苍术酮含量测定分析

第四章苍术酮含量测定分析

4.1 苍术酮含量测定方法

苍术酮含量的测定选用HPLC高效液相色谱法。

根据王峰[22]等和阎克里[23]等的研究结果，本试验采用甲醇-水（95:5）的流动相。甲醇体积分数过低出峰时间太慢，甲醇-水（95:5）流动相苍术酮出峰时间为8分钟左右，时间合理。使用该流动相系统色谱峰峰型较好，基线平稳。（图1）

图1.甲醇-水（95:5）流动相基线图

Fig 1. Methyl alcohol-water（95:5）base line of mobile phase

仪器采用Chromaster系列高效液相色谱仪（日立公司生产）。对照品标样苍术酮购自索宝来公司（规格：20mg）。

将待测样磨成粉末状过筛，精确称取1g（精确到0.01g），放入磨口试管中，加入60-90石油醚5ml，60℃超声萃取1h，待溶液澄清并降至室温，吸取2ml 上清液离心2min，滤膜后装入分析瓶中。

色谱条件为：色谱柱使用C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），检测波长为220nm；流动相为甲醇-水（95:5）；流速：1.0ml·min-1；柱温为室温，进样

量10μl[22]。流动相甲醇和超纯水使用前均滤膜。

精密吸取对照液120、300、480、660、840、1020μl分别加入1.5ml无水甲醇，分别得到浓度为0.024、0.06、0.096、0.132、0.168、0.204mg·ml-1 的对照液，同样进样10μl。以上6份溶液以进样量X（μg）为横坐标，平均峰面积积分值为纵坐标建立标准曲线[22]。

首先新建方法和样品表，待流动相冲洗色谱柱约30min基线平直时即可做样品的连续分析。样品检测时间设定为15-20min，得到各样品峰面积。

4.2 苍术酮含量变化分析

4.2.1 苍术酮含量的测定

4.2.1.1 标样及样品色谱图

标样及样品液经液相色谱仪测定得到峰面积积分值和色谱图。见图7、图8、图9、图10、图11、图12。图中的色谱峰均为在220nm波长下所测得的物质，标号1为苍术酮色谱峰。由图中可以看出，出峰时间为8-9min。浓度梯度标样色谱图见附录2。

图7. 浓度0.3mg/ml-1苍术酮标样色谱图

Fig 7. Chromatogram of 0.3mg/ml-1 Atractylon

图8.棚内二年关苍术样品色谱图

Fig 8. Chromatogram of Atractylon of two years old inside Atractractylodes japonica

Koidz ex Kitam

图8为9月4日棚内二年关苍术样品色谱图，1为苍术酮及出峰时间。

图9. 棚外二年关苍术样品色谱图

Fig 9. Chromatogram of Atractylon of two years old outside Atractractylodes japonica

Koidz ex Kitam

图9为9月4日棚外二年关苍术样品色谱图，1为苍术酮及出峰时间。

图10. 棚外二年汪术样品色谱图

Fig 10. Chromatogram of Atractylon of two years old Wangqing Rhizoma atractylodis 图10为9月4日棚外二年汪术样品色谱图，1为苍术酮及出峰时间。

图11. 棚内三年关苍术样品色谱图

Fig 11. Chromatogram of Atractylon of three years old inside Atractractylodes

japonica Koidz ex Kitam

图11为9月4日棚内三年关苍术样品色谱图，1为苍术酮及出峰时间。

图12. 棚外三年关苍术样品色谱图

Fig 12. Chromatogram of Atractylon of three years old outside Atractractylodes

japonica Koidz ex Kitam

图12为9月4日棚外三年关苍术样品色谱图，1为苍术酮及出峰时间。4.2.1.2 苍术酮含量测定数据

浓度梯度对照液经测定得到相应的峰面积积分值。（表16）

表16.苍术酮对照液含量及峰面积

Table 16．Atractylon contents and peak areas of CK

坐标 / 序号

1 2 3 4 5 6 Coordinate/No.

X（μg）0.24 0.6 0.96 1.32 1.68 2.204 Y（mAU）347333 690850 1080654 1416713 1651707 1813236

以对照液含量为横坐标，色谱峰峰面积积分值为纵坐标，建立苍术酮标准曲

线[42]。（图13）

图13.苍术酮浓度与峰面积标准曲线及回归方程

Fig 13.Standard curve of Atractylon and regression equation of concentration and peak area 样品溶液经测定得到相应的峰面积见表17。

表17.样品平均峰面积

Table 17. Average peak areas of samples

样本 /峰面积Sample/ Peak area

平均峰面积

Average peak area/mAU

RSD

/%

棚内二年关苍术59203471 1.4

棚外二年关苍术14660296 1.3

棚外二年生汪术31763594 1.5

棚内三年关苍术57302400 1.4

棚外三年关苍术44948131 1.7

将表17中平均峰面积数据代入回归方程:Y=775336X+261678，R2=0.9589计算苍术酮含量[22]。

4.3 苍术酮含量变化分析

棚内二年关苍术含量为76.0210mg·g-1；棚外二年含量为18.5708mg·g-1；棚外二年生汪术苍术酮含量为40.6300mg·g-1；棚内三年含量为73.5690mg·g-1；棚