制药工程专业毕业论文

中国医科大学毕业设计(论文)猪心中细胞色素C的提取工艺研究

学院XX学院

专业制药工程

班级20XX级X班

学生姓名学生姓名

学号12345678

指导教师X教授

202X年3月

猪心中细胞色素C的提取工艺研究

摘要

目的：细胞色素C是一种细胞呼吸激活剂，细胞色素C与细胞凋亡有密切关系，它广泛存在于各种动物、植物组织和微生物中，以猪心为原料来提取纯化细胞色素C并将细胞色素C进行纯化。方法：取猪心在酸性条件下提取细胞色素C粗品后通过吸附法将细胞色素C进行提纯，并对比不同条件下的提取率。结论：测定其含量为2.85%

关键词

细胞色素C；提取；提纯

The pig heart in extraction and purification of cytochrome C

Abstract

Objective：Cytochrome C is a kind of cell respiration activator, cytochrome C has close relationship with cell apoptosis, it widely exists in various kinds of animal, plant and microbe, with pig heart as raw material to extract purified cytochrome C and cytochrome C and purification.Methods：The pig's heart was extracted under acidic conditions, and the cell pigment C was purified by adsorption method, and the extraction rate was compared under different conditions.Results：Determination of its content is 2.85%

Key words

Cytochrome C;extract ;purification

1 前言

细胞色素C溶液用于各种组织缺氧急救的辅助治疗[1]。目前很多高发的疾病和难以治愈的慢性疾病都和细胞色素C有关。细胞色素C对细胞的凋亡，细胞组织的生长，对细胞器官的发育都有着很大的影响。细胞色素C广泛存在于人体细胞中所以细胞色素C对人体机能的平衡影响也非常大，因此细胞色素C的研究对生物学有着重大的意义。可以说细胞色素C的价值很高应用前景非常的广泛，细胞色素C在不仅临床急救的应用很广而且细胞色素C对很多慢性病的治疗也十分有效。

想要得到细胞色素C也十分简单，我们可以从动物体内提取细胞色素C，动物心脏中含有丰富的细胞色素C，本实验正是从猪心中提取细胞色素C。细胞色素是呼吸链中重要的电子传递体，细胞色素包含很多种，细胞色素C只是细胞色素的一种，细胞色素C主要存在于线粒体中，需氧最多的组织及酵母细胞和心肌细胞中，细胞色素C的含量非常的丰富。目前来看,心血管疾病、脑组织损伤、癌症、败血症、糖尿病和神经性的疾病在全球的发病率非常高,在这些疾病中细胞色素C均表现出不同程度的代谢紊乱。细胞色素C是由两个无活性的前体分子合成的，即前细胞色素C和亚铁血红素[2]。硫酸铵盐析可明显提高细胞色素C 纯度，主要为去除杂蛋白。另外三氯乙酸可引起细胞色素 C 变性和聚合，必须严格控制三氯乙酸用量。细胞色素C（Cytochrome C）是从猪心中提取的细胞呼吸激活剂，是含铁卟啉的色蛋白质[3]。在心肌与其他做剧烈运动的肌肉中含量最为丰富。细胞色素C主要作为电子载体或者氧化还原酶参与细胞的能量传递过程[4]。硫酸铵盐析可明显提高细胞色素 C 纯度，主要为去除杂蛋白。另外三氯乙酸可引起细胞色素C 变性和聚合，必须严格控制三氯乙酸用量[5]。细胞色素C是细胞凋亡的重要信息物质之一。发展简单、快速的细胞色素C的检测方法对于临床检测和生物学研究具有重要意义[6-7]。它在多细胞生物的组织分化、器官发育、机体稳态的维持中有着非常重要的意义[8-10]外源性细胞色素C是不能进入健康细胞[11-12]从线粒体中泄露出的细胞色素C有诱导细胞凋亡的作用[13-15]。在生物氧化过程传递电子中细胞色素C起到了重要的作用[16-18]。

细胞色素C的研究对现代生物药物的研究有着很重要的意义，生物制药是近几十年来研究的热门。而且细胞色素C在临床上应用十分广泛，在抢救患者生命

中也扮演者非常重要的角色。细胞色素C能用于各种组织细胞缺氧的治疗，比如一氧化碳中毒的患者还有心肌缺氧的患者都可以通过注射细胞色素C来得到及时的抢救。同时细胞色素C的提取工艺也非常的简单利用其易溶于酸的特性通过简单的吸附法能简单有效的得到细胞色素C提取物，原料的来源也非常多，动物的心脏含有非常丰富的细胞色素C。所以细胞色素C的药物制品是一种非常廉价又使用效果很好的药物，非常值得研究和发展。通过本实验的研究希望能更好的利用细胞色素C来防治疾病。

2 材料与方法

2.1 实验材料与仪器

2.1.1 实验材料

猪心（市场购买的新鲜猪心）；2mol/L H2SO4溶液；1mol/LNH4OH（氨水）溶液；0.2%NaCl溶液；25%（NH4）2SO4溶液：100ml溶液中含25g（NH4）2SO4，约为25摄氏度时40%的饱和度；BaCl2试剂（称BaCl212g溶于100ml蒸馏水中）；20%三氯乙酸（TCA）溶液；人造沸石（Na2O·Al2O3·xSiO2·yH2O）：白色颗粒，不溶于水，溶于酸，选用60-80目：联二硫酸钠。

2.1.2 实验仪器

绞肉机；电磁搅拌器；电动搅拌器；离心机；722型分光光度计；玻璃柱（2.5cm*30cm)一根；烧杯不同容量若干；500ml下口瓶；量筒，移液管，玻棒，抽滤机，透析纸，滤纸，纱布，玻璃漏斗。

2.2实验方法

2.2.1细胞色素C的提取

取新鲜的猪心一颗，去除血块、肌腱和脂肪，切成条块状洗掉血液，用绞肉机将其绞碎。称取心肌碎肉，加入1到2倍量的蒸馏水搅拌均匀，用1mol/L的硫酸调整PH到4左右，在常温条件下搅拌提取两个小时，然后进行压滤，滤液用1mol/L 的氨水调节PH至6.2，离心，得到提取液。滤渣再加等量蒸馏水同上方法重复提取一次，合并两次提取液。提取液加入2mol/L氨水调节PH至7.5，再在冰浴中静置沉淀杂蛋白，吸取上层清液，每升提取液加入10g人造沸石，搅拌吸附40分钟，静置去掉上层清液。收集吸附细胞色素C的人造沸石，再用蒸馏水洗涤三次，2g/L 的氯化钠洗涤4次，再用蒸馏水洗至洗液澄清为止。过滤抽干，装入柱内用25%