实验一蠕虫学粪便检查法(一)

实验一蠕虫学粪便检查法（一）

一、内容

1.直接涂片法；

2.饱和盐水漂浮法；

3.各种蠕虫卵的特征。

二、参考资料

蠕虫学粪便检查是蠕虫病生前诊断的重要方法。因为大多数的寄生性蠕虫是寄生在家畜、家禽的消化道及其相连的器官（如肝脏、胰脏），有的寄生在呼吸器官和生殖器官（家禽），如后圆线虫、前殖吸虫。寄生在这些部位的寄生虫，它们的虫卵、幼虫或节片都随着宿主的粪便排除体外，因此，通过粪便检查可以获得生前诊断。除蠕虫以外，还有一些原生动物的寄生虫，如结肠小袋纤毛虫及球虫，它们的包囊或卵囊亦随着宿主的粪便排除体外，依靠粪便检查也可以建立生前诊断。

根据蠕虫学粪便检查的目的可分为：

（一）蠕虫虫体检查法：是从粪便中检查虫体或节片，如莫尼茨绦虫，一般以肉眼直接检查；

（二）蠕虫虫卵检查法：是从粪便中检查虫卵，如大多数的吸虫、绦虫和线虫；

（三）蠕虫幼虫检查法：是从粪便中检查幼虫，如牛、羊的网尾线虫等，随粪便排出的不是虫卵而是幼虫。

下面主要分述虫卵和幼虫检查法。

1.蠕虫虫卵检查法（之一）：

（1）直接涂片法：

取一片洁净的载玻片，在玻片中央滴加1-2滴50％甘油生理盐水，然后用镊子或牙签挑取少量粪便，与甘油生理盐水混匀，并将粗粪渣推向一边，涂布均匀，作成涂片，涂片的厚薄以放到书上隐约可见下面的字迹为宜，加上盖玻片，置显微镜下检查，检查时先在低倍镜下顺序查找，如发现虫卵，再换高倍镜仔细观察。如无甘油生理盐水时可以用常水代替，加甘油可使标本清晰，易于观察，并可防止涂膜很快变干燥。但是检查原虫的滋养体，必须以生理盐水进行稀释，不应加甘油，否则会影响其运动而妨碍观察。

本法操作简单，能检查各种蠕虫卵，但检出率不高，特别是轻度感染时，往往得不到可靠结果，因此，本法只能为辅助的诊断方法，并且每次检查要重复观察8-10片，才能收到确实的效果。

（2）饱和盐水漂浮法：

本法基本原理是采用比重比虫卵大的溶液，使虫卵浮集于液体的表面，形成一层虫卵液膜，然后蘸取此液膜，进行镜检。

方法：先配制饱和盐水溶液，配制时先将水煮开，然后加入食盐搅拌，使之溶解，边搅拌边加食盐，直加至食盐不再溶解而生成沉淀为止（1000毫升沸水中约加食盐380克），再以双层纱布或棉花过滤至另一干净的容器内，待凉后即可使用。（溶液凉后如出现食盐结晶，则说明该溶液是饱和的，合乎要求，其比重为1.18，此溶液应保存于温度不低于13℃的情况下，才能保持较高的比重）。

取粪便5-10克，置于100-200毫升的烧杯中，先加入少量饱和盐水，把粪便调匀，然后加入约为粪便的12倍量的饱和盐水，并搅拌均匀，用纱布或40目的铜丝筛过滤于另一干净的烧杯内，滤液静置30-40分钟，此时比饱和盐水比重轻的虫卵，大多浮于液体表面，再用铂耳或直径0.5-1厘米的铁丝圈蘸取此液膜，并抖落在载玻片上，进行镜检，或者将此滤液直接倒入试管内，补加饱和盐水使试管充满，加上载玻片（盖玻片应与液面完全接触，不能留有气泡），静置30-40分钟，取下盖玻片，贴在载玻片上进行镜检，可以收到同样效果。

本法检出率高，在实际工作中广泛应用，可以检查大多数的线虫卵和绦虫卵，为了提高漂浮效果，可用其他饱和溶液代替饱和盐水。如在检查比重较大的后圆线虫时，可先将猪粪便按沉淀法操作，取得沉渣后，在沉渣中加入饱和硫酸镁溶液，进行漂浮，收集虫卵。常见虫卵及漂浮比重如下表：

2.操作、观察注意点：

（1）在操作中，粪便不能互相感染，已经使用过的工具，必须进行消毒，或另换工具，才能检查第二个粪样，粪样更不能搞错，特别在大面积普查工作中，一定要做好登好编号，每次检查都要有详细记录。

（2）粪便要求新鲜，防止暴晒、腐败而失效。

（3）镜检时一定要详细观察，严格区别虫卵与非虫卵。

虫卵：都有一定的卵壳结构，且都有一定的形状，如圆形、椭圆形、三角形等，多数都是两侧对称，内含有卵细胞或一个已发育的幼虫或毛蚴。

非虫卵：在粪便中容易与虫卵混淆的杂物有各种植物细胞、花粉颗粒、脂肪球、气泡、真菌孢子、螨类及其虫卵、纤毛虫等等。但这些物质，由于种类不同，其形状、大小、颜色也各不相同。如各种植物细胞，有的呈螺旋形，有的呈双层环状物的，也有呈铺石状的，但都有明显的细胞壁，与虫卵结构显然不同；各种花粉颗粒，往往都带有一定的颜色，易误认为蛔虫卵，但花粉颗粒没有卵壳的结构，表面呈蜂窝状或锯齿状，仔细观察，可以区分。还有脂肪和气泡之类，亦很像虫卵，但脂肪球和气泡往往大小不一，无色，且折光性很强，周围壁较厚，而内部是空虚的。不具有虫卵的一般结构。总之，粪渣中与虫卵混淆的杂物较多，但只要掌握虫卵的结构和特征是可以辨认的，有时某物与虫卵分辨不清，也可用解剖针轻轻推动盖玻片下的东西滚动，这样往往可以把虫卵和其他物体区别开来。

3.各种蠕虫的特征：

（1）吸虫卵：多呈卵圆形或椭圆形，大小不一，卵壳有数层卵膜组成较坚实；大多数吸虫卵其一端有一个卵盖（日本血吸虫卵、嗜眼吸虫卵除外），卵内含有许多卵黄细胞及一个胚细胞，还含有一个已成形的毛蚴；颜色多为黄色，黄褐色，有的呈灰白色。

（2）绦虫卵：因种类不同，形状差异很大，虫卵多数无色，少数为黄色或黄褐色，在高倍镜下可见到三对小钩状物。圆叶目绦虫卵壳脆弱，无卵盖，卵壳在虫卵排出时已破裂脱落，常见的所谓“卵壳”实际上是胚膜，在带科绦虫胚膜的两层间呈辐射纹，虫卵圆形或不正圆形，内含六钩蚴；裸头科绦虫卵呈圆形，方圆形或三角形，内有一个含六钩蚴的梨形器；假叶目绦虫卵椭圆形，卵壳颇厚，一端常有卵盖，胚膜被有许多纤毛，内含一个钩球蚴。

（3）线虫卵：一般呈椭圆形，大小不一，无色透明，有的呈灰白色，或褐色或黄褐色，多数虫卵两侧对称，卵可多半由最外层的蛋白质膜，中间几丁质膜和内层的卵黄膜组成，有些线虫如圆形科和毛圆科的虫卵无蛋白质膜，有的卵壳平滑，有的凹凸不平或呈蜂窝状，虫卵内含单个或多个卵细胞或已发育的幼虫。

（4）棘头虫卵：多呈椭圆形或长椭圆形，卵壳很厚，外膜上常呈点窝状或蜂窝状的构造，卵内中央有一个长椭圆形的胚胎，胚胎的一端有六个小钩，颜色多呈棕黄色。

三、作业

1.在显微镜下怎样识别虫卵与非虫卵？

2.任选绘一虫卵形态图。