第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析

邻位取代>间位、对位取代，尤其是邻
位取代酚羟基，由于形成分子内氢健， 酸性大为增强。 芳环取代的脂肪酸类，酸性较弱。如 双氯芬酸、布洛芬等。
4.易水解 具有酯键和酰胺键的药物均可发生水解。 可用剩余碱量法测定含量，如美洛昔康。 5.紫外、红外特征吸收光谱 分子中具有苯环和特征官能团，具有紫 外和红外特征吸收。 6.基团或元素特性 酚羟基、芳伯氨基、卤素、硫元素等。
氢氧化钠在加热时易吸收CO2，生成碳酸盐。 使测定结果偏高。 不加入样品，其余操作步骤和加样一致。
（2）滴定度如何计算？
阿司匹林：氢氧化钠=1:2
T=0.5×180.16×1/2=45.04(mg/ml)
（V0 V） F T 含量 % 100 % × W
F：硫酸滴定液的校正因子
4. 两步滴定法－－ChP2005 阿司匹林片和肠溶片 原理: 阿司匹林片中加入少量稳定剂（酒石酸
2.酚羟基反应
NHCOCH3 3 OH NHCOCH3 FeCl3 O Fe
+
+ 3HCl
3
对乙酰氨基酚
蓝紫色
二、缩合反应
HOOC CH3
O2 N HN +
O
NH2 NO2 N NH NO2
橙色
NO2
硫酸
酮洛芬
二硝基苯肼
腙
三、重氮化－偶合反应
－－芳香第一氨的反应
NaNO2 β-萘酚 NaOH
Ar-NH2
反应摩尔比为1∶1
COONa OCOCH3
定量过量


COONa OH
+NaOH
CH3COONa
剩余 H2S O4 Na2S O4 H2O 2NaOH
方法
中和:
取本品10片，精密称定，研细，精密称取片 粉适量(约相当于阿司匹林0.3 g)，置锥形瓶中， 加入中性乙醇20ml，振摇使溶解，加酚酞指 示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)至 溶液显粉红色。 此时中和了存在的游离酸，阿司匹林也同时 成为钠盐。
或枸橼酸）, 制剂过程中分解产物（水杨酸、
醋酸）均消耗氢氧化钠。因此，不能采用直
接滴定法，采用先“中和”再“水解滴定”
的两步滴定法。
第一步
中和
不用于含量计算 酒石酸钠 枸橼酸钠 水杨酸钠 醋酸钠
COONa
酒石酸 枸橼酸 水杨酸 醋酸
COOH
+NaOH →
OCOCH3
+NaOH
OCOCH3
+H2O
第二步 水解后剩余滴定
ChP2010采用HPLC检查。 原料药和制剂均需检查游离水杨酸，限量各不相同。
2.阿司匹林中有关物质的检查
指除游离水杨酸外的合成原料苯酚及其他 合成副产物。 色谱条件：与检查“游离水杨酸”的流动 相不同。 要求：除水杨酸峰外，其他各杂质峰面积 的和不得大于对照溶液主峰面积（0.5%） 。
含量%
V
空
ຫໍສະໝຸດ Baidu
V样 T F 100% W 标示量 平均片重 F：硫酸滴定液的校正因子
5. 非水溶液滴定法 吡罗昔康具有吡啶环，显碱性。 【含量测定】取本品约0.2g，精密称定，加 冰醋酸20ml使溶解，加结晶紫指示液1滴， 用高氯酸滴定液（0.lmol/L)滴定至溶液显 蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。 每l ml 高氯酸滴定液（0 .lmol/ L ) 相当于 33.14 mg的C15H13N3O4S。
三、HPLC法
大多采用离子抑制-反相高效液相色谱法测定
学习要点：
本类药物的结构和性质； 主要芳酸类药物的鉴别、检查和含量测 定（滴定法）的原理与特点。

二、紫外-可见分光光度法
1. 直接紫外-可见分光光度法
原理:药物在某一波长处有最大吸收，采用 对照品法或吸收系数法进行含量测定。
1% CL A＝ E1 CM ·
2. 柱分配色谱－紫外分光光度法 USP（29）测定阿司匹林胶囊的含量。可将阿 司匹林与水杨酸和其他中性碱性杂质分离。 1.色谱柱的制备： 硅藻土3g和新制碳酸氢钠液（1→12）2ml 的混合填充剂
§2 鉴别试验
一、与三氯化铁的反应
1.水杨酸反应
O OH OH O O
+
FeCl3 + H2O O
Fe
+
OH
3HCl
a.反应极为灵敏。 b.反应适宜的pH值为4~6 ，在强酸性下配合 物分解。
紫堇色
阿司匹林
COOH OCOCH3 +
水解后鉴别
COOH
H2O
∆
OH
+
CH3COOH
+Fecl3
紫堇色配位化合物
溶剂溶解
（×）
判断：
供试品溶液所显杂质斑点不得深
于对照溶液的主斑点（或荧光强度）
§4 含量测定
本类药物原料药的含量测定：酸碱滴
定法
制剂的含量测定：紫外-可见分光光度
法和HPLC法
一、酸碱滴定法
1.直接滴定法－－阿司匹林
原理: 阿司匹林分子中有游离羧基，具弱酸性， 可用标准碱溶液直接滴定。
水解和测定:
在中和后的供试品溶液中，精密加氢氧化 钠滴定液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热 15min并时时振摇，迅速放冷置室温，用硫 酸滴定液 (0.05mol/L)滴定，结果用空白试 验校正。每 1ml氢氧化钠滴定液 (0.1mol/L) 相当于18.02 mg的C9H8O4 。
讨论: （1）优点 消除了酸性杂质的干扰 （2）反应的摩尔比 阿司匹林:氢氧化钠＝1:1 T=0.1×180.16=18.02mg/ml （3）含量计算
1.紫外分光光度法 最大吸收波长（和/或最小吸收波长） 吸光度法
吸光度比值法
2.红外分光光度法 对照图谱对照 《药品红外光谱集》
水杨酸的红外吸收光谱图
八、薄层色谱法
比较供试品溶液与对照品溶液的比移值
九、HPLC
比较供试品溶液与对照品溶液的保留时间
§3 特殊杂质检查
阿司匹林中游离水杨酸及有关物质的检查 1.阿司匹林中游离水杨酸的检查
苯环
水解后才发 生三氯化铁 反应
阿司匹林 (aspirin)
水解后生成 水杨酸杂质
酯键
O OH O O OH
双水杨酯
二、邻氨基苯甲酸类
有强烈绿色荧光
甲芬那酸
三、邻氨基苯乙酸类
O NaO H N Cl Cl
有刺鼻感
双氯芬酸钠
四、芳基丙酸类
CH3 COOH CH CH2CH CH3 CH3
布洛芬 ibuprofen
2. 剩余量滴定法

美洛昔康有烯醇式结构，显酸性，可用氢 氧化钠滴定液滴定，但在一般溶剂中溶解 性差。用定量过量的氢氧化钠滴定液溶解 后，用盐酸滴定液回滴定剩余的氢氧化钠。
美洛昔康

【含量测定】取本品约0.4g，精密称定，精 密加氢氧化钠滴定液（0. lmol/L)25ml，微 温溶解，放冷，加中性乙醇（对溴麝香草 酚蓝指示液显中性）100ml ，加溴麝香草酚 蓝指示液10滴，用盐酸滴定液（0.lmol/L) 滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。 每lml氢氧化钠滴定液（0.lmol/L)相当于 35.14mg的 C14H13N3O4S2。
（2）指示剂为何选用酚酞？
生成的钠盐是强碱弱酸盐，偏碱性。
（3）操作事项
滴定过程中不断振摇，防止局部水解 。
（4）特点
操作简便，但缺乏专属性，酸性物质有干扰。 不适合用于水杨酸含量较高的样品测定。
（5）滴定度的计算
a 1 T CM 0.1mol L 180.16g mol b 1 18.02g L 18.02mg ml
来源：生产过程中乙酰化不完全，或贮藏过程中 水解产生 。
COOH OH COOH OCOCH3
乙酰化
70~75℃
ChP2005方法：铁盐比色法（稀硫酸铁铵 ）
原理：阿司匹林结构中无酚羟基，不与高铁盐反应; 水杨酸有酚羟基，则可与高铁反应呈紫堇色。 缺点：供试品溶液制备过程中阿司匹林可水解生成 新的游离水杨酸。
HCl
Ar-N2
+Cl-
Ar-N=N-Ar
对乙酰氨基酚 贝诺酯
重氮盐
偶合
红色
贝诺酯
水解 重氮化 偶合
四、氧化反应
甲芬那酸
H2SO4
黄色(绿色荧光)(JP13)
K2Cr2O7
深蓝色→棕绿色
硫酸
吲哚美辛 紫色
重铬酸钾
亚硝酸钠 盐酸 绿色 黄色
五、水解反应
水杨酸类
邻氨基苯甲酸类 邻氨基苯乙酸类
按结构分类
吲哚乙酸类
芳基丙酸类
苯并噻嗪甲酸类 其他非甾体抗炎药
§1 典型药物分类与理化性质
一、水杨酸类
典型药物
游离羧基
苯环
水杨酸 (salicylic acid)
酚羟基，发 生三氯化铁 反应
pKa = 3.49
直接中和法 两步滴定法 游离羧基
COOH OCOCH3
方法: 取本品约0.4g, 精密称定, 加中性乙醇 (对 酚酞指示液显中性) 20mL溶解后, 加酚 酞指示液3滴, 用氢氧化钠滴定(0.1mol/L) 滴定。每 1ml的氢氧化钠滴定(0.1mol/L) 相当于18.02mg的C9H8O4 。
讨论:（1）溶剂为何使用中性乙醇？
使用乙醇：a.使供试品易于溶解;b.防止酯水解 使用中性乙醇：乙醇对酚酞显酸性，扣除乙醇的 酸性对测定的影响。

杂质对照品法
方法：
供试品→供试品溶液
杂质对照品→对照品溶液
供 试 品
对 照 品
判断：供试品中所含杂质斑点不
得超过相应的杂质对照斑点。 优点：同一物质，同一 Rf值比较，
准确度高、直观性强。
缺点：需要杂质对照品。
2.主成分自身对照法（高低浓度对比法）
方法：
S 供试品溶液 稀释 一定量供试品溶液 对照溶液
第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析
主要内容：
§1 §2 §3 §4 §5 典型药物分类与理化性质 鉴别试验 特殊杂质检查 含量测定 体内药物分析
R OH
OH
醇 醇羟基 酚 酚羟基
R COOH
COOH
羧酸 游离羧基
芳酸 游离羧基
O R C OR′
酯
芳酸类非甾体药物：分子结构中含 有取代苯基的一类羧酸化合物。
五、吲哚乙酸类
O HO O N O
吲哚美辛
Cl
六、苯并噻嗪甲酸类
OH O N H CH3 N
S O
N O
吡罗昔康
其他非甾体抗炎药
H N HO O CH3
对乙酰氨基酚
结构分析
包括：芳酸、芳酸酯、芳酸盐 共同点： 苯环、羧基 不同点：不同的取代基（如酚羟基、 芳伯氨基、卤原子、杂环等）

3. 水解后剩余滴定法－－阿司匹林 原理: 阿司匹林酯结构在碱性条件下易于水解, 加入定量过量的氢氧化钠滴定液, 加热 水解, 剩余的碱用硫酸滴定液回滴定。
COOH OCOCH3 2NaOH COONa OH CH3COONa H2O
2NaOH H2SO4
Na2SO4 2H2O
方法：取本品约1.5g，精密称定，置烧杯中， 加氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)50.0ml，混合，缓 缓煮沸10min 加酚酞指示液，用硫酸滴定液 (0.25mol/L)滴定，并将滴定结果用空白试验校 正。每lml的氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)相当于 45.04mg的C9H8O4 。 讨论：（1）为何做空白试验？如何操作？
－－酯结构水解
1.阿司匹林
2.双水杨酯
双水杨酯
NaOH
水杨酸钠
稀HCl
煮沸
水杨酸 （白色）
沉淀在醋酸铵 试液中可溶解
六、特征元素的分析
1.氯元素 双氯芬酸钠+碳酸钠 炽灼灰化 加水煮沸 过滤 滤液显氯化物鉴别反应 2.硫元素 美洛昔康于试管中炽灼，产生的气体能使湿 润的醋酸铅试纸显黑色。
七、光谱法
2.对照溶液：用冰醋酸氯仿溶液（1→100）
供试液：样品的氯仿溶液[盐酸-甲醇（1→50
）] 3.样品上样、氯仿洗涤 乙酰水杨酸和水杨酸成钠盐保留于柱上，不 被氯仿洗脱。氯仿可除去中性或碱性杂质。
4.冰醋酸-氯仿液（1→100）洗脱
乙酰水杨酸游离，被氯仿洗脱。水杨酸酸性 较强，醋酸不能使其游离而保留在色谱柱上。 5.收集洗脱液，280nm波长处测定吸收度，按 对照法计算含量。
主要理化性质
1.性状：固体，有一定的熔点。
2.溶解性：几乎不溶于水，易溶于有机 溶剂。碱金属盐易溶于水，难溶于有 机溶剂。
3.酸性：
芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在
3～6之间，属中等强度的酸或弱酸； —X、—NO2、—OH等吸电子取代基 存在使酸性增强。水杨酸>阿司匹林> 苯甲酸； —CH3、—NH2等斥电子取代基存在使 酸性减弱。