生物制品技术-疫苗制造

2、卵黄囊接种法 （1）取6～8天鸡胚，检卵灯下画出胎位和气室，垂直放于蛋架上，气室端向上。碘酒消 毒气室中央，刀尖锥一小孔。 （2）以1ml注射器及12号针头吸取乙型脑炎病毒液0.5ml，自小孔穿入垂直接种于卵黄囊 内，深度为3cm左右，注入标本0.2ml～0.5m1，退出注射器。胶纸封口，37℃孵育。每 天检卵并翻动2次。 （3）取孵育24h以上濒死的鸡胚，于气室端开口，用镊子提起卵黄蒂，挤去卵黄液，用 无菌生理盐水洗去卵黄囊上的卵黄液后将卵黄囊置于无菌平皿内，低温保存备用。
4、羊膜腔接种法 （1）取12天鸡胚，经照视后划出气室，并标明胚胎位置。 （2）在气室端开方形天窗，紧捏无菌镊子，选无大血管处，快速穿刺绒毛尿囊膜，镊 子头进入尿囊后，再夹起羊膜，轻轻将其自绒毛尿囊膜破裂处拉出，以1ml注射器穿 破羊膜，注入病毒液0.1ml～0.2ml。 （3）用镊子将羊膜轻轻送回原位，用玻璃胶纸封闭气室端天窗，置孵箱37℃孵育。 （4）培养3～5天后，即可收获，经消毒人工气室，剪去壳膜及绒毛尿囊膜，吸弃尿囊 液，夹起羊膜，用细头毛细吸管穿入羊膜吸取羊水于小瓶中冷藏。
3、绒毛尿囊膜接种法 （1）取12天龄鸡胚，检卵灯下标记胎位，于附近无大血管处碘酒消毒。用小锯片在其鸡 胚旁无大血管处的卵壳上锯一四方形（勿伤壳膜），同时于气室用刀尖锥一小孔。 （2）打开四边形之卵壳，勿伤及卵壳膜，滴加灭菌生理盐水一滴于壳膜上。用橡皮乳头 从气室小孔吸气，可见盐水被吸下，绒毛膜下沉，形成人工气室。 （3）用注射器吸取0.2ml～0. 5ml单纯疱疹病毒液滴于绒毛尿囊膜上，胶纸封口。37℃孵 育4～5天后收获。 （4）收获：剪开气室，如接种效果成功，绒毛尿囊膜上可见明显疹斑。用无菌剪刀剪下 此膜，置于无菌平皿内低温保存，备用。
病毒接种途径
1、 尿囊腔接种法： （1）取10—11天龄鸡胚，在检卵灯下画出气室界限，于胚胎附近大血管处作好标记；消毒 后，用灭菌刀尖打一小孔；用灭菌注射器吸取流感病毒悬液0.2m1，刺入0.5cm后，进行注 射；以透明胶纸封闭注射孔， 蜡笔做好标记。 （2）置35℃孵箱中孵育，每日进行检视鸡胚的死活。如果鸡胚在接种后24h内死亡者，为 非特异性死亡，弃之。 （3）孵育3天后取出，放入4℃冰箱过夜。 （4）次日取出鸡胚，消毒气室部分卵壳，用无菌剪刀去卵壳，用小镊子撕去卵膜。以无菌 毛细吸管吸取尿囊液放于无菌试管中。
流行性腮腺炎病毒
鸡胚培养法
【目的】 了解用鸡胚分离、培养病毒的基本方法。 【原理】 鸡胚培养法是常用的病毒培养法之一，操作简便，来源容易，本身 带病毒的情况也极为少见，一般选用白色壳薄的受精卵，主要用4种途径接种 不同部位，即绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔及卵黄囊等。多数病毒都可以在 鸡胚的不同部位增殖。 【材料】1、鸡受精卵、蛋架、检卵灯、磨蛋机、透明胶纸。 2、灭菌的手术刀、镊子、剪刀、平皿、1m1注射器及6号针头、12号针头。 3、乙型脑炎病毒液、单纯疱疹病毒悬液、流感病毒稀释液
种毒
健康动物
感染动物
毒液
保护剂
分装冻干
活疫苗
灭活病毒液
佐剂
乳化
分装
灭活苗
注意事项: 动物选择 种毒 常用的接种途径 观察与收获 制苗
病毒性禽胚培养疫苗制造
种毒
鸡胚
收获尿囊液
配苗
离 心
佐剂
浓缩病毒
分装检验
种毒与毒种继代
适应于鸡胚的种毒包括自然弱毒与人工培育的弱毒两类。多为冻干毒。 冻干毒种需按规定要求在鸡胚继代复壮，通常继代3代以上，经检定符合标准后方可作 为生产疫苗的毒种,包括无菌检测、毒价和其他项目的检定等。
接毒与收获
鸡胚接种途径主要有尿囊腔接种、羊膜腔接种、卵黄囊接种和绒毛尿囊膜接种4种。 鸡胚接毒后培养增殖的时间、温度、湿度，以及收获的标准与内容物依不同的病毒和 不同疫苗而异。
配苗
经无菌检验合格后即可进行配苗。 湿苗： 通常于鸡胚液内按每毫升加入青、链霉素500～1000ul，放置0～10℃冷暗
鸡胚选择
受精卵必须来自SPF鸡群,从受精卵入孵开始至培育全过程都应保持无菌，要求一定的温 度和湿度，且需不断翻动。
5～8日龄胚适用于卵黄囊接种：9－11日龄胚用于尿囊腔接种；10～12日龄胚适于羊 膜腔接种；11～13日龄胚用于绒毛尿囊膜接种。（SPF：无特定病原菌）
尿囊腔：流感病毒 卵黄囊接种：乙型脑膜炎病毒 绒毛尿囊膜：疱疹病毒。 羊膜腔接种：流行性感冒病毒、
处处理后分装。、 链霉索 500～1000ul，混匀后分装冻干。
病毒性灭活疫苗制造
动物或胚胎
组织
剪碎消化
细胞悬液
收获病毒
接种病毒
生长细胞
原苗 灭活病毒液
配苗检验 配苗检验
活疫苗 灭活苗
强毒种的选育
弱毒种的选育
谢谢观看
生物制品技术
疫苗制造
疫苗制造
细菌性灭活疫苗制造 细菌性活疫苗制造 病毒性动物组织疫苗制造 病毒性禽胚培养疫苗制造
细菌性灭活疫苗制造
接种培养基
菌种
种子液
菌液
灭活菌液
菌苗原液
浓缩
配苗、乳化
佐剂
分装
检验
细菌性活疫苗制造
接种培养基
弱毒菌种
配苗
种子液
保护剂
菌液 菌苗原液
检验
活疫苗
病毒性动物组织疫苗制造