丹参注射液对溶血_血管刺激的实验研究_苏冉

苏冉 Su Ｒan1 ，张小磊 Zhang Xiaolei2 ，何玲 He Ling1
1． 中国药科大学，江苏 南京 211198 China Pharmaceutical University，Nanjing Jangsu China 211198
2． 河南辅仁医药科技开发有限公司，河南 郑州 450003 Medicine Science Technology Company of Henan Furen，Zhengzhou Henan China 450003
每日给药前后，肉眼观察给药局部的静脉血管及周围组 织的局部刺激反应。末次给药后 48 h 对动物及注射部位进 行肉眼观察后，将动物处死，分别于注射部位近心端处剪取 约 1． 0 cm × 1． 5 cm 耳缘，用 10% 甲醛固定，常规组织切片， 进行病理组织学检查。
2 结果
2． 1 对溶血实验的影响 阳性对照管（ 7 号管） 加入蒸馏水后于 10 min 内出现溶
观察指标 与 结 果 判 断： 分 别 于 保 温 15 min、30 min、45 min 和 1 h、2 h、3 h 观察各管溶血情况，必要时可用显微镜观
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2013 年 4 月 1 日 第 4 期 No． 4 1 April 2013
中医学报
CHINA JOUＲNAL OF CHINESE MEDICINE
编辑: 纪彬
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第 28 卷 总第 179 期 Vol． 28 Serial No． 179
察红细胞是否破裂。若受试物管中的溶液在 3 h 内不发生溶
血和凝聚，则受试物可供注射用。见表 2。
表 1 体外溶血试验加样表
（ V / mL）
管号 2% 红细胞混悬液 5% 葡萄糖注射液
蒸馏水 受试药液
1 2 3 4 5 67 2． 5 2． 5 2． 5 2． 5 2． 5 2． 5 2． 5 2． 0 2． 1 2． 2 2． 3 2． 4 2． 5 － － － － － － － 2． 5 0． 5 0． 4 0． 3 0． 2 0． 1 － －
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
摘要： 目的: 探讨丹参注射液的血管刺激性和是否具有溶血作用。方法: 采用兔耳缘静脉注射给药，观察丹参注射液对注射局 部血管的刺激性; 采用 2% 兔血红细胞混悬液检查丹参注射液有无溶血和红细胞凝聚反应。结果: 丹参注射液对兔血管内皮 没有损伤和刺激作用，与 5% 葡萄糖注射液对照组血管比较，两者无明显差异，对兔红细胞没有致溶血作用和凝聚作用。结 论: 丹参注射液对用药血管无刺激性反应，也无溶血及红细胞凝聚现象。 文献引用： 苏冉，张小磊，何玲． 丹参注射液对溶血、血管刺激的实验研究［J］． 中医学报，2013，28( 4) : 535 － 536． Abstract: Objective: To observe the vascular irritation and hemolysis of Danshen Injection． Methods: We used the way of ear vein administration to observe the irritation of Danshen Injection on the injection of local vascular of rabbits． We used the 2% red blood cell suspension in the blood of rabbit to check whether it could cause the reaction of emolysis and erythrocyte agglutination． Ｒesults: The Danshen Injection didn't cause endothelial damage and stimulation on the vascular of rabbits． Compared with the 5% 'glucose group， there was no conspicuous difference between them． Conclusion: The Danshen Injection doesn't have the effect of vascular irritation，hemolysis and red blood cell condensation． Ｒeference citation: Su Ｒan，Zhang Xiaolei，He Ling． Experimental Study on the Vascular Irritation and Hemolysis of Danshen Injection ［J］． China Journal of Chinese Medicine，2013，28( 4) : 535 － 536． 关键词： 丹参注射液; 溶血; 血管刺激; 兔 Key words: danshen injection; hemolysis; vascular irritation; rabbits 中图分类号 CLC number： Ｒ285． 5 文献标志码 Document code： A 文章编号 Article ID： 1674 － 8999（ 2013） 04 － 0535 － 02
［2］国家食品药品监督管理局． 中药、天然药物局部刺激性和溶血性 研究的技术指导原则［S］． 北京： 军事医学科学出版社，2005： 1 － 25．
［3］国家药典委员会． 中华人民共和国药典［S］． 北京： 中国医药科技 出版社，2010： 160 － 161．
收稿日期： 2012 － 11 － 17 作者简介： 苏冉( 1987 － ) ，女，河南开封人，硕士研究生，研究 方向: 神经药理学研究。 通信作者： 何玲( 1970 － ) ，女，医学博士，教授，硕士研究生导 师，主要从事神经药理学研究。Email: hexyz@ 163． com
2013 年 4 月 1 日 第 4 期 No． 4 1 April 2013
中医学报
CHINA JOUＲNAL OF CHINESE MEDICINE
第 28 卷 总第 179 期 Vol． 28 Serial No． 179
丹参注射液对溶血、血管刺激的实验研究
Experimental Study on the Vascular Irritation and Hemolysis of Danshen Injection
近年来，中药注射液不良反应的事件屡屡发生，导致人 们对中药注射剂安全性的担忧。国家药监局对中药注射剂 提出了安全性再评价的要求，以确保中药注射剂安全用药。 为了研究丹参注射液的安全性，为其临床应用提供依据，本 研究开展了相关实验研究［1］。
1 材料与方法
1． 1 实验材料 1． 1． 1 实验动物 日本大耳白兔 7 只，雌雄不限，体质量 2． 0 ～ 2． 5 kg，由河南康达实验动物有限公司提供，许可证号： SCXK（ 豫） 2011-0001。 1． 1． 2 实验药物 丹参注射液，规格： 每支 2 mL，生药浓度 1． 5 kg·L － 1 ，批号： 100603，由河南同源制药有限公司提供； 5% 葡萄糖注射液，规格： 250 mL： 12． 5 g，批号： 1004194102， 由山东鲁抗辰欣药业有限公司提供。
1． 2 实验方法［2-3］ 1． 2． 1 对溶血实验的影响 2% 兔血红细胞混悬液的制备： 日本大耳白兔 1 只，耳中动脉取血 10 mL，将血放入含玻璃珠 的三角瓶中，轻轻振摇约 10 min，除去纤维蛋白原，加 5% 葡 萄糖注射液约 10 倍量，混匀，1 500 r·min － 1 离心 15 min，除 去上清液，再加入 5% 葡萄糖注射液混匀离心，反复洗涤至上 清液不显红色为止。将所得红细胞用 5% 葡萄糖注射液稀释 成 2% 的红细胞混悬液，备用。
耳缘静脉血管纹路均清晰，周围组织无水肿； 末次给药后 48 h，肉眼观察给药组与对照组兔耳缘静脉均无明显变化。组 织切片病理 学 检 查 结 果 显 示，给 药 组 耳 缘 静 脉 血 管 结 构 正 常、无内皮细胞损伤及其他病理变化，与对照组比较无明显 差异。
3 讨论
刺激性是指中药、天然药物制剂（ 包括活性成分和赋形 剂） 经皮肤、黏膜、腔道、肌肉、血管等非口服途径给药，经局 部吸收或注射后对给药部位以及全身产生的不良反应，包括 血管、肌肉、黏膜等刺激性。溶血性是指中药、天然药物制剂 （ 包括活性成分和赋形剂） 产生的溶血或红细胞凝聚等反应。 其是临床前安 全 性 评 价 的 组 成 部 分。中 药、天 然 药 物 制 剂， 包括活性成分或组分、配伍后产生的新成分、体内代谢物、制 备过程中的杂质、辅料及制剂的理化性质（ 如 pH、渗透压等） 等均是可能导致给药部位不良反应或溶血性反应产生的因 素。因此，为了指 导 临 床 合 理 用 药，提 示 临 床 应 用 时 可 能 出 现的毒性反应和程度、安全剂量或浓度、安全范围、临床研究 监测指标、解毒或解救措施等，应进行中药、天然药物制剂局 部应用的毒性实验［2］。
试管编号
观察时间
1
2
3
4
5
6
7
15 min
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+
30 min
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45 min
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+
1h
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+
2h
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+
3h
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－
－
－
－
+
凝聚
1 ～ 6 管无凝聚现象发生
注： “ － ”无溶血； “ + ”全溶血
2． 2 对血管刺激实验的影响 静脉给予临床浓度的丹参注射液，连续 5 d，给药期间兔
表 2 红细胞溶血、凝聚判断标准
分级 溶血 无溶血 凝聚
试管情况 溶液澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留
红细胞全部下沉，上层液体无色澄明 溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不能分散
1． 2． 2 对血管刺激实验的影响 取健康、耳缘无损伤日本 大耳白兔 6 只，分别以无菌操作法于 3 只兔左侧耳缘静脉注 射临床 浓 度 （ 生 药 浓 度 0． 14 kg · L － 1 ） 的 丹 参 注 射 液 10 mL·kg － 1 ，另外 3 只日本大耳白兔左侧耳缘静脉同法给 予等量 5% 葡萄糖注射液。每日 1 次，连续给药 5 d。 1． 3 观察指标
本研究表明，丹 参 注 射 液 对 兔 血 管 无 刺 激 性，无 溶 血 作 用，可用于临床注射液给药。本研究可为丹参注射液的临床 应用提供依据。
参考文献：
［1］黄元，任经天． 从复方丹参注射液配伍研究探讨配伍对中药注射 液安全性的影响［J］． 中国药物警戒，2010，7（ 12） ： 738 － 741．
取试管 7 支，编号，1 － 5 号管为受试品管，6 号管为阴性 对照管，7 号管为阳性对照管。按下表所示依次加入 2% 的 红细胞混悬液、5% 葡萄糖注射液、蒸馏水、临床浓度的丹参 注射液（ 生药浓度 0． 14 kg·L － 1 ） ，将各管轻轻摇匀，立即置 （ 37 ± 0． 5） ℃ 恒温箱中保温 3 h，观察各管有无溶血现象。试 验重复 1 次。见表 1。
血现象； 1 h 内，1 ～ 6 管红细胞逐渐下沉，上层液体无色透明； 2 h，1 ～ 6 管上清液无色透明，更多红细胞沉于管底； 3 h，1 ～ 6 管上清液无色透明，大量红细胞沉于管底。经振摇后可见红 细胞均匀分散开，说明无红细胞凝聚，阴性对照管及受试品 管无溶血和凝聚现象发生。见表 3。
表 3 丹参注射液溶血试验结果