细胞生物学实验 细胞骨架的观察【精选】
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细胞（特别是真核细胞）中的骨架系统，不仅仅是活细胞的支撑 结构，决定细胞的形状，而且与细胞运动、物质运输、能量转换、信 息传递、细胞分裂、基因表达、细胞分化、极性生长等生命活动密切 相关。
细胞骨架的观察
仪器、材料与试剂
仪器：光学显微镜，温箱，细胞培养设备
材料：平皿，烧杯，载玻片（为区别细胞的正反 面，剪
细胞骨架的观察
细胞骨架的观察
实验步骤
B 植物细胞的微丝观察
1）去植物茎表皮约1cm2，放入盛有0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（pH 6.8）的 小烧杯中。
2）吸去缓冲液，用1%TritonX-100处理洋葱表皮25-40 min。 3）除去TritonX-100，用M-缓冲液充分洗3次，每次约10 min。 4）加3.0%戊二醛固定40 min。 5）用PBS洗3次，滤纸吸去残留液体。 6）0.2%考马斯亮蓝R250染色30 min。 7）用蒸馏水洗数遍，降低背景。 8）将样品置于载玻片上，加盖玻片，在光学显微镜下观察。
掉
一角），体外培养的贴壁生长细胞、植物、镊子
试剂：磷酸缓冲盐溶液（PBS，pH 7.4），.2mol/L 磷酸
盐
缓冲液（pH 6.8），M-缓冲液，1％Triton X-100
（用M-缓冲液配），0.2%考马斯亮蓝R250，3.0%戊
二
细胞骨架的观察
实验步骤
A 动物细胞的微丝观察
1）将细胞培养在盖玻片上，未致密时即可使用。取出盖玻片，用PBS 洗3次。
细胞骨架的观察
实验报告及思考题
1 画出所观察到的微丝图像。 2 说明在实验中1%TritonX-100处理细胞的作用是什么？ 3 说明M-缓冲液的作用是什么？ 4考马斯R250和G250的区别是什么？ 5 考马斯R250和鬼笔环肽对细胞骨架的染色有什么区别，各有什么
优缺点？ 6 简述微丝动态平衡过程中各种条件及作用。 7 ATP在微丝动态平衡中所起的作用是什么？
2）室温下用1%TritonX-100处理20-30 min。 3）用M-缓冲液轻轻洗细胞3次。 4）略晾干后，用3.0%戊二醛固定细胞10 min。 5）用PBS洗数次，滤纸吸干。 6）用0.2%考马斯亮蓝R250染片子30 min。蒸馏水冲洗，在空气中自然
晾干。 7）在光学显微镜下先用10×物镜再用40×物镜观察。
实验四 细胞骨架的观察
细胞生物学实验
细胞骨架的观察
• 实验目的 • 实验原理 • 仪器、材料与试剂 • 实验步骤 • 实验报告及思考题
实验目 的
掌握用考马斯亮蓝R250染色观 察动物和植物细胞微丝的方法。
细胞骨架ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ观察
实 验原理
细胞骨架（cytoskeleton）是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。 广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外 基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微丝（microfilament， MF）、微管（microtubule，MT）、中间纤维（intermediated filament，IF）。
细胞骨架的观察
仪器、材料与试剂
仪器：光学显微镜，温箱，细胞培养设备
材料：平皿，烧杯，载玻片（为区别细胞的正反 面，剪
细胞骨架的观察
细胞骨架的观察
实验步骤
B 植物细胞的微丝观察
1）去植物茎表皮约1cm2，放入盛有0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（pH 6.8）的 小烧杯中。
2）吸去缓冲液，用1%TritonX-100处理洋葱表皮25-40 min。 3）除去TritonX-100，用M-缓冲液充分洗3次，每次约10 min。 4）加3.0%戊二醛固定40 min。 5）用PBS洗3次，滤纸吸去残留液体。 6）0.2%考马斯亮蓝R250染色30 min。 7）用蒸馏水洗数遍，降低背景。 8）将样品置于载玻片上，加盖玻片，在光学显微镜下观察。
掉
一角），体外培养的贴壁生长细胞、植物、镊子
试剂：磷酸缓冲盐溶液（PBS，pH 7.4），.2mol/L 磷酸
盐
缓冲液（pH 6.8），M-缓冲液，1％Triton X-100
（用M-缓冲液配），0.2%考马斯亮蓝R250，3.0%戊
二
细胞骨架的观察
实验步骤
A 动物细胞的微丝观察
1）将细胞培养在盖玻片上，未致密时即可使用。取出盖玻片，用PBS 洗3次。
细胞骨架的观察
实验报告及思考题
1 画出所观察到的微丝图像。 2 说明在实验中1%TritonX-100处理细胞的作用是什么？ 3 说明M-缓冲液的作用是什么？ 4考马斯R250和G250的区别是什么？ 5 考马斯R250和鬼笔环肽对细胞骨架的染色有什么区别，各有什么
优缺点？ 6 简述微丝动态平衡过程中各种条件及作用。 7 ATP在微丝动态平衡中所起的作用是什么？
2）室温下用1%TritonX-100处理20-30 min。 3）用M-缓冲液轻轻洗细胞3次。 4）略晾干后，用3.0%戊二醛固定细胞10 min。 5）用PBS洗数次，滤纸吸干。 6）用0.2%考马斯亮蓝R250染片子30 min。蒸馏水冲洗，在空气中自然
晾干。 7）在光学显微镜下先用10×物镜再用40×物镜观察。
实验四 细胞骨架的观察
细胞生物学实验
细胞骨架的观察
• 实验目的 • 实验原理 • 仪器、材料与试剂 • 实验步骤 • 实验报告及思考题
实验目 的
掌握用考马斯亮蓝R250染色观 察动物和植物细胞微丝的方法。
细胞骨架ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ观察
实 验原理
细胞骨架（cytoskeleton）是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。 广义的细胞骨架包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外 基质。狭义的细胞骨架是指细胞质骨架，包括微丝（microfilament， MF）、微管（microtubule，MT）、中间纤维（intermediated filament，IF）。