小鼠骨骼肌卫星细胞的分离培养和鉴定_代阳

第21卷 第1期 天 津 农 学 院 学 报 V ol. 21，No. 1 2014年3月 Journal of Tianjin Agricultural University March ，2014

收稿日期：2013-12-19

基金项目：国家自然科学基金项目“牛骨骼肌卫星细胞成肌分化相关miRNAs 的鉴定和功能研究”（31201021）；天津市自然科学基金项

目“microRNA-1对牛骨骼肌卫星细胞成肌分化的调控作用研究”（13JCQNJC14600） 作者简介：代阳（1988-），女，内蒙古通辽人，硕士在读，研究方向为动物胚胎与转基因工程。E-mail: aq19881209@。 文章编号：1008-5394（2014）01-0001-04

小鼠骨骼肌卫星细胞的分离培养和鉴定

代阳1

，王轶敏

1，2

，刘新峰1，樊晗璐1，李吉霞1，郭宏1，丁向彬

1，通信作者

（1. 天津农学院 动物科学与动物医学学院，天津 300384；2. 西北农林科技大学 生物工程研究所，陕西 杨凌 712100）

摘 要：采用胶原酶和胰酶联用的酶消化法分离小鼠骨骼肌卫星细胞，应用差速贴壁法进行纯化，

并利用RT -PCR和免疫荧光染色方法对分化前后细胞的标志基因进行鉴定。结果显示：分离出的肌卫星细胞生长状态良好，RT -PCR和免疫荧光染色显示肌卫星细胞Pax7和MyoD呈阳性表达，诱导分化形成肌管后，分化标志基因MyoG和MHC呈阳性表达。本研究成功从小鼠肌肉组织中分离出了肌卫星细胞，并具有很好的体外分化能力，可以为肌肉的发育分化和损伤修复研究提供良好的细胞模型。

关键词：小鼠；骨骼肌卫星细胞；细胞培养；鉴定

中图分类号：Q813.1 文献标识码：A

Isolated Culture and Identification of Mouse Skeletal Muscle Satellite Cells

DAI Yang 1

, WANG Yi-min 1,2

, LIU Xin-feng 1, F AN Han-lu 1, LI Ji-xia 1,

GUO Hong 1, DING Xiang-bin 1,Corresponding Author

(1. College of Animal Science and Veterinary Medicine, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China; 2. Institute of

Bioengineering, Northwest A&F University, Yangling 712100, Shaa n xi Province, China )

Abstract: In this study, mouse skeletal muscle satellite cells were isolated by collagenase and trypsinase digestion method. Then the satellite cells were purified and induced to differentiate into myotubes, and the marker genes of the cells before or after the differentiation were detected by RT-PCR and immunocytochemistry technology. The results show that the isolated muscle satellite cells were healthy, and expressed the marker genes of paired protein box (Pax7) and myogenic differentiation antigen (MyoD ). After inducing to the myotubes, myogenin (MyoG ) and myosin heavy chain (MHC )showed positive expression. The results indicate that mouse skeletal muscle satellite cells of high purity, which can provide cell sources for muscle development and damage repair study, are successfully isolated.

Key words: mouse; skeletal muscle satellite cell; cell culture; identification

骨骼肌卫星细胞（skeletal muscle satellite cell）是骨骼肌中具有分化增殖潜能的肌源性干细胞，通

常以静息状态存在于肌纤维肌膜与基底膜之间[1]

，在一定条件下可以被激活，发生增殖和分化，形

成骨骼肌细胞。1961年，Mauro [2]

首次在蛙的肌肉中发现了肌卫星细胞，其后，有多种动物的肌卫星细胞被成功分离，并进行了体外培养。肌卫星细胞在肌肉的发育和再生中发挥了重要作用，而

肌卫星细胞的增殖和分化受众多因素的影响[3]

，目前，其分离效率仍然很低，建立高效的体外培养、鉴定与诱导分化方法仍然是卫星细胞研究和利用的关键。本研究采用胶原酶和胰蛋白酶联用的酶消化法从小鼠肌肉组织中分离肌卫星细胞，并对其进行了诱导分化和鉴定，以期为肌肉的发育分化和损伤修复研究提供参考。

1 材料和方法

1.1 实验材料 1.1.1 实验动物

10日龄昆明小鼠，体重约3.2 g。 1.1.2 主要试剂

胎牛血清（Gibco）；马血清（Gibco）；DMEM 高糖培养基（Hyclone）；胶原酶Ⅱ（Sigma）；0.25%胰蛋白酶溶液（索来宝）；青链霉素混合液（10 000 m g /L青霉素、10 000 m g/L链霉素，索莱宝）；PBS （自配）；4%多聚甲醛、山羊封闭血清、羊抗兔Cy3标记二抗、羊抗兔FITC标记二抗、羊抗小鼠FITC 标记二抗（武汉博士德）；DAPI、兔抗Pax7抗体、兔抗MyoD抗体、兔抗MyoG抗体（北京博奥森）；鼠抗Myosin抗体（中杉金桥）；TRIzol试剂（Invitrogen）；