IL-8在脂多糖致急性肺损伤中的作用和维拉帕米的保护作用

（ １ ） Ａ Ｌ Ｉ 组（ Ｌ Ｐ Ｓ 组） ； １ ０ 只， 于 尾静脉注 射脂多 糖５ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ ， （ ２ ） Ｌ Ｐ Ｓ ＋ Ｖ ｅ ｒ ａ ｐ ａ ｍ ｉ ｌ 组： １ ０ 只， 于尾静脉注射脂多搪５ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ
后立即注射维拉帕 米（ Ｖ ｅ ｒ ａ ｐ ａ ｍ ｉ ｌ ） ０ ． ５ ｍ ｇ ／ ｋ ｇ ａ
中国医科大学 硕士学位论文 IL-8在脂多糖致急性肺损伤中的作用及维拉帕米的保护作用 姓名：孙立志 申请学位级别：硕士 专业：内科学 指导教师：陈佰义 2000.4.1
中 文 摘 要
前
官
一 隐性 肺 损 伤（ Ａ Ｕ ） 是 由 众 多 病因 引 起的 急 性 肺 功 能 和 形 态 学
损害。目 前 认为， 急性 肺损伤时大 Ａ的 多形核白 细胞（ Ｐ Ｍ Ｎ ） 于 肺
・２・
实验 方 法
１ ． 大鼠Ａ Ｕ模型的 建立： 将大鼠 装人一自 制的鼠固 定装置中， 先用７ ５ ％的 酒精清洗消毒鼠 尾， 再涂适ｔ二甲 苯， 待尾静脉充盈 可辨， 即从尾静脉注射脂多糖５ ｍ ｇ ／ 吨， 然后将鼠 放人鼠 笼内自 由
活动。
２ ． 实验分组： ３ ０ 只 雄性健康 Ｗ ｉ ｔ ａ ｒ 大鼠随机分为三组：
（ ３ ） 对 照 （ Ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ） 组： １ ０ 只 ， 于 尾 静 脉 注 射 等 体 积 的 生 理 盐 水
代替月 旨 多糖。 所有动物均于注射脂多糖（ Ｌ Ｐ Ｓ ） 或生理盐水６ 小时后经 １ ０ ％
水合抓醛３ ｍ ｌ ／ ｋ ｇ 腹腔注射麻醉后， 行右心室放血活杀。 ３ ． 外周血清的 获取： 大鼠 经１ ０ ％水合抓醛３ ｍ ｌ ／ ｋ ｇ 腹腔注射 麻醉后， ５ 毫升注射器右心室采血， 放人塑料试管中静里－小时，
匀 浆机Ｈ ｅ ｉ ｄ ｏ ｌ ｐ ｈ Ｄ Ｉ Ａ ｘ ９ ０ ０ （ 德国） 超声波粉碎机Ｕ Ｐ ５ ０ Ｈ （ 德国 柏林Ｇ・ Ｓ 公司） 分光光度计（ Ｓ Ｍ ｍ ａ ｄ ｚ ｕ Ｕ Ｖ ２ ６ ０ Ｊ ａ ｐ ａ ｎ ）
光镜及照相器材（ Ｏ ｌ ｙ ｍ ｐ ｕ ｓ Ｊ ａ ｐ ａ ｎ ）
医科大学实验动物部提供） 。 ２ ． 主要试剂： 脂多箱（ Ｌ Ｐ Ｓ 丐 几ｓ ｉ ｇ ｍ ａ ）
维 拉帕 米（ Ｖ ｅ ｒ ａ ｐ ａ ｍ ｌ ｉ 上海禾丰制 药有限 公司批号： ９ ８ ０ ４ ０ １ ）
白 细胞介索 一 ８ 放免药盒（ Ｉ Ｌ 一 ８ Ｒ Ｉ Ａ Ｋ Ｉ Ｔ 北京解放军总医院 科技开发中心放免所） 翻过暇化物醉（ Ｍ ） 侧试盒（ 南京建成生物工程研究所） ３ ． 主要仪器， Ｇ Ｃ 一 １ ２， 放射免疫计数器（ 中国科学技术大 学科技实业总公司中佳光电仪器分公司）
内扣押是其介导肺血管通透性增加、 肺水肿、 微血栓形成及上皮广 泛损伤的关键所在； 也是临床 Ｉ Ｃ Ｕ中一类极常见且十分危险的病 症， 如处理不及时， 极易引起成人呼吸窘迫综合症导致死亡。我国 尚 无有关发病率的报道． 美国每年约有 ｌ ｓ ｏ ， ｏ ａ ） 人 亡率高 达ｓ ｏ ％以上。可见Ａ Ｌ Ｉ 是一种严重危害人类健康的 急性肺损伤的发病机制不清， 有证据表明， 扣押在肺内的 中性白细胞（ Ｐ Ｍ Ｎ ） 是造成炎症反应的重要效应细胞 ， 细胞因子及 其网络在急性肺损伤发生发展中的作用日 益引起人们的关注。 Ｉ Ｌ 一 ８ 是由 单核细胞和内皮细胞合成分泌的对中性粒细胞具有极强 趋化活化作用的一种重要的细胞因子， 与炎症反应关系密切。体 外研究表明， Ｉ Ｌ 一 ８ 与Ｐ Ｍ Ｎ表面特异性受体结合， 导致细胞变形 反应、 脱颗粒反应、 呼吸爆发、 以及释放溶酶体和过氧化物， 从而促 进炎症反应。Ｋ ｕ ｎ ｋ ｅ ｌ 的研究证实当Ｉ Ｌ 一 ８ 结合高亲和性的Ｐ Ｍ Ｎ 表面受体后， 通过 Ｇ Ｔ Ｐ 结合蛋白 激活Ｐ Ｍ Ｎ ， 发挥生物学效应， 这一
ｎ ｉ ｍ ／ ｒ ０ ２ １
４ ． Ｂ Ａ Ｌ Ｆ 中 细胞计数： 取出心肺暂时结扎右肺， 将１ ８ 号腹穿针
， 离 心１ ０ 分 钟பைடு நூலகம்， 留 取 血 清 于一 ７ ０ ℃ 冰 箱 待 律Ｉ Ｌ 一 ８ ，
燃
过 程具 有 ． ｃ ａ ｚ 及蛋白 激酶Ｃ （ Ｐ Ｋ Ｃ ） 依赖性。 有资料显示此激活 过
程的信号传递系统与Ｐ Ｍ Ｎ 趋化机制相同。
川阻 滞 Ｐ Ｉ １ ７ 一 Ｉ ｌ ｙ ａ ｏ ｒ ｘ ｙ ｗ ｏ 曲 画 ｎ 、 星 状 抱 子 素 ， 。 蛋 白 阻 滞 剂 百
日 咳毒素（ Ｐ Ｔ Ｘ ） 以 及钙离子阻断剂异搏定、 心痛定、 地尔硫卓等特 异性阻滞， 表明Ｉ Ｌ 一 ８ 受体介导的 信号传递既涉及细胞膜钙通道 开放， 又涉及受体偶联的对 Ｆ Ｉ Ｘ敏感的Ｇ蛋白亚单位转导、 Ｐ Ｋ Ｃ
・１・
了国 外 已 有 实 验 证 实Ｉ Ｌ 一 ８ 所 致 粒 细 胞 内 生 化 产 物 的 变 化 可 被
激活和磷脂酷肌醉的代谢， 国内尚 未见相关实验性文献报道。 我们采用大肠杆菌脂多糖（ Ｌ Ｐ Ｓ ， 为内毒素的主要成分） 静脉 内 注射建立 Ｗ ｉ ｓ ｔ ａ ｒ 大鼠Ａ Ｌ Ｉ 实验模型， 检测支气管肺泡灌洗液 （ Ｂ Ａ Ｌ Ｆ ） 、 肺泡巨噬细胞（ Ａ Ｍ ） 培养上清及外周血清中Ｉ Ｌ 一 ８ 水平， 肺支气管 肺泡灌洗液中细胞总分数计数， 肺组织匀浆髓过氧化物 酶活性侧定， 评价Ｉ Ｌ 一 ８ 在Ａ Ｕ发生、 发展中的作用； 通过钙离子
通道阻断 剂维拉帕 米（ Ｖ ｅ ｒ ａ ｐ ａ ｍ ｉ ｌ ） 对Ｗ ｉ ｓ ｔ ａ ｒ 大鼠ＵＳ 致Ａ Ｕ模型
的干预作用， 探索其对大鼠实验性Ａ Ｌ Ｉ 的保护作用。
实验材料
１ ． 实验动物： 雄性Ｗ ｉ ｓ ｔ ａ ｒ 大鼠３ ０ 只（ 体重 １ ８ ０ － ２ ２ ０ ８ ， 由中国