【CN110201419A】一种以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱及其制备方法【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910385950.3

(22)申请日 2019.05.09

(71)申请人 西安交通大学

地址 710049 陕西省西安市咸宁西路28号

(72)发明人 韩省力　张涛　贺浪冲　付佳　

吕艳妮　林园园　

(74)专利代理机构 西安通大专利代理有限责任

公司 61200

代理人 徐文权

(51)Int.Cl.

B01D 15/10(2006.01)

B01D 15/22(2006.01)

B01J 20/281(2006.01)

B01J 20/30(2006.01)

C12N 11/08(2006.01)

G01N 30/02(2006.01)G01N 30/60(2006.01)G01N 30/88(2006.01)

(54)发明名称一种以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱及其制备方法(57)摘要本发明公开了一种以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱及其制备方法，属于细胞膜色谱柱技术领域。该细胞膜色谱柱是以细胞膜包裹聚乙烯醇微球制成细胞膜固定相，再将细胞膜固定相采用湿法装柱制得。以细胞膜包裹聚乙烯醇微球制成细胞膜固定相，由于聚乙烯醇微球表面具有丰富的羟基和醛基，不仅可以与细胞膜通过疏水作用结合，醛基基团还可以通过与膜上丰富的磷脂氨基基团反应，从而达到让聚乙烯醇微球和细胞膜共价连接的目的，使细胞膜在固定相上的固定更加稳定，从而延长细胞膜色谱柱的寿命。同时在一定程度上改善了硅胶为载体时细胞膜易脱落，

pH适用范围窄的问题。权利要求书1页 说明书6页 附图3页CN 110201419 A 2019.09.06

C N 110201419

A

权　利　要　求　书1/1页CN 110201419 A

1.一种以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱，其特征在于，该细胞膜色谱柱是以细胞膜包裹聚乙烯醇微球制成细胞膜固定相，再将细胞膜固定相采用湿法装柱制得。

2.根据权利要求1所述的以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱，其特征在于，所述聚乙烯醇微球是以聚乙烯醇为原料，以戊二醛为交联剂，在酸性条件催化下，采用反相悬浮-化学交联法制得。

3.根据权利要求2所述的以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱，其特征在于，通过控制聚乙烯醇的浓度、戊二醛用量和酸催化条件能够调节聚乙烯醇微球的刚性、粒径和分散性。

4.根据权利要求1～3中任意一项所述的以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱，其特征在于，聚乙烯醇微球的平均粒径为4μm。

5.根据权利要求1～3中任意一项所述的以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱，其特征在于，细胞膜采用EGFR细胞膜。

6.一种以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)以聚乙烯醇为原料，以戊二醛为交联剂，在酸性条件催化下，采用反相悬浮-化学交联的方法，制得球形形状规整且尺寸均一的聚乙烯醇微球；

2)培养细胞，当细胞计数不低于107个时，去除培养基，获得细胞，分离出细胞膜；

3)将细胞膜配制成细胞膜悬液，在真空条件下将细胞膜悬液加入步骤1)制得的聚乙烯醇微球中，搅拌均匀后静置过夜，得到以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜固定相；

4)将聚乙烯醇微球为载体的细胞膜固定相采用湿法装柱获得以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱。

7.根据权利要求6所述的以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，步骤1)中，制得的聚乙烯醇微球的平均粒径为4μm。

8.根据权利要求6所述的以聚乙烯醇微球为载体的细胞膜色谱柱的制备方法，其特征在于，步骤2)中，将获得的细胞用Tris-HCl混悬后置于细胞超声破碎仪中进行破碎，然后通过差速离心分离出细胞膜。

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