网状纤维(RF)染色实验

网状纤维（RF）染色
一、网状纤维（RF）染色简介
网状纤维（reticular fiber，RF）在疏松结缔组织中含量较少，纤维较细，有分支，彼此交织成网状。

用浸银法可将纤维染成黑色，故又称嗜银纤维（argyrophilic fiber）。

电镜观察，网状纤维具有等间距的横纹结构，其化学成分也是胶原蛋白，和胶原纤维相似。

网状纤维的嗜银性是由于包在原纤维上的糖蛋白所致。

二、染色原理
氨银液被组织吸咐与组织中的蛋白结合，经甲醛还原成黑色的金属银沉积于组织内及表面。

用氯化金调色后，再用硫代硫酸钠液洗去未还原的银盐，从而将组织内的网状纤维清晰地显示出来。

三、染色步骤
1、切片脱蜡至水，蒸馏水洗
2、用0.5%高锰酸钾氧化5min
3、自来水洗，继用蒸馏水洗
4、用2%草酸漂白切片2min
5、自来水洗，蒸馏水洗
6、2%硫酸铁铵媒染5min
7、水洗，蒸馏水洗
8、滴入氨性银溶液浸染3-5min
9、蒸馏水洗数次
10、10%甲醛液还原5-10min
11、水洗2min
12、用核固红染色10-15min
13、水洗10min，各级酒精脱水，常规透明，中性树胶封固
14、结果：网状纤维黑色，核红色，胶原纤维黄棕色。

三、样本说明
1、石蜡切片
取材：1、组织离体后需及时固定；2、组织标本不宜过大、过厚。

固定：1、固定液：10%福尔马林（4%多聚甲醛）或10%中性甲醛；2、用量：一般
固定液的量与组织体积比为10:1～20:1；3、固定：适宜的固定时间，主要根据材料
的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。

保存：切片经60℃烤片3-5小时后，可于常温或4℃干燥保存。

2、冰冻切片
取材：取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。

固定：样本冰冻切片后，应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液
中固定。

保存：固定好的切片自然风干，密封后置于-80℃、-20℃保存，尽快用于后续实验。

3、细胞块石蜡切片
细胞量较多的样品，可离心分离所需细胞，用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块，然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。

4、细胞爬片
在孔板里做的细胞爬片，爬片取出后，用PBS洗涤2次（根据研究目的，PBS洗涤
可选择不做），用4%多聚甲醛4℃固定15分钟，将表面液体吹干，置于-20℃保存。

若在短时间内即开展实验，可在加固定液后，于4℃冰箱中放置一段时间。

5、细胞涂片细胞涂片常用的固定液有95%酒精（最为常用）、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等。

四、注意事项
1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛，能使大多数抗原保存良好，适用于免疫组织化学。

2、病理实验切片最好是防脱片，以免实验过程中出现掉片。

若客户提供切片，应告
知切片有无防脱处理。

3、骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样本，实验过程中有较高的掉片几率。

4、客户可提供组织块（以10%福尔马林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定，如组织块极小请事先说明）、蜡块或切片（使用免疫组化专用切片，以避免实验过程中掉片）
5、待检测蛋白的种属、实验分组情况及实验背景资料、其他具体要求等需事先说明。

6、若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验，需进行脱钙处理。

7、浸泡在固定液中的组织样本，在运输中容器需密封，防止破碎、渗漏。