锌粒还原法的实验设计-韩小丹

锌粒还原法的实验设计

1、原理：亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定，硝酸盐采用锌粒还原法测定。

试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，采用相应的方法提取和净化，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。用锌粒做还原剂，在银离子催化下将食品中的硝酸盐还原成亚硝酸盐，测得亚硝酸

盐总量，由此总量减去亚硝酸盐含量，即得试样中硝酸盐含量。

2、材料与试剂

1.材料：水果：苹果1个蔬菜：菠菜1棵（硝酸盐含量高）、花椰菜1个（硝酸盐含量少）

鱼：白鲢1条肉：猪肉1两蛋类：鸡蛋1个

2.试剂：所有试剂均为分析纯，实验用水为去离子水

2.1 亚铁氰化钾溶液(106 g/L)：称取106.0 g 亚铁氰化钾（K4Fe(CN)6·3H2O），用水溶解，并稀释至1000 mL。

2.2 乙酸锌溶液(220 g/L)：称取220.0 g 乙酸锌（Zn(CH3COO)2·2H2O），先加30 mL 冰醋酸（CH3COOH）溶解，用水稀释至1000 mL。

2.3 饱和硼砂溶液(50 g/L)：称取5.0 g 硼酸钠（Na2B4O7·10H2O），溶于100 mL 热水中，冷却后备用。

2.4 110 g/L 乙二胺四乙酸二钠溶液：取110.0g乙二胺四乙酸二钠，用水溶解，并稀释至1000ml。

2.5 NH4Cl 缓冲液：配制氨－氯化铵缓冲液(pH10.0)，取氯化铵5.4g，加蒸馏水20ml溶解后，加浓氨水溶液35ml，再加水稀释至100ml，即得。

2.6 60 %乙酸：取60g醋酸加入30ml蒸馏水中搅拌均匀

2.7 无砷锌粒：20g

2.8 活性炭：若干

2.9 饱和NaCl 溶液：常温(20摄氏度)常压下，饱和食盐水的密度是1.33 g / ml ，溶解度为36克/100克水

2.10 分析滤纸：若干

2.11 5 g/ L Ag2 SO4 溶液：取5g硫酸银固体，用水溶解，并稀释至100ml

2.12 盐酸(0.1 mol/L)：量取5 mL 盐酸，用水稀释至600 mL。

2.13 对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：称取0.4ｇ对氨基苯磺酸(C6H7NO3S)，溶于100 mL 20 %（V/V）盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。

2.14 盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取0.2 g 盐酸萘乙二胺(C12H14N2·2HCl），溶于100 mL 水中, 混匀后，置棕色瓶中，避光保存。

2.15 亚硝酸钠标准溶液（200 μg /mL）：准确称取0.1000ｇ于110℃～120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解移入500 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

2.16 亚硝酸钠标准使用液（5.0 μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00 mL，置于200 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。

2.17 硝酸钠标准溶液（200 μg/mL，以亚硝酸钠计）：准确称取0.1232 g 于110 ℃～120 ℃干燥恒重的硝酸钠，加水溶解，移于入500 mL 容量瓶中，并稀释至刻度。

2.18 硝酸钠标准使用液（5 μg/mL）：临用时吸取硝酸钠标准溶液2.50 mL，置于100 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。

3、仪器和设备

天平：感量为0.001g、碾钵、移液管和洗耳球、超声波清洗器、恒温干燥箱、可见分光光度计。

4、样品提取和制备

4.1 超声提取法：新鲜样品分别用自来水、蒸馏水、纯水洗净，晾干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量，用碾钵或小型绞肉机中制成匀浆，称取试样匀浆20.00 g（精确至0.01 g，可适当调整试样的取样量，以下相同），以90 mL 水洗入250 mL 锥形瓶中，加入活性炭粉末2g以吸附样品中的色素、抗坏血酸等干扰物,70℃下超声提取10 min（或常温下提取30min，每隔5 min 振摇一次）。将样品转入250ml容量瓶中，，加入2ml亚铁氰化钾溶液和2ml乙酸锌溶液沉淀蛋白质，用纯水定容，摇匀,静置10min后，用分析滤纸过滤，弃去初滤液30ml,滤液待测。（如果有离心机，则直接定容，溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于10 000 转/分钟离心15 min，上清液备用。）

4.2 热水提取法：在锥形瓶中加入活性炭后，混匀，于70℃中水浴加热30min，冷至室温，然后将试样转入250ml容量瓶中定容，摇匀，静置10min后，用分析滤纸过滤，弃去初滤液30ml,滤液待测。

5、亚硝酸盐标准曲线的绘制

吸取0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL 亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0 μｇ、1.0 μｇ、2.0 μｇ、3.0 μｇ、4.0 μｇ、5.0 μｇ、7.5 μｇ、10.0 μｇ、12.5 μｇ亚硝酸钠），分别置于50 mL 带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2 mL 对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3 min～5 min 后各加入1 mL 盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15 min，用2 cm 比色杯，以试剂空白为参比，于波长538 nm 处测吸光度，绘制标准曲线。

6、亚硝酸盐含量的测定

亚硝酸盐含量的测定用盐酸萘乙二胺比色法，步骤与绘制标准曲线类似。吸取待测液20ml 于25ml比色皿中。分别加入4.5 mL NH4Cl 缓冲液,加2.5 mL 60 %乙酸后,加入2 mL 对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3 min～5 min 后加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15 min，用2 cm 比色杯，以试剂空白为参比，于波长538 nm 处测吸光度。根据吸光

度和标准曲线计算亚硝酸盐含量X1。

7、硝酸盐含量的测定

硝酸盐含量的测定采用锌粒还原法，取经过前处理的中间滤液10 mL (或适量) ,加2 滴5 g/ L Ag2SO4溶液,1.0 mL 饱和NaCl 溶液,0.5mL 110 g/ L 乙二胺四乙酸二钠溶液摇匀，再加入3 g 锌粒,充分振摇,放置10 min ,其间每隔2 min 振摇1 次。用分析滤纸过滤,待滤完后,再用10 mL 水分2 次洗涤残渣,合并滤液备用。

取上述滤液20mL 于25ml具塞比色管中,同上加入4.5 mL NH4Cl 缓冲液,加2.5 mL 60 %乙酸后,加入2 mL 对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3 min～5 min 后加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15 min，用2 cm 比色杯，以试剂空白为参比，于波长538 nm 处

测吸光度。根据吸光度和标准曲线计算亚硝酸盐总含量X2。

8、硝酸盐含量和亚硝酸盐含量计算

亚硝酸盐含量即为X1的值

硝酸盐含量X B= ( X2– X1) ×1.232

X2——试样经还原后亚硝酸盐总含量( 以NaNO2 计,mg/kg) ;

X1——试样中亚硝酸盐含量(以NaNO2计,mg/kg) ;

X B——试样中硝酸盐含量( 以NaNO3计,mg/kg)