植物的克隆

①离体状态 ②营养物质
（水、无机盐、维生素、氨基酸、蔗糖、琼脂等）
③植物生长调节剂
（细胞分裂素、生长素）
④其他外界条件
（适宜温度、ＰＨ、无菌、光照（后期））
切取
接种
愈伤组织的形成
此操作过程需要注意什么事项？
移栽
培养室
试管苗的形成
2、植物组织培养的程序
1.配制含有适当营养物质和植物生长调节剂 的含0.7%-1%琼脂的培养基，倒在灭菌试管 中凝固成半固体
色是 绿色 ，这说明根尖细胞含有与叶绿体形成相关的基。因
（6）若利用此项技术制造治疗烫伤、割伤的药物——紫草
素，培养将进行到（填编号） ②
。
脱 分 化
离体的植物器官、 组织、细胞
愈伤组织
植物全能性 的表达
根、芽
胚状体 再生植株
游离单细胞 或原生质体
人工种子
4.植物组织培养分类
按材料的类别分
愈伤组织培养
（5）再生新植株出现
IAA和增减其它激素
植物组织培养形成的愈伤组织进行培养， 又 可以分化形成根、芽等器官，这一过程称为：
A、脱分化 C、再分化
B、去分化
C
D、脱分化或去分化
下列不能作为植物组织培养的材料是： D
A、秋海棠的叶 C、成熟的花粉
B、马铃薯的块茎 D、木质部中的导管细胞
几个概念：
• 愈伤组织：离体的植物器官、组 织或细胞，在培养一段时间以后， 植物组织块切口处细胞在创口的 刺激下通过细胞脱分化、分裂， 形成一种相对没有分化、高度液 泡化、无定形状态薄壁细胞组成 的排列疏松无规则的组织。
通过液体悬浮培养使愈伤组织分散成单细胞（胚性细胞：细胞质 丰富，液泡小而细胞核大），经适宜培养基中成分的诱导，可发 育成胚状体，从而形成新株。
3、原生质体培养
原生质体：去除细胞壁后的植物细胞。
用适当方法进行原生质体培养，也可以获得新植株。
4、单倍体培养
用花药离体培养方法获得单倍体植株。
三、植物组织培养的概念
技术. (2)特点: 保持优良品种的遗传特性; 高效快速地实现种苗的大量繁殖.
植物细胞工程的应用
2.作物脱毒 (1)材料:无病毒的茎尖 (2)脱毒苗:切取茎尖进行组织培养获得
3.神奇的人工种子 (1)特点: 后代无形状分离 不受气候,季节和地域限制 (2)技术:植物组织培养. (3)结构:人工薄膜胚状体或不定芽或顶芽或腋芽.
第二节 植物的克隆
你知道它们的育种方式？
• 矮抗水稻 • 三倍体无籽西瓜 • 抗虫棉
天使花房 手指玫瑰
任务：
“春风欲擅秋风巧，催出幽兰继落 梅。”素有天下第一香之称的兰花，具 有高雅的叶片和芳香艳丽的花朵，自古 就是文人墨客吟诗作赋的对象。但是兰 花在自然条件下播种繁殖难度很大，需 要较长的时间才能获得少量幼苗，你能 否设计一种方法满足人们对兰花的需求 呢？
转基因植物细 胞或重组细胞
培养
具有特定性状新植株
要实现植物细胞工程，你认为应解决哪些关键步骤？
异想天开
发如光何树培内育含发有萤火 虫光的树发呢光？基因。
发光树
发光 基因
提取目的基因 （发光基因）
目的基因与 运载体结合
导入受体细胞 （原生质体）
原生质体培养
检测发光与否
四、植物细胞工程——步骤
步骤一：
是指在无菌和人工控制条件下，将离体
的植物器官（根、茎、叶、花、未成熟的果 实、种子等）、组织（如形成层、花药组织 等）、细胞（体细胞、生殖细胞），以及 原生质体，培养在人工配制的培养基上，
给予适当的培养条件，使其长成完整的植株， 统称为植物组织培养。
原生质体培养成功后，植物细胞工程得以发 展。这是在原生质体培养的基础上，由原生 质体融合和基因工程技术结合的研究领域。
获得转基因植物细胞 或
获得重组植物细胞
步骤二：
将植物细胞培养成新植株
5、植物组织培养的应用
（1）试管苗的快速繁殖 （2）无病毒植物的培育 （3）提取原料 （4）人工种子 （5）转基因植物的培育
人工种子
人工种子解决有些植物结子困难、发芽率 低、繁殖困难等问题。
一、植物繁殖的新途径
1.微型繁殖 (1)微型繁殖技术:快速繁殖优良品种的植物组织培养
植物克隆的技术基础是植物组织培养（cell and tissue culture）
1、植物组织培养的概念的理解
细胞（cell ） 组织（tissue）
无性繁殖 植物体
2、植物组织培养的理论基础—— 细胞的全能性
1、概念 ：植物体的每个活细胞具有遗传上的
全能性,都具有发育为完整植株的潜 能，叫做植物细胞全能性。
★植物组织培养的一般程序：
诱导根、芽顶 端分生组织
再 脱分化 分
化
愈伤组织：相对没有 调节营养物质和 分化的活的薄壁细胞 生长调节剂的适 团组成的新生组织 当配比（P24）
★植物组织培养的一般程序：细胞质丰富、液泡
小而细胞核大（胚 性细胞的特征）
通过悬浮培养 分散成单细胞
再 脱分化 分
化
胚状体
调节营养物质和 生长调节剂的适 当配比（P24）
0.5~0.6mol/L的甘露醇
植物
(较高渗透压)
球型的
植
细胞纤维素酶Fra bibliotek原生质体
株
和果胶酶
防原物止生 细原质胞生质体除体：去吸植 壁水胀破 后的部分
原生质体培养技术的应用
三、植物细胞培养主要几种技术： 1、组织培养
通过调节营养物质和生长调节剂的适当配比，诱导愈 伤组织生芽生根而形成再生新的植株。
2、悬浮细胞培养
发育 条件
• 其他原因
的改
变
有些植物在多次继代培养后，会丧失细胞全 能性的表达能力
• 原因：1.遗传物质发生不可逆转的改变 2.激素平衡被打破或外源激素作用的结果
（5）植物克隆成功的条件
克隆成功所需的条件（a） 1.探讨特定植物细胞全能性表达的条件 2.选择性能优良、细胞全能型表达充分的基因型
问题3：植物细胞可能表现出全能性条件：
植物组织培养的培养基要包含哪些物质呢？
植物组织培养的培养基
• 无机营养成分：大量元素及植物所必需的微量 元素
• 有机营养成分 ① 含N物质：包括维生素和氨基酸 ② 碳源：2%—5%的蔗糖 ③ 琼脂：起支持作用
生长调节剂：（生长素，细胞分裂素） PH值：5.0－6.0
请同学们根据上述过程概括出植物组织培养技 术的流程图，并与同学交流。
包裹人工种皮， 形成人工种子
总结：组织培养的基本操作程序 （1）配置半固体培养基（灭菌）
（2）无菌操作切取一些小块组织 无需光 脱分化 （3）获得愈伤组织
外植体
生长调节物质配比的调控：
（4）诱导愈伤组织
（1）诱导芽的分化：
需光
通过调节营养物质和生 细胞分裂素和激动素 长调节剂的适当配比 （2）诱导根的分化：
养、胚囊的培养
（3）个体：愈伤组织细胞悬浮培养的单细胞→细胞 团→球形胚→心形胚→胚状体→完整植株
六.应用 :
1、快速繁殖（微型繁殖技术；珍稀、濒危物种）
2、培育无病毒（脱毒）植株（病毒在植物体内分布 不均匀，茎尖生长点一般不含病毒。茎尖分生组织培 养结合病毒检测可脱除病毒 ） 3、生产细胞次生代谢产物（药物、食品添加剂、香 料、色素、杀虫剂等
细 胞 培养 器 官 培养 原生质体培养
最为常见的组织培养
悬浮细胞培养 单细胞培养
3、器官培养和细胞培养
器官培养
指以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植 体的离体无菌培养。
细胞培养
指以单个游离细胞为外植体的离体无菌培养。
原生质体培养
细胞培养
指以单个游离细胞为外植体的离体无菌培养。
离体细胞－愈伤组织－根、芽、花－植株 愈伤组织 ——单细胞——细胞团——球形胚——心形 胚——胚状体——完整植株
单倍体培养
悬浮培养----摇床
器官培养
指以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离 体无菌培养。
如：雌性花器官的培养成果显著（子房的培养、胚囊的培养、 花药的离体培养等）
原生质体培养
植物细胞结构图
如何剥 离细胞 壁呢？
用纤维 素酶和 果胶酶 啊！！
原生质体培养
为什么要加较 高渗透压的甘
露醇呢?
• 人工种子有许多优点: 首先，它解决了有些作物品种繁殖能力差、结 子困难或发芽率低等问题。 第二，人工种子可以工业化生产，提高农业的 自动化程度。 第三，人工胚乳中除含有胚状体发育所需的营 养物质外，还可以 添加各种附加成分，如固 氮细菌、防病虫农药、除草剂和植物激素类似 物等，有利于幼苗茁壮成长，提高作物产量。 第四，用人工种子播种可以节约粮食。
植物细胞工程的概念和操作过程是：培养植 物细胞，借助基因工程方法，将外源DNA导入 受体细胞中，或通过细胞融合、显微注射将 不同的遗传重组，再通过对这些转基因细胞 或重组细胞进行培养，获得具有特定性状的 新植物。
四、植物细胞工程——概念
培养植物细胞（包括原生质体），借助 基因工程方法，将外源遗传物质（DNA）导入 受体细胞（包括原生质体）中或通过细胞融 合、显微注射等将不同来源的遗传物质重新 组合，再通过对这些转基因细胞或重组细胞 进行培养，获得具有特定性状的新植株。
• 植物细胞的脱分化：由高度分化的植物 器官、组织或细胞丧失原有的结构和功 能，又重新恢复了分裂功能，产生愈伤 组织的过程，又称去分化。
• 植物细胞的再分化：脱分化产生的愈伤 组织在培养过程中重新分化根或芽等器 官的过程。
8、 下图是植物组织培养的简略表示。据此回答：
（1）①表示离体的植物器，官它能被培养成为④的根本
4、杂种细胞的培育
5、转基因植物的培育 6、突变体的筛选（抗赖氨酸类似物突变体） 7、抗性作物（抗盐碱、抗高温、抗干旱）的诱发和筛选 8、制备人工种子，解决有些植物结子困难、发芽 率低、繁殖困难等问题
人工种子是指通过植物组织培养技术获得具有胚芽、胚 根、胚轴等结构的植物胚状体，并且用适当方法将胚状 体包裹起来，用以代替天然种子进行繁殖的一种结构。
1.种类:蛋白质,脂肪,糖类,药物,香料,生物碱等. 2.技术:植物的组织培养.
实际应用
1、植物繁殖的新途径
1）微型繁殖 2）作物脱毒 3）神奇的人工种子
2、作物新品种的培育
1）单倍体育种 2）突变体的利用
3、细胞产物的工厂化生产
讨论：1.植物克隆的三个层次：
（1）细胞：愈伤组织细胞悬浮培养成细胞系 （2）器官：愈伤组织直接发育出花器官；子房的培
基因在特定空间和时间条件下选择性表达 的结果。在个体发育的不同时期，生物体不同 部位的细胞表达的基因是不同的，合成的蛋白 质也不一样，从而形成了不同的组织和器官。
（4）长期培养问题
长期培养中细胞全能性下降的原因
• 染色体畸变
• 细胞核变异
遗传物质的改变
• 非整倍体的产生
• 激素平衡被打破
生长
• 对外源生长物质的敏感性发生改变
2、原因 ：从理论上讲，每个细胞都包含该物种
的全部遗传物质（全部基因），所以每 个活细胞都应具有全能性 。
3、全能性的体现：
受精卵 ＞ 生殖细胞 ＞ 体细胞
植物细胞 > 动物细胞 不同种类植物或同种植物的不同基因型个体之间 因遗传性的差异,细胞全能性的表达程度大不相同.
问题2：为什么体内细胞没有表现出全能 性，而是分化成为不同的组织、器官？
二、作物新品种的培育
1.单倍体育种 (1)方法:花药的离体培养 (2)优点: 后代稳定遗传,都是纯合体; 明显缩短育种年限.
2.突变体的利用 (1)产生:植物组织培养 (2)利用:筛选对人们有利突变体,进而培育新品种
三、为遗传学、植物生理学和细胞生物学问题提供了 良好的研究系统。
四、细胞产物的工厂化生产
2.从消毒的根、茎、叶上切取一些小组织块
3.将组织块放在固体培养基上进行培养，获 得愈伤组织（创伤组织） 4.以适当配比的营养物质和生长调节剂诱导 愈伤组织，直到再生出新植株
在植物组培过程中，为什么要进行一 系列的消毒，灭菌，并且要求无菌操 作？
避免杂菌在上面迅速生长消耗营养， 且有些杂菌会危害培养物的生长。
问题1 为什么胡萝 卜体细胞能 培养成一个 完整的胡萝 卜植株呢？
1958年美国科学家斯图尔德 试管苗
胚状体
愈伤组织
离体组织
植物克隆的技术基础是----植-物--组--织--培-养------， 理论基础是------植--物--细-胞--的--全--能-性-----------
一、植物克隆的基本技术 ——植物组织培养
原因是 组织或细胞植物细胞的。全能性
（2）②表示 愈伤组织 ，它与①相比分化程度 低
，
全能性 高
。
（3）若想制作人工种子，应该选用（填编号） ③
。
（4）若①是花药，则④是单倍体植株，继续对其使
用 秋水仙素 处理可获得 纯合
正常植株，该
过程称为 单倍体育种 。
（5）若①是胡萝卜根尖细胞，则培养成的④的叶片的颜
胚状体
资料2 病毒引起的植物病害有500多种。