虾青素纳米脂质体及其设备制作方法和应用与相关技术

本技术公开了一种虾青素纳米脂质体及其制备方法和应用。所述制备方法，包括以下步骤：S1.将虾青素、胆固醇与磷脂溶解于二氯甲烷和三氯甲烷的混合溶液中，振荡充分混合后，减压蒸发除去有机溶剂使溶液形成一层均匀薄膜后，真空干燥；S2.向薄膜中加入缓冲液，将薄膜洗脱并旋转溶解分散均匀，得到虾青素脂质体混悬液；S3.将混悬液避光密封20～30℃放置6～24h后，再用脂质体挤出仪器过膜，即得。所述虾青素纳米脂质体具有表征特性优良、包封率高、粒径均一、分散性好、稳定性好和抗氧化活性强的特征，显著提高了

对虾特定生长率和成活率、总抗氧化能力和免疫能力，且合成率较高，工艺简单，易于工业化。

权利要求书

1.一种虾青素纳米脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将虾青素、胆固醇与磷脂溶解于二氯甲烷和三氯甲烷的混合溶液中，振荡充分混合后，减压蒸发除去有机溶剂使溶液形成一层均匀薄膜后，真空干燥；

S2.向薄膜中加入缓冲液，将薄膜洗脱并溶解分散均匀，得到虾青素脂质体混悬液；

S3.将混悬液避光密封20～30℃放置6～24h后，再用脂质体挤出仪器过膜，即得。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S1所述胆固醇与磷脂的质量比为1：4～8，优

选为1：5～7，更优选为1：6。

3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，S1所述虾青素的质量占胆固醇与磷脂总质量的比例为0.5～2.5：210，优选为1：210。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液；控制缓冲液pH 为6.0～8.0，优选缓冲液pH为7.0～7.5。

5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述磷脂为大豆卵磷脂。

6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S2得到虾青素脂质体混悬液后，还对混悬液进行超声处理。

7.根据权利要求6所述制备方法，其特征在于，所述超声的条件为：超声功率50～70KHZ，超声温度25～30℃，超声时间20～40min。

8.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S1控制减压蒸发的条件为：真空度0.08～0.1MPa，温度-10～-13℃；S2控制溶解分散均匀的条件为：温度37～40℃，转速100～

200r/min，时间1～2h。

9.权利要求1～8任一所述制备方法制得的虾青素纳米脂质体，其特征在于，所述脂质体的包封率为83％～95％；粒径大小为100～188nm；分散指数为0.02～0.04。

10.权利要求1～8任一所述制备方法制得的虾青素纳米脂质体在制备虾饲料中的应用。

技术说明书

一种虾青素纳米脂质体及其制备方法和应用

技术领域

本技术属于生物材料技术领域。更具体地，涉及一种虾青素纳米脂质体及其制备方法和应用。

背景技术

虾青素(Astaxanthin)，分子为C40H52O4，熔点约为224℃，不溶于水，具有脂溶性，易溶于氯仿、丙酮、乙醇、乙醚等大多数有机溶剂，属于叶黄素类β-胡萝卜素家族，在自然界分布较广范。天然虾青素的自然来源主要来自藻类、酵母、鲑鱼、鳟鱼、虾、龙虾和磷虾等生物体。其中，雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)和红发夫酵母(Phaffia rhodozyma)为天然虾青素的主要来源。虾青素具有抗氧化、抗衰老、增强机体抗病能力和着色等生理功效，在畜牧水产、食品药品行业具有广泛的应用前景。

随着全球水产品以每年24％比例递增，虾青素需求量也在不断增加。但游离的虾青素分子结构不稳定，对光、热、氧气等环境因素极为敏感，容易造成异构化或降解而无法正常发挥其生物学效应。凡纳滨对虾具有生长速度快、抗逆能力强、饲料转化率高和加工出肉率高等特性，已成为我国对虾养殖的最主要品种之一。然而，随着养殖密度增大，养殖环境的不断恶化，导致对虾的病害加重，对虾产品的品质降低。因此，探索一种理化特征良好、抗氧化活性强、稳定性良好的虾青素纳米脂质体是亟待解决的问题。

脂质体(Liposome)是一种人工制备的生物膜，由双亲性物质如磷脂分子构成的内核为水相、具有类细胞膜结构的双层闭合囊泡。传统的脂质体制备方法有薄膜水化法、乙醚/乙醇注入法、反向蒸发法，以及近年来的后成型加工里使用的高压均质、超声、挤出等。其中，乙醚/乙醇注入法主要使磷脂能够完全溶解在有机溶液乙醇/乙醚中，之后用注射器的细针头吸取该混合溶液快速注入到大量的PBS缓冲液中，从而形成脂质体。因操作上比较简单、时效快、方法比较柔和，所以对脂质体所包裹的物质影响较小，已被广泛应用于脂质体的制备。但是，乙醇、乙醚等有机溶液不易去除，且由于溶解度的因素，使得这种方法制备得到的脂质体包封率比较低。反向蒸发法则主要是将制备脂质体的原料如磷脂等溶于有机溶剂，然后

将含有包埋物质的水相溶液注入其中，经过一段时间的超声破碎，形成稳定的W/O油包水型乳液，最后再经减压旋蒸等去除有机溶剂的步骤，形成性质良好又低毒的脂质体。该方法制备的脂质体粒径大小主要受限于所溶解的脂类物质以及所使用的有机溶剂种类。

申请号为201410578096.X的中国技术专利公开了一种虾青素固体脂质纳米粒及其制备方法。该虾青素固体脂质纳米粒由脂质材料与水相按质量比1：11制成；其中，按质量分数，所述脂质材料中：固体脂1％～15％、植物油85％～98.9％、虾青素0.1％；所述水相中：表面活性剂1％～10％、去离子水90％～99％。但是这种方法制备得到的脂质体存在包封率比较低(包封率仅为65％～76％)、分散稳定性差(易团聚，沉淀)、易被单核细胞吞噬系统捕获以及靶向性不强等不足。

技术内容

本技术要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种稳定性好、包封率高、粒径均一、分散性好且易被机体有效吸收的虾青素纳米脂质体的制备方法。

本技术的另一个目的是提供一种使用上述方法制备得到的虾青素纳米脂质体。所述虾青素纳米脂质体，具有表征特性优良(包封率高、粒径均一、分散性好)、稳定性好和抗氧化活性强的特征。

本技术的再一个目的是提供上述制备方法制得的虾青素纳米脂质体在制备虾饲料中的应用。所述虾青素纳米脂质体显著提高了对虾特定生长率和成活率，显著提高了对虾血清中碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶、总抗氧化能力、多酚氧化酶和肝胰腺中溶菌酶活力，显著降低

对虾血清和肝胰腺丙二醛含量；虾青素纳米脂质体可使对虾肠道中的变形菌门(Proteobacteria)的相对丰度降低，弧菌属(Vibrio)和希瓦氏菌属(Shewanella)的百分比减少。

本技术上述目的通过以下技术方案实现：

一种虾青素纳米脂质体的制备方法，包括以下步骤：

S1.将虾青素、胆固醇与磷脂溶解于二氯甲烷和三氯甲烷的混合溶液中，振荡充分混合后，