疟疾镜检的实验室技术教学内容

采血的时间---间日疟
间日疟原虫及三日疟原虫，在患者刚发冷发热以 后，大部是在环状滋养体期，故这一时期区别疟 原虫种类是不容易的。虽在—般情况下，随便什 么时间检查感染者的末稍血液， 多少能查到各 个时期的原虫，但适当的取血时间，一般是在患 者发作数小时至十余小时，即已滋养发育至具有 易于鉴别的晚期滋养体期．
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血片的制作1
玻片的执持方法： 无论在拭擦玻片，制作血片或染色血 片时，手指仅可夹持玻片两侧缘，切 匆触及玻片之上下面以免手上油脂污 及玻片面，使薄血涂布不匀，厚血膜 易于脱落
血片的制作-厚血膜涂制
取洁净的载玻片和推片各一张载玻片放桌上， 推片以右手拇指和食指持其二侧，以左端下角 从受检者之耳垂沾取血滴，在载玻片之适当位 置， 自内向外回转扩大，涂成厚血膜，使厚薄 均匀。涂毕后用干棉球拭掉推片上和耳垂上之 残留小量血液。
血片的制作--薄血膜涂制
以推片左端中央沾取薄血膜所需之血，与载玻 片约成25一45度角，使血滴向二旁扩展至一定 宽度时，立即向左边轻轻迅速推出即成薄血膜。 推时速度之快慢和角度均影响血膜的厚薄程度， 最理想的薄血膜是一层血细胞，血细胞的分布 排列比较均匀。无裂缝，无空隙。
血片的编号
血片编号可根据实际操作进行。 号码必须不易脱落，建议用铅笔在薄血膜上编号。
薄血膜血量只需0.5-1.0立方毫米左右,过 多则血膜过厚过大。薄膜宜涂成舌状长约 2.5厘米，宽约2厘米
采血的时间
进行疟疾普查时，在同一时间内常常需要 检查很多居民，故一般无法考虑取血的时 间。
但在诊断临床的疟疾患者时，就应当考虑 在什么时候取血较为适宜，尤在确定不下 虫种和查不到疟原虫的疑似疟疾患者的情 况下。
血片的染色
吉氏染液的成份 原料：吉氏染粉 10 g
中性甘油 500 ml 纯甲醇 500 ml
吉氏液染色方法
将吉氏染液配成3%的稀释液 水97 ml + 3 ml吉氏液 PH7.0--7.2 染色25—30分钟
影响染色效果的因素
染料和溶剂的质量 染液的新旧 染液稀释后的使用时间 染液的稀释浓度 染色时间：根据染液质量、新旧、浓度和气温 染色用水PH7.0—7.2
制成的血膜须完全干燥后(自然情况下约4-12小时才能全干燥；必 要时，可置于3 7℃的暖箱中，促其速干)始可进行固定及染色否则 薄血膜中的红细胞边缘皱缩，厚血膜容易在染色时脱落，而常现网 状的背景；反之；血片搁置过久则有霉菌及枯草杆菌生长，血红蛋 白凝固，也不能使用，因此不利于镜检。
若把未经固定的血片能盛于氯化钙的干燥器内，然后放入冰箱中， 可保存3年之久，并仍可较满意的染色。
血片的固定和脱膜
薄血膜用甲醇固定 现场检查的血片厚血膜可以不脱血膜，
直接染色。 保存时间较长的标本片厚血膜要脱血
膜后保存。
血片制作的注意事项
平放、 有盖、 防止灰、尘和植物 孢子污染。
防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸 自然干燥，不能太阳晒和火烤
制作血片的注意事项
制成的血片切勿用火烤、日晒或放在新购置之标本盒内，以免血红 蛋白凝固无法脱除。血片放置待干时不可倾斜，否则厚血膜中血细 胞沉在一边，可使厚薄不匀。此外还要防止苍蝇吮吸血膜和灰尘污 染血片。
环状滋养体的数量与构造，有助于疟原虫种类的鉴别。 恶性疟原虫的配子体很易识别，但在初发时，一般需要 在发作八日后才能在末稍血液中出现，应当注意
厚、薄血膜的形状和位置
薄血膜宽2cm，长2.5cm 厚血膜直径0.8-1cm 假定将玻片划成三格等分，则厚血膜应位于中格靠右侧线处，薄血
膜则从玻片中央起至左格中部止，右端空格供记录姓名，编号或贴 标签之用(如图)
采血的时间---恶性疟
恶性疟原虫，从理论上说，因为恶性原虫的裂体生殖是 在内脏的毛细血管内进行的，所以在发作之前，患者的 末稍血液中不易查到。但实际情况不尽如此，一般在受 染者的末稍血液中，随时能见到少数恶性疟原虫的环状 滋养体，
虽然如此，较理想的取血时间，是在发作后的20小时左 右，因为这个时候，环状滋养体虽已滋长发育至最高峰， 但尚未回至内脏的毛细血管中去进行裂体生殖。
疟疾镜检的实验室技术
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采血的部位和方法
以耳垂采血为主。 以75%酒精棉球消毒耳垂待酒精干后，左
手拇指和食指紧捏耳垂，右手持一次性采 血针迅速刺入，适可而止第一滴血不必擦 掉，即可应用。（若由指头取血则受检者 痛楚较大，且易引起创口感染，一投不宜 采用。）
采血的血量
厚血膜血量约为5立方毫米左右(即一小滴)， 涂成边缘光滑之园形，直径约0.8—1.0厘 米左右。