主要动物药化学成分.

中药实例
牛黄 牛科动物黄牛或水牛的胆囊结石。含胆红素 (72-76.5%)、胆汁酸(8%)、SMC(肽类7%)、胆固醇、 麦角甾醇和多种氨基酸、无机盐等。具有镇痉、镇 静、解热、解毒等作用。

熊胆 熊科动物黑熊的干燥胆囊胆汁。主要成分为胆 汁酸、牛磺熊去氧胆酸，还含有牛磺鹅去氧胆酸、 牛磺胆酸、游离熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸等。具有 清热、镇痉、明目、杀虫等作用。
第11章
主要动物药化学成分
掌握动物药的主要有效成分的理化物质和检识。
概述


研究进展 生理活性
11.1 胆汁酸类及含该类成分的主要中药

胆汁酸的结构特征及其在动物界的分布 胆汁酸的化学性质、颜色反应和检识 中药实例
结构特征和分布
*胆汁酸：胆烷酸衍生物（混合物），在动物胆汁中 常与甘氨酸或牛磺酸以肽键结合成甘氨胆汁酸或牛磺 胆汁酸并以钠盐形成存在。 分布：动物胆汁中。高等动物含24个C，如胆酸、去 氧胆酸等；鱼类、两栖类、爬行类含27或28个C，如 粪甾烷酸等。不同种属动物，胆汁酸组成不同，结合 比例也不同。 结构特征： （1）A/B顺(正系)或A/B反(别系)，B/C反，C/D反； （2）β：C10-CH3、C18-CH3、C17-侧链； （3）α：C3-OH或其他位-OH（少数为β）。
化学成分


蟾蜍浆：蟾蜍的耳下腺及皮肤腺的白色分泌物， 主要含蟾毒。 蟾酥：蟾蜍浆加工干燥而成，主要为蟾毒水解产物。 主要成分： （1）蟾蜍甾二烯类（强心作用） （2）强心甾烯蟾毒类（强心作用） （3）吲哚碱类 （4）甾醇类 （5）其他：肾上腺素、多糖、蛋白质、有机酸等。
（1）蟾蜍甾二烯类 结构特点：A/B顺(粪甾烷型)、B/C反、C/D顺； C3β-OH、C14β-OH或C14,15β-环氧； C5,C11,C16,C19有-OH、C=O、乙酰氧基等； -OH：C5,C6:β、C11:α、C12:α或β。 分类：游离型：蟾毒配基 结合型：蟾毒 蟾毒配基脂肪酸酯 蟾毒配基硫酸酯
色谱检识

纸色谱（分离效果好，展层时间长） 固定相：70%乙酸浸渍滤纸 展开剂：异丙醚-庚烷（不同比例） 显色剂：10%磷钼酸乙醇液等

Leabharlann Baidu薄层色谱
吸附剂：硅胶
展开剂：游离：异辛烷-异戊醚-冰乙酸-正丁醇-水 (10:5:5:3:1）
结合：甲苯-冰乙酸-水（10:10:1）
显色剂：10%磷钼酸乙醇液、酶试剂等。 如3α-羟基甾体氧化酶，选择性地检出3α-羟基。 喷后37℃保温30min，可用于尿、血清中胆汁酸测定。

气相色谱 色谱柱：OV-17 载气：氮气 检测器：氢火焰 游离型胆汁酸需衍生化； 结合型胆汁酸先碱水解游离，再衍生化。
高效液相色谱 色谱柱：Bilepak 流动相：A：乙腈-10mM磷酸二氢钾（4:6） B：乙腈-30mM磷酸二氢钾（1:4） 梯度洗脱 流速：1ml/min 检测：收集的洗脱液与3α-羟基甾体氧化酶及NAD作 用，3α-羟基被氧化成C＝O，NAD被还原为NADH，后者有 荧光，可用光度计检测。很灵敏，但不能区别胆汁酸与 胆汁醇(红外)。

甾环上羟基的乙酰化反应 保护羟基，且易结晶，利于胆汁酸的纯化和精制。 甾环上酮基的还原反应 先将甾环-OH氧化成-C=O，再用还原法除去酮基。 氧化剂：重铬酸钾、硫酸-硝酸混合液 还原剂：Wolff-Kischner-黄鸣龙 NaOH(KOH)+ 85%水合肼 用于制备各种胆汁酸。
颜色反应



O
O
O
O
OH COO H (CH2)6CONHCH(CH 2)3NHCNH 2 COOH NH NaO3SO H
OH
蟾毒灵-3-辛二酸精氨酸酯
O O
蟾毒灵-3-硫酸酯
O O
O HO HO
OH COO H (CH2)6COOH (CH2)6COOH COO H
OH
日蟾毒它灵-3-半辛二酸酯
OH COOH H H
去氧胆酸(24个C) 3α ,12α -二羟基胆烷酸
12表-去氧胆酸(定向) 3α ,12β -二羟基胆烷酸
异-去氧胆酸(位置) 7α ,12α -二羟基胆烷酸
COOH
OH
COOH
H H H OH HO H H
H H OH
H
粪甾烷酸(28个C)
3α ,7α ,12α -三羟基-△ 23-粪甾烯酸
Pettenkofer反应 胆汁，蒸馏水、10%蔗糖，摇匀，沿管檗加浓硫 酸，冷却后界面处有紫色环。 Gregory Pascoe反应 胆汁，45%硫酸、0.3%糠醛，摇匀，水浴加热 30min，胆酸层显蓝色(可定量)。 Hammarsten反应 胆汁，20%铬酸溶液、乙酸，温热，胆酸显紫色， 鹅去氧胆酸不显色。
化学性质

末端羧基的反应 成盐：易溶于水，用于精制各种胆汁酸。 成酯：先析出结晶，酸水解后又游离出胆汁酸。 催化剂：浓硫酸、浓盐酸； 去氧胆酸甲酯：用重氮甲烷进行酯化； 猪去氧胆酸甲酯：与离子交换树脂结合， 用含盐酸的甲醇洗脱。 还原反应：-COOH还原成-CH2OH 还原剂：氢化锂铝、金属钠。

OH CONHCH2CH2SO 3H H H OH
H
甘氨胆酸 3α ,7α ,12α -三羟基-5-β -胆烷酸-N-(羧甲基)-酰胺
牛磺胆酸 3α ,7α ,12α -三羟基-5-β -胆烷酸-N-(磺酸乙基)-酰胺
OH COOH H H HO H H HO H H
OH COOH H H H H
OH COOH C H A H H B H HO H D H H H OH HO H H COOH
OH COOH H H OH
胆烷酸
胆酸 3α ,7α ,12α -三羟基-5-β -胆烷酸
别胆酸 3α ,7α ,12α -三羟基-5-α -胆烷酸
OH CONHCH2COOH H H HO H OH HO H H

干燥熊胆汁
加甲醇溶解,适当浓缩后进行柱层析 用苯-冰乙酸(8:2)下行展开,切取样品段,用甲醇回流
甲醇液
浓缩后,加入20%NaOH沸水水解20h
水解液
浓盐酸酸化,滤取不溶物
不溶物
用乙醇-水,乙酸乙酯反复重结晶
白色结晶
制备薄层色谱
COOH
熊去氧胆酸精品
HO OH
11.2 蟾蜍浆和蟾酥

化学成分 检识和鉴定