液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节
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有些样品经预处理后还不能作进样分析 ,需进行衍 生化处理 ,使一些无紫外吸收或无荧光的组分 ,经过衍生 化后能用紫外和荧光检测器检测 ,这样既提高了灵敏度 , 又改善了分离度 (质量变化) 。样品预处理的同时也会带 来一些问题 ,如样品损失 、样品被污染 、衍生化反映不完 全或多种反应物生成等 。衍生反应常会影响试验的精确 度 ,或者在整个样品预处理过程中带来误差 。
一般检测的环境 、容器 、试剂都是影响测定结果的因 素。 211 环境污染
仪器室的有害气体 、气溶液 、灰尘等等都能造成污 染 ,影响检测结果 ,这种污染很难校正 。因此 ,仪器室与 其他实验室应隔离 ,保持清洁 ,仪器室内应安装空调 ,注 意防潮 、防腐 、防震 、空气相对湿度应小于 70 %为宜 。 212 容器
古丽扎提·再努拉
(新疆计量测试研究院 ,新疆 乌鲁木齐 830011)
摘 要 :本文主要介绍对样品的前处理 ,样品的配制 ,样品预处理过程中的主要故障与解决办法 。 关键词 :液相色谱 ;样品预处理 ;故障
高效液相色谱具有分离效率高 、分析速度快和应用 范围广等特点 ,特别适合于高沸点 、大分子 、强极性和热 稳定性差的化合物的分离分析 。目前高效液相色谱已成 为化学 、生化 、医学 、工业 、农业 、环保 、商检和法检等学科 领域中重要的分离技术 ,是分析化学家和生物化学家手 中用于解决他们面临的各种实际分析和分离课题必不可 少的工具之一 。虽然在检测分析中使用了昂贵的 、性能 优越的高档精密仪器 ,但是由于在样品的前处理 ,标准溶 液的制备 ,样品液的测定 ,分析中的污染 ,仪器常见故障 等等问题上的不注意 ,而引起大的系统误差 ,使整个测定 分析失败 。现就液相色谱分析的应用中样品预处理注意 的几个环节 ,作简要分析 ,以达到更好的检测效果 。 1 样品预处理方法
实验室常用的器皿有玻璃类 、瓷类 、石英类 、塑料类 等 ,在进行分析时 ,应按照待则样品的要求来选则器皿 , 不管使用哪种器皿 ,容器的洗条清洁都是很重要的 ,也是
ν∼ 古丽扎提·再努拉 :液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节
取得好的检测结果的基本保证 。 213 试剂
ν} 《计量与测试技术》2006 年第 33 卷第 1 期
液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节
Several Problems We Should Pay Attention to in Sample Pretreatment of Liquid Chromatography
0. 0582 + 0. 102 = 0. 12 ℃ 4. 4 合成标准不确定度的自由度
Leabharlann Baidu
V eff
=
u4c ( d)
u4 ( T) 50
+
u4 ( TS) 50
在升温速率为 0. 2 ℃/ min 时 , Veff = 102 , 取 Veff =
100 在升温速率为 1. 0 ℃/ min 时 , Veff = 93 , 取 Veff = 50 (为方便使用 ,取 Veff 为 100 和 50 对最终评定结果影
来源
确定度
Ci | Ci| u ( xi)
vi
0. 2 ℃/ min 时 u ( Ts)
0. 056 ℃ 标准物质定
0. 056 ℃
50
1. 0 ℃/ min 时 u ( Ts)
值的不确定度 0. 10 ℃
-1
0. 10 ℃
50
熔点仪的测
u ( T)
量不重复性 0. 058 ℃ 1
0. 058 ℃
50
(2) 常用的标准溶液应存放在棕色溶液瓶中低温保 存。
(3) 在配制维生素类标准品时 ,要放置在棕色容量瓶 中或避光放置以免分解 。 4 样品预处理过程中的主要故障与解决办法
(1) 色谱图中出现无关的峰 ,原因有可能是样品过滤 器带来污染 ,解决方法如下 :
①将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验 ; ②改变 过滤器类型 ; ③采用交替清洗技术 。
在液相色谱分析中 ,所选用的试剂必须是色谱纯 、优 级纯或分析纯 ,如果用含量有杂质的试剂 ,则会出现杂峰 而影响测定结果 。 3 标准溶液的配置
在配置标准溶液时 ,先要配置现定浓度的内标溶液 , 在标准溶液和样品溶液中最好使用同一批次配制的内标 溶液以减少误差 。
(1) 配制标准溶液的物质应当是色谱纯的 、性质稳 定。
用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒 , 有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头 。处理好的样品在准备 上柱前应对准光线摇动 ,检查样品溶液中有无颗粒 。只 要看到颗粒 、混浊或乳化 ,就应过滤一下 ,过滤膜要能截 留住 015μm 以上的颗粒 ,样品过滤的过程中可能引起 : 样品被污染 ,因过滤吸附降低样品组分的含量 ,样品溶剂
参考文献 [1 ] JJ F1059 - 1999《测量不确定度评定与表示》1 北京 :中国计量出版社. [2 ] 贾瑞华. 毛细管法熔点测定仪检定规程 1 北京 :中国计量出版社.
作者简介 :董艳华 ,女 ,工程师 。工作单位 :哈尔滨市计量检定测试所 。通 讯地址 :150036 哈尔滨市香坊区珠江路 5 号 。 收稿时间 :2005 - 12 - 30
(2) 一些或全部化合物的峰比预期的小 ,尤其是低浓
度的样品 ,原因可能是样品过滤器表面吸附下降 ,解决方 法如下 :
①改变过滤器类型 ; ②严格按相同条件处理所用样 品 ; ③采用交替清洗技术 。
(3) 回收率太低或差 ,原因可能是萃取不完全 ,解决 方法如下 :
①增加萃取时间 ,使用热溶剂 ; ②修改清洗方法 。 (4) 色谱峰变宽 ,柱寿命缩短 ,原因可能是样品带来 的干扰与污染 ,应改进清洗方法 。 (5) 精度差 ,原因可能是回收不完全 ,解决方法如下 : ①改进或替换衍生化 、分离 、萃取或其他条件 ; ②用 自动化处理装置提高精度 。 总之 ,对分析仪器来说 ,避免故障的最主要的做法是 正确的操作和调节 ,切忌盲目操作 ,对核心部位如离子 室 、微电流放大器等减少震动和碰撞 ,保证绝缘 ,并减少 各种系统误差要注意以上要点 ,但还要注意日常的仪器 保养 ,色谱柱子的维护 ,仪器室保持清洁 ,这样才能使液 相色谱处于最佳工作状态 ,在分析中发挥其重要的作用 。
挥发引起误差 。萃取的目的是从共溶的样品介质中分离 出被分析的组分 ,或者减少损坏柱的物质 (如蛋白质等) 和干扰物 。一般采用有机溶剂萃取 ,要求萃取用的溶剂 毒性低 、挥发性好 、杂质少 、对待测样品有良好的溶解度 且又与水不相混溶 。常用的有乙醚 、醋酸乙酯 、二氯甲 烷 、氯仿 、苯或者两种以上的混合溶剂 。萃取后一般可直 接进样 ,有时需要浓缩或吹干浓缩 ,再用定体积的液体或 流动相溶解进样 。这样增加了样品浓度 ,提高了灵敏度 , 同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰 。在萃取是要考虑样 品分子的溶解能力 。除了脂溶性和水溶性组分外 ,还有 用脂溶性的组分制成水溶性的盐 。萃取方法如下 : 111 水溶性样品
样品预处理应包括进样前的一切操作 。除了称重 、 溶解 、稀释等步骤外 ,样品需要 : ①过滤 ; ②萃取 ; ③衍生 化 (柱前衍生) ; ④液相色谱 (低压柱层析) 。这些操作可 以是手工进行或实行自动化操作 。样品预处理的目的是 除去干扰物 、增加检测器灵敏度 (富集) 、保护色谱柱等 。 样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障 ,其中样品 萃取是关键的一步 ,要从大量的干扰物中萃取出微量组 分难度极大 。
(1) 酸性组分及生成的盐萃取方法 :有机溶剂萃取杂 质后调成酸性 ,再加有机溶剂萃取或进样 ,或在 N2 流下 吹干 ,用适当的溶剂解后进样 。
(2) 碱性组分及生成的盐萃取方法 :有机溶剂萃取杂 质后调成碱性 ,再加有机溶剂萃取或进样 ,或在 N2 流下 吹干 ,用适当的溶剂溶解后进样 。
(3) 中性组分萃取方法 :有机溶剂萃取杂质后 ,直接 用反相色谱法分析 。 112 脂溶性组分萃取方法 :有机溶剂萃取或进样 ,或在 N2 流下吹干 ,用适当的溶剂溶解后进样 。 2 分析中的污染
作者简介 :古丽扎提·再努拉 ,女 ,工程师 。工作单位 :新疆计量测试研究院 理化室 。通讯地址 :830011 新疆乌鲁木齐市北京南路 40 号附 9 号 。 收稿时间 :2004 - 10 - 11
(上接第 37 页)
表 2 输入量的标准不确定度汇总表
标准不确
不确定度 标准不
定度分量 u ( xi)
4. 3 合成标准不确定度的计算
输入量 T 与 TS 相互独立不相关 ,所以合成标准不确
定度 uc 按下式计算 。
u2c ( d)
= [ 99dT·u (
T)
]2
+
[
9d 9TS
·u
(
TS )
]2
在 升 温 速 率 为 0. 2 ℃/ min 时 , uc ( d ) =
0. 0582 + 0. 0562 = 0. 081 ℃ 在 升 温 速 率 为 1. 0 ℃/ min 时 , uc ( d ) =
响不大) 。 5 扩展不确定度 UP 的评定
取置信概率 p = 95 % ,查 t 分布表得 t95 (100) = 1. 984 ; t95 (50) = 2. 01 在升温速率为 0. 2 ℃/ min 时 ,扩展不确定度为 : U95 = t95 (100) ·uc ( d) = 0. 16 ℃ 在升温速率为 1. 0 ℃/ min 时 ,扩展不确定度为 : U95 = t95 (50) ·uc ( d) = 0. 24 ℃ 6 测量不确定度的报告与表示 毛细管法熔点测定仪测量结果的扩展不确定度为 : 在升温速率为 0. 2 ℃/ min 时 , U95 = 0. 16 ℃, veff = 100 在升温速率为 1. 0 ℃/ min 时 , U95 = 0. 24 ℃, veff = 50
一般检测的环境 、容器 、试剂都是影响测定结果的因 素。 211 环境污染
仪器室的有害气体 、气溶液 、灰尘等等都能造成污 染 ,影响检测结果 ,这种污染很难校正 。因此 ,仪器室与 其他实验室应隔离 ,保持清洁 ,仪器室内应安装空调 ,注 意防潮 、防腐 、防震 、空气相对湿度应小于 70 %为宜 。 212 容器
古丽扎提·再努拉
(新疆计量测试研究院 ,新疆 乌鲁木齐 830011)
摘 要 :本文主要介绍对样品的前处理 ,样品的配制 ,样品预处理过程中的主要故障与解决办法 。 关键词 :液相色谱 ;样品预处理 ;故障
高效液相色谱具有分离效率高 、分析速度快和应用 范围广等特点 ,特别适合于高沸点 、大分子 、强极性和热 稳定性差的化合物的分离分析 。目前高效液相色谱已成 为化学 、生化 、医学 、工业 、农业 、环保 、商检和法检等学科 领域中重要的分离技术 ,是分析化学家和生物化学家手 中用于解决他们面临的各种实际分析和分离课题必不可 少的工具之一 。虽然在检测分析中使用了昂贵的 、性能 优越的高档精密仪器 ,但是由于在样品的前处理 ,标准溶 液的制备 ,样品液的测定 ,分析中的污染 ,仪器常见故障 等等问题上的不注意 ,而引起大的系统误差 ,使整个测定 分析失败 。现就液相色谱分析的应用中样品预处理注意 的几个环节 ,作简要分析 ,以达到更好的检测效果 。 1 样品预处理方法
实验室常用的器皿有玻璃类 、瓷类 、石英类 、塑料类 等 ,在进行分析时 ,应按照待则样品的要求来选则器皿 , 不管使用哪种器皿 ,容器的洗条清洁都是很重要的 ,也是
ν∼ 古丽扎提·再努拉 :液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节
取得好的检测结果的基本保证 。 213 试剂
ν} 《计量与测试技术》2006 年第 33 卷第 1 期
液相色谱使用中样品预处理注意的几个环节
Several Problems We Should Pay Attention to in Sample Pretreatment of Liquid Chromatography
0. 0582 + 0. 102 = 0. 12 ℃ 4. 4 合成标准不确定度的自由度
Leabharlann Baidu
V eff
=
u4c ( d)
u4 ( T) 50
+
u4 ( TS) 50
在升温速率为 0. 2 ℃/ min 时 , Veff = 102 , 取 Veff =
100 在升温速率为 1. 0 ℃/ min 时 , Veff = 93 , 取 Veff = 50 (为方便使用 ,取 Veff 为 100 和 50 对最终评定结果影
来源
确定度
Ci | Ci| u ( xi)
vi
0. 2 ℃/ min 时 u ( Ts)
0. 056 ℃ 标准物质定
0. 056 ℃
50
1. 0 ℃/ min 时 u ( Ts)
值的不确定度 0. 10 ℃
-1
0. 10 ℃
50
熔点仪的测
u ( T)
量不重复性 0. 058 ℃ 1
0. 058 ℃
50
(2) 常用的标准溶液应存放在棕色溶液瓶中低温保 存。
(3) 在配制维生素类标准品时 ,要放置在棕色容量瓶 中或避光放置以免分解 。 4 样品预处理过程中的主要故障与解决办法
(1) 色谱图中出现无关的峰 ,原因有可能是样品过滤 器带来污染 ,解决方法如下 :
①将过滤器浸泡在样品溶剂中并进样试验 ; ②改变 过滤器类型 ; ③采用交替清洗技术 。
在液相色谱分析中 ,所选用的试剂必须是色谱纯 、优 级纯或分析纯 ,如果用含量有杂质的试剂 ,则会出现杂峰 而影响测定结果 。 3 标准溶液的配置
在配置标准溶液时 ,先要配置现定浓度的内标溶液 , 在标准溶液和样品溶液中最好使用同一批次配制的内标 溶液以减少误差 。
(1) 配制标准溶液的物质应当是色谱纯的 、性质稳 定。
用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒 , 有颗粒会损坏进样器并阻塞柱头 。处理好的样品在准备 上柱前应对准光线摇动 ,检查样品溶液中有无颗粒 。只 要看到颗粒 、混浊或乳化 ,就应过滤一下 ,过滤膜要能截 留住 015μm 以上的颗粒 ,样品过滤的过程中可能引起 : 样品被污染 ,因过滤吸附降低样品组分的含量 ,样品溶剂
参考文献 [1 ] JJ F1059 - 1999《测量不确定度评定与表示》1 北京 :中国计量出版社. [2 ] 贾瑞华. 毛细管法熔点测定仪检定规程 1 北京 :中国计量出版社.
作者简介 :董艳华 ,女 ,工程师 。工作单位 :哈尔滨市计量检定测试所 。通 讯地址 :150036 哈尔滨市香坊区珠江路 5 号 。 收稿时间 :2005 - 12 - 30
(2) 一些或全部化合物的峰比预期的小 ,尤其是低浓
度的样品 ,原因可能是样品过滤器表面吸附下降 ,解决方 法如下 :
①改变过滤器类型 ; ②严格按相同条件处理所用样 品 ; ③采用交替清洗技术 。
(3) 回收率太低或差 ,原因可能是萃取不完全 ,解决 方法如下 :
①增加萃取时间 ,使用热溶剂 ; ②修改清洗方法 。 (4) 色谱峰变宽 ,柱寿命缩短 ,原因可能是样品带来 的干扰与污染 ,应改进清洗方法 。 (5) 精度差 ,原因可能是回收不完全 ,解决方法如下 : ①改进或替换衍生化 、分离 、萃取或其他条件 ; ②用 自动化处理装置提高精度 。 总之 ,对分析仪器来说 ,避免故障的最主要的做法是 正确的操作和调节 ,切忌盲目操作 ,对核心部位如离子 室 、微电流放大器等减少震动和碰撞 ,保证绝缘 ,并减少 各种系统误差要注意以上要点 ,但还要注意日常的仪器 保养 ,色谱柱子的维护 ,仪器室保持清洁 ,这样才能使液 相色谱处于最佳工作状态 ,在分析中发挥其重要的作用 。
挥发引起误差 。萃取的目的是从共溶的样品介质中分离 出被分析的组分 ,或者减少损坏柱的物质 (如蛋白质等) 和干扰物 。一般采用有机溶剂萃取 ,要求萃取用的溶剂 毒性低 、挥发性好 、杂质少 、对待测样品有良好的溶解度 且又与水不相混溶 。常用的有乙醚 、醋酸乙酯 、二氯甲 烷 、氯仿 、苯或者两种以上的混合溶剂 。萃取后一般可直 接进样 ,有时需要浓缩或吹干浓缩 ,再用定体积的液体或 流动相溶解进样 。这样增加了样品浓度 ,提高了灵敏度 , 同时避免了溶剂峰对样品峰的干扰 。在萃取是要考虑样 品分子的溶解能力 。除了脂溶性和水溶性组分外 ,还有 用脂溶性的组分制成水溶性的盐 。萃取方法如下 : 111 水溶性样品
样品预处理应包括进样前的一切操作 。除了称重 、 溶解 、稀释等步骤外 ,样品需要 : ①过滤 ; ②萃取 ; ③衍生 化 (柱前衍生) ; ④液相色谱 (低压柱层析) 。这些操作可 以是手工进行或实行自动化操作 。样品预处理的目的是 除去干扰物 、增加检测器灵敏度 (富集) 、保护色谱柱等 。 样品预处理同时也是为了避免色谱分离故障 ,其中样品 萃取是关键的一步 ,要从大量的干扰物中萃取出微量组 分难度极大 。
(1) 酸性组分及生成的盐萃取方法 :有机溶剂萃取杂 质后调成酸性 ,再加有机溶剂萃取或进样 ,或在 N2 流下 吹干 ,用适当的溶剂解后进样 。
(2) 碱性组分及生成的盐萃取方法 :有机溶剂萃取杂 质后调成碱性 ,再加有机溶剂萃取或进样 ,或在 N2 流下 吹干 ,用适当的溶剂溶解后进样 。
(3) 中性组分萃取方法 :有机溶剂萃取杂质后 ,直接 用反相色谱法分析 。 112 脂溶性组分萃取方法 :有机溶剂萃取或进样 ,或在 N2 流下吹干 ,用适当的溶剂溶解后进样 。 2 分析中的污染
作者简介 :古丽扎提·再努拉 ,女 ,工程师 。工作单位 :新疆计量测试研究院 理化室 。通讯地址 :830011 新疆乌鲁木齐市北京南路 40 号附 9 号 。 收稿时间 :2004 - 10 - 11
(上接第 37 页)
表 2 输入量的标准不确定度汇总表
标准不确
不确定度 标准不
定度分量 u ( xi)
4. 3 合成标准不确定度的计算
输入量 T 与 TS 相互独立不相关 ,所以合成标准不确
定度 uc 按下式计算 。
u2c ( d)
= [ 99dT·u (
T)
]2
+
[
9d 9TS
·u
(
TS )
]2
在 升 温 速 率 为 0. 2 ℃/ min 时 , uc ( d ) =
0. 0582 + 0. 0562 = 0. 081 ℃ 在 升 温 速 率 为 1. 0 ℃/ min 时 , uc ( d ) =
响不大) 。 5 扩展不确定度 UP 的评定
取置信概率 p = 95 % ,查 t 分布表得 t95 (100) = 1. 984 ; t95 (50) = 2. 01 在升温速率为 0. 2 ℃/ min 时 ,扩展不确定度为 : U95 = t95 (100) ·uc ( d) = 0. 16 ℃ 在升温速率为 1. 0 ℃/ min 时 ,扩展不确定度为 : U95 = t95 (50) ·uc ( d) = 0. 24 ℃ 6 测量不确定度的报告与表示 毛细管法熔点测定仪测量结果的扩展不确定度为 : 在升温速率为 0. 2 ℃/ min 时 , U95 = 0. 16 ℃, veff = 100 在升温速率为 1. 0 ℃/ min 时 , U95 = 0. 24 ℃, veff = 50