迟缓爱德华氏菌 铁蛋白 Dps(DNA-binding proteins from starved cells)论文

迟缓爱德华氏菌论文：铁相关蛋白Dps对迟缓爱德华氏菌毒力影响的研究

【中文摘要】Dps(DNA-binding proteins from starved cells)属于铁蛋白超家族,是原核生物中特有的一类能结合铁离子、抗氧化损伤和保护DNA的重要功能蛋白。本研究在迟缓爱德华氏菌株TX01中克隆得到了Dps家族的两个基因dps1和dps2。将dps1和dps2基因在大肠杆菌中重组表达后,获得的可溶性蛋白rDps1和rDps2具有DNA结合功能和铁氧化酶活性。为了检测dps1和dps2的功能作用,我们构建了dps1和dps2的单基因缺失突变株TXDps1和TXDps2以及突变菌株TXDps2的dps1基因抑制表达菌株TXDps2RI。与野生型菌株TX01相比,TXDps1和TXDps2的生长没有显著性差异,但TXDps2RI 的逆境生长能力降低;TXDps1、TXDps2及TXDps2RI的抗氧化损伤、抗紫外线辐射能力皆明显减弱,但TXDps2RI的减弱程度较TXDps1和TXDps2更显著。毒力分析表明,与野生型菌株TX01以及TXDps1和TXDps2相比,TXDps2RI在牙鲆PBL中的生存复制能力显著降低,对牙鲆组织的感染能力大幅下降。综上所述,本研究证明了Dps1和Dps2具有保...

【英文摘要】DNA-binding protein from starved cells (Dps) is a member of ferritin-like proteins that exhibit properties of nonspecific DNA binding and iron oxidation and storage. In this study, we examined the biological property and function

of two Dps proteins, Dps1 and Dps2, from Edwardsiella tarda, an important fish bacterial pathogen. Recombinant Dps1 and Dps2 purified from Escherichia coli were able to mediate iron oxidation and bind DNA. To examine the functional importance of Dps1 and Dps2, three mutant E. tarda...

【关键词】迟缓爱德华氏菌铁蛋白 Dps(DNA-binding proteins from starved cells)

【英文关键词】Edwardsiella tarda ferritin Dps(DNA-binding proteins from starved cells)

【目录】铁相关蛋白Dps对迟缓爱德华氏菌毒力影响的研究

摘要4-5Abstract5第一章前言9-26 1.1 迟

缓爱德华氏菌研究概况9-15 1.1.1 迟缓爱德华氏菌生物学特征9 1.1.2 迟缓爱德华氏菌的危害9-10 1.1.3 迟缓爱德华氏菌致病因子的研究10-15 1.1.4 迟缓爱德华氏菌病的

防治15 1.2 细菌Dps家族的研究15-25 1.2.1 Dps蛋白的结构16-17 1.2.2 Dps蛋白的功能17-21 1.2.3 Dps 蛋白调控21-24 1.2.4 Dps蛋白与细菌毒性24-25 1.3 本论文的研究意义及目的25-26第二章迟缓爱德华氏菌Dps1 与Dps2 蛋白序列的生物信息学分析26-37 2.1 材料和方法

26-33 2.1.1 实验材料26-28 2.1.2 菌株TX01 基因组DNA的提取28-29 2.1.3 菌株TX01 Dps家族基因的获得

29-33 2.1.4 序列比对33 2.2 实验结果

33-35 2.2.1 基因组DNA提取结果33-34 2.2.2 基因

的PCR扩增结果34 2.2.3 序列比对结果34-35 2.3 分析与讨论35-37第三章重组蛋白rDps1 与rDps2 的表达纯

化和功能分析37-49 3.1 材料和方法37-44 3.1.1 实

验材料37-39 3.1.2 Dps1 与Dps2 蛋白的原核表达菌株的构建39-41 3.1.3 rDps1 与rDps2 蛋白的表达

41-42 3.1.4 rDps1 与rDps2 蛋白的纯化42-43 3.1.5 rDps1 与rDps2 蛋白的抗氧化活性检测43 3.1.6 rDps1 与rDps2 蛋白的结合DNA活性检测43-44 3.2 实验结果

44-46 3.2.1 rDps1 与rDps2 蛋白的表达纯化

44 3.2.2 rDps1 与rDps2 蛋白的铁氧化酶活性

44-45 3.2.3 rDps1 与rDps2 蛋白的结合DNA功能

45-46 3.3 分析与讨论46-49第四章 dps1 与dps2 基因缺失突变株的构建和功能分析49-76 4.1 材料和方法

49-65 4.1.1 实验材料49-51 4.1.2 迟缓爱德华氏菌TX01 dps1 与dps2 缺失突变片段的克隆51-52 4.1.3 基因缺失突变体TXDps1 和TXDps2 的获得52-54 4.1.4 突变型菌株TXDps2 中dps1 基因的抑制表达菌株TXDp52RI的建立

54-55 4.1.5 菌株生长状况的分析55-56 4.1.6 菌株

抗血清杀菌能力（Serum resistance activity）的测定

56 4.1.7 菌株抗H_20_2的测定56-57 4.1.8 菌株抗

紫外线辐射的测定57 4.1.9 菌株对牙鲆累计死亡率的测定

57-58 4.1.10 菌株组织侵染能力的测定58 4.1.11 菌株对牙鲆PBL呼吸爆发影响的测定58-59 4.1.12 菌株在牙鲆PBL细胞中复制能力的测定59-60 4.1.13 牙鲆PBL感染不同菌株后免疫相关基因的变化60-63 4.1.14 野生型菌株TX01 在不同阶段的dps1，dps2 基因表达变化63-65 4.2 实验结果65-73 4.2.1 突变型菌株的构建65-66 4.2.2 菌株生长情况的比较66-67 4.2.3 菌株抗血清杀菌活性的比较

67 4.2.4 菌株抗H_20_2氧化损伤的比较67-68 4.2.5 菌株抗紫外线辐射能力的比较68 4.2.6 菌株对牙鲆侵染能力的比较68-70 4.2.7 菌株对牙鲆PBL免疫指标影响的比较

70-71 4.2.8 菌株在牙鲆PBL细胞中的复制能力的比较

71 4.2.9 菌株刺激牙鲆PBL细胞免疫相关基因表达的比较

71-72 4.2.10 野生型TX01 在不同生长时期dps1 与dps2 基因的表达情况72-73 4.3 分析与讨论73-76结论

76-77参考文献77-84硕士期间发表的文章

84-85致谢85