葡萄糖钳夹技术

六 高胰岛素正葡萄糖钳夹技 术高葡萄糖钳夹操作流程
4.分别在两侧上肢静脉留置穿刺针，以生 理盐水维持通道，以备抽血及输注胰岛 素及20%葡萄糖。 5.分别于-30，-15，0分钟留取基础血样后， 一侧上肢置于一温度为50°C，湿度为 70%的恒温箱中以获得动脉化的静脉血 样，另一侧静脉通道用于输注胰岛素及 20%葡萄糖。
高葡萄糖钳夹操作流程4
6. 标本采集；于开始输注葡萄糖0-10分钟 内每2分钟取血测定胰岛素，以后每10 分钟取血一次，测定胰岛素。每30分钟 取血一次测定胰高糖素。实验结束后收 集实验过程中的尿液，测定尿糖含量。 7.留取部分实验中输注的葡萄糖液测定精 确的葡萄糖浓度。
结果处理 1
一） 评价B细胞功能： 1.计算第一时相胰岛素分泌（first-phase insulin release,1PH）： 1PH =∑Ins(2,4,6,8,10 mins). 2.计算第二时相胰岛素分泌（second-phase insulin release,2PH）； 2PH=∑Ins（20-150 mins）/14 3 . 最 大 胰 岛 素 分 泌 量 （ maximum insulin secretion,INS120-150）: INS120-150=∑Ins（120-150 mins）/4
葡萄糖钳夹技术的建立与应用
钳夹技术
高葡萄糖钳夹技术 高胰岛素正葡萄糖钳夹技术
DeFronzo RA,Tobin JP,Andres R.Am J Physiol,1979,237:E214-S223
相关背景知识
糖尿病是高度异质性疾病，
目前认为主要是由于胰岛素 抵抗合并胰岛B-细胞分泌胰 岛素缺陷或B-细胞分泌缺陷 伴或不伴胰岛素抵抗引起。
1. 配备20%葡萄糖液：可在10%葡萄糖液中加入 50%葡萄糖混合配制 2. 配制胰岛素输注液：根据研究对象的体重计算 胰岛素需要量，在100 ml 0.9%生理盐水中先 加入2 ml受试者的血，以防止胰岛素粘附于瓶 壁，然后加入胰岛素混合。 3. 受试者空腹12小时，早晨8点到实验室，排空 小便后仰卧于床，于整个实验过程中保持清 醒安静状态。

主要试剂
1、葡萄糖液：50%。 2、葡萄糖液：10%。 3、氯化钠溶液：0.9%。
高葡萄糖钳夹操作流程 1
配备20%葡萄糖液：可在10%葡萄糖液 中加入50%葡萄糖混合配制。 2. 令受试者排空小便后仰卧于床，整个实 验过程中保持清醒安静状态。 3. 分别在两侧上肢静脉留置穿刺针，以生 理盐水维持通道，以备抽血及输注20% 葡萄糖。 1.
原理及应用 2
同时由于大部分的内源性葡萄糖生
成被抑制，外源性葡萄糖的输注率 即被认为是组织葡萄糖的利用率， 通过计算可以得到胰岛素敏感性指 数，其与评价胰岛素敏感性的“金 标准”-----高胰岛素正葡萄糖钳夹的 相关性较好。
实验仪器：
1、输液泵一台。 2、快速血糖测定仪一台。 3、温度控制仪一台。 4、多功能计时秒表两个。
高葡萄糖钳夹操作流程 2
4.分别于-30，-15，0分钟留取基础血 样后，一侧上肢置于一温度为50°C， 湿度为70%的恒温箱中以获得动脉化 的静脉血样，另一侧静脉通道用于 输注20%葡萄糖。
高葡萄糖钳夹操作流程 3
5. 20%葡萄糖的输注分两个阶段：第一阶 段为初始剂量阶段，使血糖在14分钟内 升 高 7 . 9 mmol/L， 其 具 体 的 输 注 率 按 DeFronzo提供的体表面积经验值及实际 操作中每2分钟测得的血糖值调节。第二 阶段为维持剂量阶段，葡萄糖输注率以 实验15-150分钟内每5分钟测得的血糖值 根据负反馈原则调节，并记录调节时间。
高葡萄糖钳夹技术 的建立与应用
原理及应用 1

通过输注外源性葡萄糖使血糖浓度较空 腹状态迅速升高,并在一定时间内维持相 对平稳的高糖状态。在这种持续的高糖 状态下，可以观察到胰岛素在糖刺激后 的快速分泌相（第一相），以及随后出 现的与高糖持续时间一致的第二相分泌， 并能测定稳态下机体最大的分泌胰岛素 的能力，从而能完整的评估胰岛B细胞的 储备和分泌胰岛素的功能。
钳夹技术的优缺点评价


优点: 准确。 缺点： 复杂、昂贵、费时。
高糖钳夹在科研和临床中 的应用
1. 通过了解胰岛素的早期和晚期分泌相， 了解早期潜在的B细胞功能损害，并能直 接比较不同个体在相同的葡萄糖浓度介 导下的胰岛素分泌反应。 2. 可应用逐步高糖钳夹来获得最大的胰岛 素分泌量，了解B细胞在不同浓度葡萄糖 刺激下的分泌胰岛素的能力。
六 高胰岛素正葡萄糖钳夹技 术高葡萄糖钳夹操作流程
6. 胰岛素的输注分两个阶段：在钳夹开始10分钟 内快速输注胰岛素液使血浆胰岛素水平迅速升 高，随后140分钟内用注射泵以40m U/m2/min 速度持续输注。在此期间每5分钟测一次动脉 化的血浆葡萄糖浓度，调整20%葡萄糖输注率， 使受试者血糖值维持在正常水平，通常设置在 80-90mg/dl。 7. 标本采集；于开始输注葡萄糖0-10分钟内每2 分钟取血测定胰岛素，以后每10-20分钟取血一 次，测定胰岛素。每30分钟取血一次测定C肽、 胰高糖素、皮质醇及生长激素。
三 实验物品
1. 2. 3. 4.
5.
6.
输液管（输液泵专用）。 三通管4个。 连接管2条。 静脉留置针2个。 针筒：1ml，5ml，60ml针筒各若干个。 胰岛素针管（BD笔）。
四
1. 2. 3. 4.
主要试剂：
葡萄糖液：50%。 葡萄糖液：10%。 氯化钠溶液：0.9%。 人正规胰岛素。
五
如何评价胰岛素抵抗？
1.
2.
3.
高胰岛素正葡萄糖钳夹技术。（可 重复性好，最精确。） 微小模型法（MMT）。 各种简易指数。
如何评价B-细胞功能?
葡萄糖刺激的胰岛素分泌： 高葡萄糖钳夹、最小模型法、IVGTT、 OGTT 非糖物质刺激： 胰高糖素试验、精氨酸试验、甲苯磺丁脲 B-细胞产生的非胰岛素肽类： C-肽、胰淀素。
正糖钳夹在科研和临床中的 应用价值
1.评价机体在生理及各种病理状态下 胰岛素的敏感性。 2.了解个体胰岛素抵抗的程度，结合 其他方法研究胰岛素抵抗的部位和 机制。 3.了解糖、脂、蛋白质等物质代谢对 胰岛素敏感性的影响。
正糖钳夹在科研和临床中的 应用价值
4.了解药物及其它非药物因素对胰岛 素敏感性的影响。 5.对其它评价胰岛素敏感性的简易参 数的准确性进行评估。
高糖钳夹在科研和临床中 的应用
3.可在行高糖钳夹的同时输注其它物 质，如脂肪、氨基酸等，观察这些 物质对B细胞分泌胰岛素能力的影响。 4.对存在B细胞功能损害的人进行药物 或其他干预后，重复高糖钳夹评价 干预的效果。
高糖钳夹在科研和临床中 的应用
5.根据葡萄糖输注率及血浆胰岛素浓 度可知晓机体葡萄糖利用率，即胰 岛素敏感性。 6.高糖钳夹可作为标准，对其它有关 评价B细胞功能的简易参数的精确性 进行评估。
实验物品
1、输液管（输液泵专用）。 2、三通管3个。 3、连接管2条。 4、静脉留置针2个。 5、针筒：1ml，5ml，60ml针筒各若干个。
受试者准备
试验前晚8点钟后禁食，可少量饮水，早晨8点 到实验室，排空小便后仰卧。 试验前，将试验的性质、目的以及可能产生的不 良反应告知受试对象，并填写知情同意书。 受试者应排除肝肾疾病。 试验前三天，受试对象每日至少进食250克以上 碳水化学物，维持体重稳定。
六 高胰岛素正葡萄糖钳夹技 术高葡萄糖钳夹操作流程
8.
留取部分实验中输注的葡萄糖液 及胰岛素溶液测定精确的葡萄糖 和胰岛素浓度。
七
结果处理
1. 葡萄糖输注率（INF，mg/kg/min）:根据 输液泵调节情况及个体体重校正实际葡 萄糖浓度后计算。 INF=set(ml/min)*time(min)*200/BW*10. 2. 空间校正值（SC，mg/kg/min）： 是对 实际血糖变化时葡萄糖空间充溢或不足 的 情 况 加 以 校 正 。 SC=3.795*SA*(G1G2)/BW. 3. 葡 萄 糖 代 谢 率 （ M，mg/kg/min）： M=INF-SC，为方便读数可乘以100。
高胰岛素正葡萄糖钳夹技术
的建立与应用
一 原理及应用 1
通过持续输注外源性胰岛素

和葡萄糖，抑制内源性肝糖 产生和胰岛素分泌，达到外 源性胰岛素-葡萄糖代谢平衡 状态后，评价个体内胰岛素 对葡萄糖代谢的作用程度， 也就是胰岛素的敏感性。
二 实验仪器
1.
2.
3.
4.
5.
输液泵一台。 注射泵一 台。 快速血糖测定仪一台。 温度控制仪一台。 多功能计时秒表两个。
结果处理 2
二） 评价胰岛素敏感性： 1.葡萄糖输注率（INF，mg/kg/min）:根据 输液泵调节情况及个体体重校正实际葡 萄糖浓度后计算。 2.空间校正值（SC，mg/kg/min）： 是对实 际血糖变化时葡萄糖空间充溢或不足的 情况加以校正。
结果处理 3 二） 评价胰岛素敏感性
4.尿糖（UC，mg/kg/min）：实验过程中尿 糖的排出量。 5 . 葡 萄 糖 代 谢 率 （ M，mg/kg/min）： M=INF-SC-UC 6. 胰 岛 素 敏 感 性 指 数 （ SI）：SI=M120150/I120-150*100
1.
受试者准备：
2.
3.
试验前三天，受试对象每日至少进食 250克以上碳水化学物，维持体重稳定。 试验前晚8点钟后禁食，可少量饮水， 早晨8点到实验室，排空小便后仰卧。 试验前，将试验的性质、目的以及可能 产生的不良反应告知受试对象，并填写 知情同意书。
六 高胰岛素正葡萄糖钳夹技 术高葡萄糖钳夹操作流程