食品中乙草胺测定

乙草胺残留量检测方法
本标准参考SN/T 2322-2009《进出口食品中乙草胺残留量监测方法》制定，适用于三河汇福生物科技有限公司化验室测定原料中乙草胺残留量。

1 原理
试样中的乙草胺残留物用乙腈或乙酸乙酯提取，经凝胶渗透色谱仪（GPC）和/或硅胶固相萃取柱（SPE）净化，用气相色谱法（GC）测定和气相色谱-质谱法（GC-MS）确证，外标法定量。

2 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为色谱级，水为重蒸馏水。

2.1 正己烷。

2.2 乙酸乙酯。

2.3 环己烷。

2.4 乙腈。

2.5 丙酮。

2.6 无水硫酸钠：分析纯；650℃灼烧4h，储于密封容器中备用。

2.7 乙酸乙酯：正己烷：3+97（体积比）。

2.8 乙酸乙酯：正己烷：5+95（体积比）。

2.9 乙酸乙酯：环己烷：50+50（体积比）。

2.10 乙草胺标准品（acetochlor,C14H20ClNO2,CAS No.:34256-82-1）：纯度大于等于98%。

2.11 乙草胺标准溶液：准确称取适量的乙草胺标准品，用丙酮配成浓度为
100μg/ml的标准储备液。

根据需要将标准储备液用正己烷稀释成适当浓度的标准工作液。

标准储备液和标准工作液避光在0℃~4℃条件下贮存。

有效期6个月。

3 仪器与设备
3.1 气相色谱仪：配微池电子捕获检测器（μ-ECD）。

3.2 气相色谱-质谱仪：配电子轰击源（EI）。

3.3 凝胶渗透色谱仪。

3.4 旋转蒸发仪。

3.5 离心机：5000r/min。

3.6 高速均质器。

3.7 硅胶固相萃取柱：6ml/1000mg，或相当者；使用前用10ml正己烷淋洗。

3.8 离心管：100ml，塑料和玻璃。

3.9 滤膜：0.45μm，有机相。

4 试样制备与保存
粮谷和坚果类：取花生、玉米、小麦、大豆、腰果等有代表性样品约500g，用粉碎机粉碎，混匀，装入洁净的容器内，密闭并标明标记。

4℃以下保存。

5 测定步骤
5.1 提取
粮谷、坚果：称取试样10g（精确至0.1g）于100ml塑料离心管中，加入50ml 乙腈，在匀浆器上匀浆2min。

以4000r/min离心10min，将上清液倒入浓缩瓶中，浓缩至干，用10ml乙酸乙酯-环己烷溶液（2.9）溶解残渣，过膜，共凝胶渗透色谱（GPC）净化。

5.2 净化
5.2.1 凝胶渗透色谱净化条件
a）色谱柱：S-X3 20×2cm（内径），或相当者。

b）流动相：环己烷-乙酸乙酯（1+1，V/V）。

c）流速：5.0ml/min。

d）进样量：5.0ml。

e）淋洗体积：40ml。

f）收集体积：30ml。

g）清洗体积：10ml。

5.2.2 硅胶渗透色谱净化
将5.1中粮谷、坚果和禽肉组织的提取液过滤膜（3.9）注入凝胶渗透色谱仪中，收集40ml~70ml流出液，在40℃水浴上减压浓缩至干，用1ml正己烷溶解残渣，供固相萃取柱净化。

5.2.3 硅胶固相萃取柱净化
将6.2.2净化液注入硅胶固相萃取柱（3.7）中，再用2×1ml正己烷润洗盛样液容器，注入硅胶柱中，依次用10ml正己烷、5ml乙酸乙酯-正己烷溶液你（2.7）和5ml乙酸乙酯-正己烷溶液（2.8）淋洗，再用15ml乙酸乙酯-正己烷溶液（2.8）洗脱，收集洗脱液于40℃水浴减压浓缩至干，用正己烷定容至5ml，供气相色谱测定和气相色谱-质谱确证。

5.3 测定
5.3.1 气象色谱条件
a)色谱柱：DH-5石英毛细管柱，30m×0.32mm（内径），膜厚0.25μm，或相当者；
b)色谱柱温度：60℃（1min）15℃/min 260℃（5min），300℃（后运行15min）；
c)进样口温度：250℃；
d)检测器温度：325℃；
e)载气：氦气，纯度≥99.995%，1.8ml/min；
f)进样量：1μl；
g)进样方式：无分流进样，0.75min后开阀。

5.3.2 气相色谱-质谱条件
a）色谱柱：DB-5MS石英毛细管柱，30m×0.25mm（内径），膜厚0.25μm，或相当者；
b）色谱柱温度：60℃（1min）15℃min 260℃（5min），300℃（后运行15min）；c）进样口温度：250℃；
d）色谱-质谱接口温度：280℃；
e）载气：氦气，纯度≥99.995%，1.0ml/min；
f）进样量：1μl；
g）进样方式：无分流进样，0.75min后开阀；
h）电离方式：EI；
i）电离能量：70eV；
j）测定方式：选择离子监测方式（SIM）；
k）监测离子（m/z）：定量162，定性174、234、269；
l）溶剂延迟：3min。

5.3.3 气相色谱测定
根据样液中乙草胺含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。

标准工作溶液和样液中乙草胺响应值均应在仪器检测线性范围内。

标准工作溶液和样液等体积参插进样测定。

在上述色谱条件下，乙草胺的保留时间约为12.3min。

5.3.4 气相色谱-质谱确证
乙草胺标准溶液及样液均按5.3.2规定的条件进行测定，如果样液与标准溶液相同的保留时间有峰出现，则对其进行质谱确证。

经确证分析被测物SIM色谱峰保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品谱图中，所选择的离
子均出现；选择离子m/z162、174、234、269（其丰度比100：54：24：8）与标准样品相关离子的相对丰度一致，相似度在允许偏差差之内（见表1），则可判定样品中存在乙草胺。

表1 GC-MS确证相对离子丰度的最大允许偏差
5.4 空白试验
除不加试样外，均按上述步骤进行。

5.5 结果计算和表述
用色谱数据处理机或按式（1）计算试样中乙草胺的含量，计算结果需将空白值扣除。

X=(A×c×V)/(A S×m) (1)
式中：
X—试样中乙草胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
c—标准工作液中乙草胺的浓度，单位为微克每毫升（μg/ml）；
A—样品溶液中乙草胺的峰面积；
A S—标准工作液中乙草胺的峰面积；
V—样液最终定容体积，单位为毫升（ml）；
m—最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。

6 测定低限和回收率
6.1 测定低限
本方法的测定低限均为0.01mg/kg。

6.2 回收率
气相色谱法检测样品的添加浓度及回收率数据见表2，气相色谱-质谱法检测样品的添加浓度及回收率数据见表3。

表2 气相色谱法检测样品的添加浓度及回收率数据
表3 气相色谱-质谱法检测样品的添加浓度及回收率数据。