国内 的 Ｃ Ｂ 基 因 组序 列 的分 析 发 现 ， ＳＶ 不 同地 区 Ｃ Ｂ 分 离 株 存 在 序 列 差 异［ 。那 么 ， ＳＶ ５ 分
ｍｉ 心 １ ｎ ｎ离 ０ｍｉ 。沉 淀 以 ７ ０ｍＬ Ｌ 乙醇 洗 １次 ， ０ ／ 吸 干上清 ， 淀溶解 于 １ ０ Ｌ经 Ｄ Ｐ 沉 ０ Ｅ Ｃ处理 的去 离
国的印度 蜜蜂 体 内分 离 到 Ｓ Ｖ。在流 行 的早 期 ， Ｂ 囊 状幼 虫病 对蜂 群 损 害较 大 ， 之后 蜂 群 会 产 生 一 定 的
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抵抗 性 ， 群 发病 率 降低 。 现在 一 般 认 为 该 病 不 是 蜂
西蜂 的 主 要 疾 病 。然 而 ， 状 幼 虫 病 对 东 方 蜜 蜂 囊 （ ｉ ｃｒ ｎ 的危 害 仍 十 分 严 重 ， 侵 害幼 虫 的 Ａｐ ｓ ｅａ ａ） 是
虫病 ， 病 原 称 为 中 蜂 囊 状 幼 虫 病 病 毒 （ ｈｎ ｓ 其 Ｃ ｉｅｅ
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（ ．重庆市畜牧科学院 ， １ 重庆荣 昌 ４ ２ ６ ；．吉林省舒化市上 营农业 技术 推广站 ， ０ ４０ ２ 吉林舒化 １２０） ３ ６７
摘 要 ： 了解 蜜蜂 囊状 幼 虫病 病 毒 的遗 传 进 化 规律 ， 据 Ｓ １ ｆＳ １ ｒ引物 所 扩 增 的 Ｒ 为 依 Ｂ ４／ Ｂ ５ ＮＡ 依 赖 的
Ｓ Ｖ ＲＮＡ 依 赖 的 ＲＮＡ 聚 合 酶 （ ＮＡ ｄ ｐ ｎ ｅ ｔ Ｂ Ｒ ｅ ｅ ｄ ｎ ＲＮＡ ｐ ｌｍｅａｅ Ｒ Ｒ ） 因 片 段 序 列 ， 于 系 统 ｏｙ ｒｓ ， ｄ ｐ 基 基
进 化 角度分 析囊 状幼 虫病 病毒 的基 因型 关系 。
１ ７ 年 中国广东暴 发 中蜂囊 状 幼虫 病 ，９ １年从 泰 ９１ １８
表 １ 。
１１３ 试剂 ．．
ｒａ Ｎ 聚合酶 、Ｎ Ｐ及 ｐ １一 Ｔ ｑＤ Ａ ｄＴ ＭＤ ８Ｔ、
ＴｉｌＡ ｒ ｏ 、 ＭＶ Ｒ ｖｒｅＴａ ｓｒ ｔ ｅ Ｒ ｓ ｈｂ ｏ 为 ｚ ｅｅｓ ｒｎｃ ｐａ 、 Ｎａｅｉ ｉ ｔｒ ｉ ｓ ｎ ｉ
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