食品中甜蜜素的研究

（3）回收率实验 • 回收率实验是检验系统误差的方法之一，本实验 采用标准加入法测定回收率，即测定了样品中甜 蜜素的含量后，用相同的试样，加入一定量的 1000.0μg/mL甜蜜素标准储备液，按照样品预处 理方法进行处理后，进行分析测定。取百事可乐 样品进行回收率实验，添加浓度为10.00 μ g/mL 的甜蜜素溶液，结果如下表所示。
三、结果与讨论
• 采用光度法测定物质的条件必须是该物质对紫外 一可见光有选择性的吸收，即在波长200-780 nm 范围内有吸收峰存在。 • 为此本实验对甜蜜素标准溶液、亚硝酸钠溶液， KI溶液及按实验方法处理的操作试液的吸收光谱 分别进行了测定和研究。采用双光束紫外一可见 分光光度计，以去离子水为参比，在波长200500 nm范围内扫描溶液的吸光度。反应产物在 288 nm, 350 nm波长处均有吸收。在I3-的吸收波 长350 nm，亚硝酸钠溶液、KI溶液和盐酸均无吸 收峰，即创门在此波长附近都不干扰I3-的测定， 同时由实验可知波长288 nm的吸收峰不稳定，而 且有碘化钾的背景吸收，不利于甜蜜素的准确测 定，故本实验选择350 nm为测定波长。
• 目前，有些生产企业为牟取暴利，在生产中 存在一些严重超范围、超限量使用甜味剂、 防腐剂的问题。在中小城市、城镇农村的小 企业生产的乳饮料、果汁饮料中，甜味剂超 标现象尤其严重，有些产品甚至全部或大部 分使用甜蜜素，这些产品主要消费对象为儿 童，危害极大。与容易导致急性食物中毒的 微生物污染、农药残留、使用违规化工原料 等行为对比，违规使用甜蜜素的后果在短期 内似乎比较轻，但长此以往必然危害消费者 健康，损害我国食品添加剂行业的声誉并影 响食品工业的健康发展。因此，对甜味剂、 防腐剂进行有效监控、检测是十分必要的。
3.2 操作步骤
• 准确移取2.5 mol/L HCl溶液1.0 ML于50 mL比色
管中，移取样品滤液5.0 mL，加入2.0 mmol/L的 亚硝酸钠溶液1.6 mL，用去离子水洗比色管口， 漩涡1 min后于避光处 放置20 min后，迅速加入0.05 mol/L KI溶液2.0 mL，用去离子水稀释至刻度，摇匀后，于暗处放 置10 min。 以去离子水作参比液，用10 mm比色皿于波长 350 nm处测定溶液的吸光度。
• (5) TGL-16G离心沉淀器(上海安亭科学仪 器厂)。
2.2 试剂 • (1)盐酸，分析纯(沈阳化学试剂厂); • (2)碘化钾，分析纯(沈阳市医药公司化玻站试剂分 装厂); • (3)硫酸，分析纯(辽宁省兴城市红星化工厂); • (4)磷酸，分析纯(沈阳化学试剂厂); • (5)亚硝酸钠，分析纯(沈阳市试剂一厂); • (6)甜蜜素，标准物质(国家标准物质研究中心); • (7)苯甲酸，分析纯(沈阳市新西试剂厂); • (8)山梨酸，标准物质(国家标准物质研究中心); • (9)糖精钠，标准物质(国家标准物质研究中心);
3.3 标准曲线的绘制 • 移取2.5 mol/L的盐酸溶液1.0 mL于8支50 mL比 色管中，分别准确加入1000.00ug/mL的甜蜜素标 准溶液0.06, 0.10, 0.20, 0.30, 0.40, 0.50, 0.60, 0.70 mL，加入2.0mmol/L亚硝酸钠溶液1.6 mL, 漩涡混合1 min，暗处反应20 min后，加入0.05 mol/LKI溶液2.00 mL定容后，暗处放置10 min， 得到浓度分别为1.2, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0,12.0, 14.0 pg/mL的甜蜜素标准系列，并测定相应吸光 度值A。不加甜蜜素，按照上述操作步骤，所测 得吸光度A。
• 使用紫外一可见分光光度计，建立一种简便、快捷、准确、 灵敏的检测方法，以满足食品中甜蜜素的检测的需要。紫外 光度法测定样品时，可以直接用蒸馏水定容，对前处理过程 的要求不是很高，仪器操作简单，没有经过专业训练的人也 可完成。本法测定结果较准确，检出限低至0.3ug/ml（色谱 法检出限为1.3g/ml）.
操 作 试 液 谱 图
硝酸钠试液
碘 化 钾 试 液 盐酸试液
1、实验数据记录及处理 • （1）标准系列吸光度
（2）检出限及精密度实验
• 在最佳的分析条件下，平行移取7份浓度为12.0 μg/mL的 甜蜜素标准溶液，按实验方法进行实验，并在所选定的实 验条件下，测定相应的吸光度，其实验结果如表3.5所示 。
食品中甜蜜素的研究
---紫外光度法测定其含量
主讲人：曾秋莲 组员：覃小洁、赵方霞、 廖秀芬、王静敏
目录
• • • • • 一、前言 二、实验 三、结果与讨论 四、实验优化 五、实验的优缺点
一、前言
• 1.甜蜜素简介： • 甜蜜素的化学名称为环己基氨基磺酸钠(或钙)， 是cyclamate，化学式为C6H12N03SNa，其结构式 见图1.2。
加 了 甜 蜜 素 的 蛋 糕
2、甜蜜素的历史发展进程
• 1949年美国最早批准用于食品，其问题是目前对甜 蜜素的致癌性尚无定论。 • 1969年有人报道高浓度的甜蜜素与糖精钠的混合剂 可以导致大鼠膀肤癌。 • 20世纪70年代，甜蜜素因被怀疑可以代谢生成环己 胺而有致癌性，在美国、英国等国家禁用。 • 1982年JECFA经多项长期实验认为甜蜜素没有致膀 肤癌性。 • 1986年美国国家科学研究会和国家科学院 (NRC/NAS)报告本品有促进和致癌的可能。 • 1987年我国批准使用甜蜜素，主要用于蜜饯、糕点、 饮料、炒货等，它是目前我国食品行业中应用最多 的一种甜味剂。
毛细管电泳法
分光光度仪
气--质联用色谱仪
• 目前国家标准中规定测定食品中环己基氨基磺酸钠(甜蜜素) 的方法主要有比色法、气相色谱法、薄层色谱法三法，其中 首选方法即是气相色谱法，首先在硫酸介质中环己基氨基磺 酸钠与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸醋后，利用气相色谱 法进行定性和定量。测定结果很大程度上取决于待测样品的 处理过程，衍生条件的选择以及衍生效率的提高，因此测定 误差较大。 • 建立一种简便、快速、准确的甜味剂和防腐剂的同时测定的 方法，可以节约大量人力、物力，所以具有十分重要的实际 应用价值。
由表中的结果可知，相对标准偏差RSD <5%，可认为本实验在所选定的分析条 件下测定的结果，符合精密度的要求，可靠性大。 方法的检出限即方法的最小检出浓度，其最基本的定义是指能产生一个确证在 试样中存在被测组分的分析信号所需要的该组分的最小含量或最小浓度。 将表中的结果代入算式得出最小检出浓度为: DL=3S/b=3 x 0.0058/0.5702=0. 3ug/ml 则样品的最小检出量为7.5μg/ml。
2011年5 月，北 京“唐 僧肉” 门
人人都在 质疑，你 敢放心食 用吗？？
3、前人对甜蜜素的探索 • 目前国内外对各类食品中的甜味 素含量的分析报道较多，包括分 光光度法，电化学方法，毛细管 电泳方法，离子色谱法，气相色 谱及气相色谱质谱联用方法，液 相色谱与液相色谱一质谱联用方 法，以及流动注射技术与不同分 析方法的联用等方法。
• (4) 0.2 mol/L亚硝酸钠的配制: 称取0.690 g亚硝酸钠固体，用去离子水溶解后转 移至50 mL容量瓶中，定容至刻度，得到0.2mol/L 亚硝酸钠溶液，避光放置或保存于棕色瓶中。 • (5) 2.0 mmollL亚硝酸钠的配制: 吸取0.2 mol/L亚硝酸钠1.0 ML于100 ML容量瓶 中，去离子水定容至刻度，临用时新配。 • (6) Crattz试剂I:亚铁氰化钾106 g/L，称取10.6 g 亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100 ML. • (7) Crattz试剂II:乙酸锌220泌，称取22 g乙酸锌， 用水溶解并稀释至100 ML.
3.试验方法 • 3.1 预处理 • (1)汽水等碳酸型饮料 称取5.00 -10.00 g样品于50.00 mL容量瓶中，加 入少量流动相，超声脱气10 min,加入Crattz试剂I 、Crattz试剂if各0.5 mL，用流动相定容至刻度， 混匀后放置15 min。取上清液约5 mL在4000 r/min下离心10 min，上清液过0.45um滤膜。 • (2)乳饮料、醋 称取约5.00 g样品于50.00 mL容量瓶中，加入少 量流动相，加入Crattz试剂I、Crattz试剂II各5.00 mL，用流动相定容至刻度，混匀，超声10 min后 放置15 min。取上清液约5 mL在4000 r/min下离 心10 min，上清液过0.45 um滤膜。 • (3)固体 将固体样品均质后称取约2.00 g，操作同(2).
• 甜蜜素纯品为白色粉末状物质，相对分子量为 201.22，酸式物为白色结晶或粉末，无臭或几乎无 臭，有甜味，熔点为159一170‘C，易溶于水，极微 溶解于乙酸，在光、热、空气中稳定，具有耐酸碱、 不吸潮等优良特性，甜度是蔗糖的30-80倍，甜度纯 正、风味自然，在食品加工中具有较好的稳定性， 可以代替蔗糖或与蔗糖混合使用，能高度保持食品 原有的风味，并能延长食品的保存时间。
• 由上表中的测定结果可以看出，甜蜜素的 回收率在102.3~103.3%之间，样品回收率 测定的相对标准偏差均小于5%，表明分析 结果可靠，可以满足日常分析检测的 • 要求。
• (1) 根据我国《食品添加剂使用卫生标准》（GB 2760）的规定，“甜蜜素”可以作为 甜味剂，其 使用范围为： • 一，酱菜、调味酱汁、配置酒、糕点、饼干、面 包、雪糕、冰淇淋、冰棍、饮料等，其最大使用 量为0.65g/kg； • 二，蜜饯，最大使用量为1.0g/kg； • 三，陈皮、话梅、话李、杨梅干等，最大使用量 8.0g/kg。本法中甜蜜素的测定检出限为0.3ug/ml. 足以检出食品中甜蜜素的含量。 • (2) 测定结果中，甜蜜素的回收率在102.3%103.3%之间，样品回收率测定的相对标准偏差均 小于5%，表明分析结果可靠，可以满足日常分析 检测的 要求。
• (10)蔗糖标准物质，分析纯(天津科密欧化学试剂
开发中心); • (11)葡萄糖标准物质，分析纯(天津科密欧化学试 剂开发中心); • (12)咖啡因，分析纯(Lancaste:公司); • (13)柠檬酸，分析纯(东北制药总厂一分厂)。
2.3 试剂的配制 • (1)1000ug/ml甜蜜素标准储备液的配制: 准确称取0.1000 g甜蜜素，加少量去离子水溶解 后转移至100 ML容量瓶中，定容至刻度，得到 1000 A.g/mL甜蜜素标准储备液。 • (2) 2.5 mol/L盐酸溶液的配制: 取浓盐酸52.1 mL于250 mL容量瓶中，用去离子 水定容至刻度，得到2.5 mol/L盐酸溶液。 • (3) 0.05 mol/L碘化钾溶液的配制: 称取2.075 g碘化钾固体，用去离子水溶解后转移 至250 mL容量瓶中，定容至刻度，得到0.05 mollL碘化钾溶液，避光放置或保存于棕色瓶中。
2、仪器和试剂
• 2.1仪器 • (1) TU-1900双光束紫外一可见分光光度计(北京 普析通用仪器有限责任公司);
• (2) MVS-1漩涡混合器(北京北德工贸有限公司);
• (3) BS110S电子天平(Sartorius公司); • (4) KH-100B型超声波清洗器(昆山禾创超声 仪器有限公司);
二、实验
• 1、方法与原理： 采用紫外光光度法间接测定食品中甜蜜素 的是基于以下原理。 在一定的酸性介质中，甜蜜素与过量的亚 硝酸钠发生等摩尔氧化还原反应，生成环 己烯和硫酸以及氮气，剩余的亚硝酸钠继 续与过量的KI发生氧化还原反应，生成I3，其化学反应式如下：
在波长350 nm处有灵敏的吸收，未加甜蜜素溶液 测得吸光度A与加入甜蜜素溶液吸光度A两者之差 △A(△A=Ao-A)为甜蜜素所产生的吸光度，利用 △ A与甜蜜素浓度的线性关系，即可采用标准曲线 法定量求出食品中甜蜜素的含量。
• 本品常与糖精钠混合使 用，可增强甜度并 减少糖精的后苦味，同 时降低成本。因此 甜蜜素可广泛用于调味 品、果酱、果冻、 冰淇淋、糕点、蜜饯、 饮料等食品，同时 还可以与其它甜味剂混 合使用，在医药上 可用于糖尿病、肥胖症 等患者的甜食。到 目前为止，我国等40多 个国家允许在各类 食品中使用。