胎盘滋养层细胞分离培养研究进展

胰酶及 ＤＮａｅ Ｉ酶混 合液 （ １ 继 续消 化 ２ ｎ ｓ １： ） ０ｍｉ， 总消 化时 间 控 制 在 ４ ｎ左 右 。张琴 等［ 采 用 此 ０ｍｉ １ 方法获 得 的细胞 悬 液 以单 细 胞 为 主 ， 台盼 蓝 染 色 经 后 ， 胞活 性近 ９ ， 离效 率在 ９ 左 右 。 细 ５ 分 Ｏ
养 的模 型是 必要 的 ， 文就 滋养 层 细胞 分 离及培 养 方法进 行 了综述 。 论
关键 词 ： 胎盘 ； 妊娠 疾 病 ；滋 养层 细胞 ；分 离；培养
中 图分 类 号 ： ７ １ ４ Ｑ １ ． Ｒ １． ； ８３Ｉ 文献 标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： ０ ７ ５ ３ （ ０ ２ ０ —０ ７ ０ １ ０ — ０ ８ ２ １ ） ３０ ９ — ４
胎 盘是 哺乳 动物 妊娠期 间 由胚 胎 的胚 膜 和母 体 子 宫 内膜 联 合 形 成 的 母 子 间交 换 物 质 的过 渡 性 器
官 ， 有滋养 层 细胞 、 含 血管 内皮 细胞 、 纤 维 细胞 、 成 霍
２ 滋养 层 细胞 的分 离 与 纯 化 方 法
滋 养层 细胞 的分 离与纯 化方 法 大体 上 分为 以下 两步 ： 细胞 悬液 的制 备 ； 单 细胞 的分离 与纯化 。
２ １ ２ 胶 原 蛋 白酶 法 即用 １ｇ Ｌ 的胶 原 蛋 白酶 ． ． ／
度 的细胞 ， 为滋 养 细 胞 及 相关 疾 病 的研 究 提 供 重 要
的实验 基础 ， 促进 滋养 层 细胞及 其 相关 疾 病 的研究 。 本 文 就 国内外滋 养层 细胞 分离 培养 方法 进 行综 述 和
细胞 与毛 细血 管 内皮 细胞 以及 二者 间的基 膜 构成 胎 盘 屏 障 ， 为各 种 营养 物 质 、 些 药 物 、 毒 和 激 素 成 某 病 等从母 体 进 入 胎 儿 的必 经 之 路 。 滋 养 层 细 胞 的 增
殖 、 能调 节失 常 与 多种 妊娠 相 关 疾 病 的发 生 发 展 功
层 细胞 ， 并分 泌激 素 和蛋 白质等 物 质进 入母 体 循 环 。 早 孕期 的滋 养 层 细胞 的增 殖 能 力 很 强 ， 着 妊 娠 的 随 进 展而 逐渐 下 降 ， 并且 细 胞 滋 养 层 细 胞 的凋 亡 率 随 着妊 娠进展 而 显 著增 高 ， 而合 体 滋 养 层 细 胞 的凋 亡 率随 着妊娠 进展 则显 著下 降 。
２ １ 单 细 胞 悬 液 的 制 备 ．
夫 鲍尔 （ ｆａ ｅ） Ｈｏｂ ｕ ｒ 细胞 及 血 细 胞 等 多 种 细胞 成 分 ，
扮 演 着供给 、 排泄 、 代谢 、 泌 、 分 免疫 等 角色 。滋 养 层
目前应 用最 广泛 的是 消化 分离 法 。归 纳起 来 有
以 下 ６种 方 法 。
１ 滋 养 层 细 胞 的 特 点
滋养层 细胞 为 一 层 扁 平 的上 皮 细 胞 ， 胎 盘 形 在 成 的过程 中 ， 分 化 为 绒 毛 滋养 层 和 绒 毛 外 滋 养 层 可
两 种 表型 ， 即参 与 营养 物 质 和 代 谢 产 物 转 运 的合 体
滋养 层细胞 和具 有侵 袭性 的细 胞滋 养 层细 胞 。在 胚 胎 的植入 过程 中 ， 养层 内 的 细胞 不 断 侵 袭 母 体 子 滋
（ 南科技大学动物科技学 院， 南洛 阳 ４１０） 河 河 ７ ０ ３
摘 要 ： 胎盘屏 障是 营养物质 、 药物 、 毒等 从母 体进 入胎 儿的 必经之 路 ， 病 与反 复 自然流产 等 多种产 科疾
病有 关 。滋 养层 细胞是 胎盘屏 障的重要 组成 成分 ， 而滋养 层 细胞 具 有 内分 泌 的功 能 ， 增 殖 、 能 调 节 失 常 其 功 与 多种妊 娠 相 关疾病 的发 生发展 有 密切 关 系。为 了揭 示产科 疾病发 生、 发展 的ｔ ＊ ， 立 滋养层 细胞体 外培 ｒ ，建 ｕｌ
收 稿 日期 ： ０ １０ — １ ２ １ —６ ０
５ ｔ／ ０￣ ｍＬ的 ＤＮａｅＩ酶 的混 合液 在 ３ ℃水 浴条 件 ｇ ｓ Ｖ ７
明 ， 大呈椭 圆形 ， 见少量 含 多核 的合胞 体 。 核 可
２ １ ３ 蛋 白 酶 ＋ 胶 原 酶 ＋ Ｄ ｓ Ｖ酶 法 即 用 １ ． ． Ｎａ ｅＩ
ｍｇ ｍＬ蛋 白酶 ｌ ０ ５ ｍｇ ｍＬ 的胶 原 蛋 白酶 Ⅳ 和 Fra Baidu bibliotek／ Ｖ， ． ／
宫， 与单个 子宫 上 皮 细胞 融 合 形 成 寿 命 较 短 的滋 养
动 物 医 学 进 展 ，０ ２ ３ （ ） ９ 一０ ２ １ ，３ ３ ：７ｉ ０
Ｐｒ ｇ ｅ ｓ ｉ ｅ ｅ ｉ ａ ｙ Ｍ ｅ ｉｉ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｖ ｔ ｒｎ ｒ ｄ ｃｎｅ
胎 盘滋 养层 细胞 分 离 培 养 研 究 进 展
付 祥 龙 ， 玉玲 ， 小伟 ， 张 翟 陈晓 丽 ， 雪 刚 ， 丽君 ， 麻 靳 刘风 军
２ １ １ 胰 酶／ Ｎａｅ工酶序 贯 法 先 加入 ２ ５ｇ Ｌ ． ． Ｄ ｓ ． ／
胰 酶在 ３ Ｃ水 浴 条 件 下 消 化 １ ｎ 再 加 入 ０ ２ ７。 ０ ｍｉ ， ．
ｇ Ｌ Ｎａｅ 工酶 继续 消化 １ ｎ 最 后 加 入 新 鲜 的 ／Ｄ ｓ ０ ｍｉ ，
有 密切 关 系 ， 可造 成流 产 、 妊娠 高血 压综 合 征 及胎 儿 宫 内发育迟 缓 等许多 产科 疾病 。获 取 足够 数 量 和纯
分析 。
在 ３。 ７Ｃ水浴 条 件 下 消化 ３次 ，５ｍｉ／ ， １ ｎ 次 收集 ３次
的消化 液 ， １ ０目的细胞 过 滤器 进行 过 滤 ， 未 消 用 ０ 将 化 的组 织按 此方 法再 进行 消化 。Ｖａ ｓｌｗ Ｊ Ｌ 通 ｎ ｅｏ 等 ２ 过此法 获得 了大量 的单细 胞 ， 细胞 界线 清楚 ， 浆 透 胞