轮状病毒发现与检测

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增菌（液35:℃GN1肉8-2汤4h（）37℃ 4-6h）
选初初 初步择步步鉴鉴鉴鉴定别定定：培：菌依养菌落据基落特：特:征菌S征S落、特MA征C
EMB(37℃ 18-24h)
●可疑细细菌菌菌落特征
沙门菌属
菌落特征
小至中等，透明或半透明，乳糖不发酵，SS培养基形成中心黑 色菌落。
葡萄球菌属
圆形、凸起、表面光滑、湿润、边缘整齐
RT-PCR
以上升高。
电镜、ELISA、荧光免疫法 电镜、ELISA、聚丙烯酰
、聚合酶链式反应
胺凝胶电泳法
直接检测方法
电子显微镜法： 1.检测范围广（A、B、C组都能测出）。
2.电子显微镜通过典型形态的观察作出特异 性诊断，其阳性率可达90%。本法快速准 确，但设备昂贵，操作要求高检测敏感性
诺如病毒 札如病毒 单股正链RNA
星状病毒 单股正链RNA
肠道腺病毒 双链RNA
传染源
患者和无症状带毒者
患者、隐性感染者及 健康携带者
患者和无症状带毒者 患者和无症状带毒者
传播途径
粪-口、水源污染、呼 吸道传播
易感人群
婴幼儿（9-12月）、 青壮年
世界各地，发病高峰
流行 在秋冬寒冷季节（12
月～2月）
● 卫生检验综合技术微生物第六组
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微生物综合技术
案例
患儿，半岁，女，突然发病出现 发热、水样性腹泻和呕吐等症状 于2012年11月5日急诊入院，询 问病史患儿为早产1个月，人工 喂养，体检轻微脱水症，蛋花样 粪便，体温38℃。 发病时间为深秋。
4.粪便收集后应在两小时内及时 送检，避免杂菌的污染。
血常规检测
病毒感染初期：
WBC（白细胞）可 轻度升高，但N（中 性粒细胞）多不高。
细菌： 一般二者均高，但 有两种情况： A、WBC升高，N不 高； B、WBC正常/稍低 ，N升高-----多为革兰 阴性菌。
PART1.细菌性感染
发热、 水样腹泻、
呕吐
蛋花样粪便
细菌性食物中毒的可疑对象：沙门菌属、 志贺氏菌、葡萄球菌属、大肠埃希菌属、 产气荚膜梭菌、变形杆菌属
深秋
各类引起 细菌性中 毒引起的 临床症状
● 可疑细菌
可疑细菌
临床症状
潜伏期
沙门菌属
呕吐、腹泻、发热、脱 水
数小时至三天
葡萄球菌属
呕吐、腹泻、发热、头 痛、虚弱无力
2-4小时
大肠埃希菌 变形杆菌属
水样便、发热、恶心和 呕吐
10-15小时
恶心、呕吐和发热
5-18小时
多发季节
夏季 夏季 夏秋季 夏秋季
● 细菌性感染
PART 1.镜检 PART 2.快速诊断 PART 3.增菌 PART 4.分离培养 PART 5.观察菌落特征 PART 6.生化试验 PART 7.结论
快增速菌诊液断 增方 菌法 ：： ●选观必显择要S察ES微特时菌、L定进镜I落卵S的行检A形黄分生查态琼离化、培全脂养套结平基实构板验 进（行待血胶大培定琼体便养）脂常金平规等板检测、MAC
等等
● 程序
粪便、呕吐物
镜检、染色
增菌培养 分离培养
●选择鉴定培养基，如SS、MAC、伊红美蓝琼脂 ● （37℃培养18-24小时）根据具体细菌情况而定。 ●观察菌落颜色形态结构，是否存在可疑菌落 如:
● 细菌鉴别选择培养基
PART 1.沙门菌属 PART 2.志贺氏菌 PART 3.葡萄球菌属 PART 4.大肠埃希菌属 PART 5.变形杆菌属
潜伏期
1～3天
粪-口、空气传播 各年龄段人群
24～48h
粪-口传播
人-人、粪-口、呼吸道
婴幼儿、老年人及免疫功 能低下者
婴幼儿
呈世界性分布，无明显季 呈散发性，无明显季节
节性
性、夏秋季略多
1-3天
约10天
临床表现
婴幼儿急性胃肠炎、 腹泻至脱水、呕吐、 发热、蛋花样粪便
食欲减退、恶心、呕 吐、腹部痛及腹泻
大肠埃希菌
中等大小的圆形、凸起、表面光滑、湿润、浑浊、灰白色菌落， 边缘整齐。
• 根据观测平板上是否生长了可疑菌落，再 进行全套生化实验来进行确认。
KIA/MIU/吲哚实验 甘露醇/触酶/氧化酶/药敏实验
PART2.病毒性感染
病毒科 呼肠孤病毒科
杯状病毒科
星状病毒科
腺病毒科
病毒属
轮状病毒
基因组特征 双股RNA，呈片段状
严重腹泻，伴随发热、恶 心、呕吐
来自百度文库
腹泻，量少或多，呈水 样便或稀便，少数可排
出粘液，呕吐
①大便常规；②酶联
鉴别诊断
免疫吸附试验；③核 酸电泳图谱分析
（PAGE）④电镜或免 疫学方法直接查病毒 。血标本：双份血测 轮状病毒抗体有否4倍
免疫电镜法(IEM)、 ·酶链免疫法
(ELISA)、杂交技术 和RT-PCR、实时定量
极有可能是轮状病毒感染
微生物综合技术
细菌性感染？ 病毒性感染？
微生物综合技术
患儿的临床症 状
血常规
采样（粪便、呕吐物、血液）
细菌性感染
病毒性感染
增菌
细菌、病 毒快速诊 断
确诊实验
（阳、阴性） （阳、阴性）
分离培养
寻找可疑菌落 （若出现可疑 菌落后的生化 实验）
结果对比 结论
微生物综合技术 ●病人样本：粪便、呕吐物、血液
粪便采集 呕吐物搜集 血液采集
1.应在使用抗菌药物之前采集。
1.在服药之前，静脉抽血 2尿不.尽不低量湿于不吸要0水.收5性m集强l,尿用，不红细湿菌头内或管的病进粪毒便， 容行在易抽使被血用吸，抗走，及菌出时药现检物假测之阴血前性。常将规呕， 避吐免物凝盛血于。无菌容器内或置 32于.将.血保新常存鲜规液液状检、粪测增便后菌取进液絮行状中离物及盛心时于， 无取送菌血检容清。器及内或时置进于行保快存速液、诊断 增实菌验液（中胶送检体。金、ELISA）