实验二 斑马鱼的急性毒性实验

五、实验报告
1．数据处理
以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算 机或对数概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率的曲线。 用直线内插法或常用统计程序计算出24h、48h、72h、 96h的半致死浓度（LC50）值。
如果实验数据不适宜计算LC50，可用不引起死 亡的最高浓度和引起100%死亡的最低浓度估算LC50 的近似值，即这两个浓度的集合平均值。
实验二、 鱼的急性毒性实验
一、实验目的
通过本实验，熟悉和掌握鱼类急性实验的设计、条 件、操作步骤，以及实验结果的计算、分析和报告等全 过程。
二、实验原理
在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液， 以96h为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录 实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50%时的受试物浓度 （LC50)。
四、实验步骤
1、预实验 分别配制吡虫啉浓度为1、10、100、 1000mg/L的处理液10L置于各塑料桶中，每桶 放斑马鱼6条，每24h换一次实验处理液，实验 持续96h。每日至少两次记录各容器内的死鱼 数，并及时取出死鱼。求出24h100% 死亡浓度 和96h无死亡浓度。
2、正式实验
根据预实验得出的结果，分别配制吡虫啉浓度为280mg/l、 294mg/l、308mg/l、322mg/l、336mg/l、364mg/l的处理 液10L，以不加吡虫啉的 自来水作对照组。每个处理组放斑 马鱼10条 。每24h换一次实验处理液，实验开始后3h或6h观 察各处理组鱼的状况，并记录实验鱼的异常行为（如鱼体 侧翻、失去平衡，游泳能力和呼吸能力减弱，色素沉积 等）。在24h、48h、72h、96h后检查受试鱼的状况。如果 没有任何肉眼可见的运动，如鳃的扇动、碰触尾柄后无反 应等，即可判断该鱼死亡。观察并记录死鱼数目。另外， 实验结束时，对照组的死亡率不得超过10%，否则实验结果 不可靠，需再次实验证实。

斑马鱼(zebrafish)是一种小型热带淡水鱼， 最早是作为胚胎发育生物学和遗传学的实 验动物模型，被广泛地运用于早期胚胎发 育基因表达调控的研究。
Hale Waihona Puke Baidu
三、实验材料与试剂
1、 斑马鱼，购自绍兴花鸟市场，体重0.15g左右， 体长2.8cm，实验前在充分曝气的自来水中驯养7 天。 2、重铬酸钾（分析纯） 3、实验用水选用曝气3天的自来水，硬度为60mg/l
2、化学物质急性毒性分级
依据LC50值的大小，可以将化学物质的急性 毒性分为剧毒、高毒、中等毒、低毒和微毒5级， 如下表所示： 鱼类急性毒性实验毒性分级标准 鱼起始LC50/（mg/L）
＜1
剧毒
1~100
高毒
100~1000
中等毒
1000~10000
低毒
＞10000
微毒
3、编写报告
在实验报告中应包括：实验名称、目的、实验原理、实验 的准确起止日期，以及： （1）实验鱼的种名、来源、体重、体长、健康和驯化状况。 （2）受试物质名称、来源、物化性质和保存方法。 （3）实验用水的来源、物化性质和实验前的处理等。 （4）实验溶液的浓度与配置方法、实验温度。 （5）实验条件，如容器形式、实验液的体积与深度、受试 生物数目。 （6）计算实验开始后24h、48h、72h、96h时的LC50值， 及其毒性分级。
通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能 产生的影响，以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼 类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定 水体污染程度、检查废水处理的有效程度，也为制定水 质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 我国可采用的实验鱼有四大养殖淡水鱼（青鱼、草鱼、 鲢鱼和鳙鱼）、金鱼、鲫鱼、野生的食蚊鱼、斑马鱼等。 本实验选用斑马鱼作为实验材料