流式细胞术免疫分型基础

原始细胞（Blast）
形态学上的原始细胞包括： • 干细胞 • 粒系：原粒+早幼粒细胞（有颗粒原粒？） • 单核系：原单+幼单 • 淋巴系统：原+幼淋 • 原始巨核
髓系幼稚细胞
• 幼稚细胞包括原粒、原单、原始巨核、幼单。 • 异常单核不能算幼稚单核，在鉴别急性粒单细
胞白血病、急性单核细胞白血病、慢性粒单细 胞白血病中有重要作用。
流式细胞术免疫分型基础
免疫分型组成
• 识别细胞 • 诊断标准
系别相关标志
干/祖细胞：CD34，CD38，HLA-DR，TdT 髓系：CD33，CD13，CD15，CD11b，CD14，CD64， cMPO，CD117, CD11c, CD36 红系：CD71，glyA 巨核系：CD41，CD61 B 细胞：CD10，CD19，CD20，CD22，CD23，k，λ, cCD79a,cIgM, (CD5, CD11c, CD103, CD25, FMC7) T细胞：CD2，CD3，CD5，CD7，CD4/8， cCD3, TCR NK细胞：CD16，CD56，（CD3 - /CD56+） 浆细胞：CD138，CD38, ck，cλ
• 小的异常增生巨核和微巨核不能算幼稚细胞。 • 在APL中，异常早幼粒也算幼稚细胞。
• 原红一般不计在内，除非罕见的急性纯红细胞 白血病。
髓系幼稚细胞免疫标志
• 原粒、原单：CD34、CD117、HLA-DR、CD13、 CD33、MPO+/-
• 原始巨核:CD61、CD41a、CD9、CD36（不特异） • 幼单：CD15dim、HLA-DRstr、CD64、CD11c、
BM中红系前 体%
≥50%
红系前体 ≥80%
≥50%
≥50%
PB/BM发现
其它表现
诊断
BM中和/或PB中幼稚 符合MDS相关
细胞>20%
AML标准
幼稚细胞少见
粒系成分少
MDS相关AML 纯红白血病
BM中和/或PB中幼稚 细胞<20%
BM中和/或PB中幼稚 细胞<20%
幼稚细胞≥骨髓 中非红系的 20%
CD10 -
CD20 -
cIgM -
sIg
-
CD19 ++
CD22# ++
cCD79a ++
Common BALL (EGIL B-II) ++ + ++ + ++ ++ ++
Pre B-ALL (EGIL B-III)
+ + ++ + ++ ++ ++ ++
Transitional Mature B-ALL pre-B-ALL* 现Burkitt样白 (无EGIL编码) 血病/淋巴瘤
+
-
+
-
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
++
-：<10%的病例阳性；+：25-75%的病例阳性；++：>75%病例阳性。 *：约5%的Pre B-ALL为过渡型pre B-ALL，定义为胞浆和胞膜IgM，但是不 表达成熟κ、λ轻链。 #：PE标记或者胞浆CD22。
表2 T-ALL/LBL免疫表型分类
CD4dim、CD11b、CD33str、CD13、CD14• APL：HLA-DR-、CD34-、CD117+、CD9+、
CD15-/+、CD33str、CD64+、CD13dim
淋系幼稚细胞
• 幼稚细胞包括原始淋巴、幼稚淋巴。 表型： • 幼稚标志+泛B/T标志 • 幼稚标志：CD34、TdT、B系（CD10）T系
最低panel
不按照疾病类别，所有疾病采取一致 panel的： • MPO/cCD79a(CD22)/CD45/cCD3 • CD34/CD10/CD45/CD19 • ckappa/clambda/CD19/CD138 • CD4/CD8/CD45/CD2 • CD7/CD117/CD45/CD56 • CD14/CD64/CD45/CD13(33） • CD20/HLA-DR/CD45/CD5
• 出现下述之一考虑CML AP： PB中嗜碱性粒细胞超过20%；（嗜碱性粒细
胞识别：位置：CD45/SSC图，原粒的左上， 表达CD9、CD123、CD203c、CD22dim）
PB或者BM中髓系幼稚细胞为10-19% 幼稚细胞克隆为非髓系。
CML急变期（Blast Phase, BP）
• 表现为下述之一： ①PB中原始细胞占白细胞20%以上，BM中原
原粒以外，有分化阶段粒细 胞， POX,SBB,CE+
M4 原幼粒+成熟粒≥ 20% 原幼单+成熟单≥ 20%
粒单两系原始加分化细胞， POX,CE, NAE+NAF抑制
M5 单核系≥ 80%
单核系为主，NAE+NAF抑制
M6 20%以上，有核红占有核细 红系和粒系原幼+分化细胞， 胞50%以上或者红系80%以 红系PAS阳性 上
巴瘤
NHL
前体B细胞白血病/淋巴瘤， NOS
• B-ALL：以胞膜免疫球蛋白为界，不包括 Burkitt。
• 表型：CD19+/cCD22+/cCD79a+，但是都 不特异，需要组合+高强度表达。
表1 B-ALL/LBL免疫表型分类
标志
Pro B-ALL (EGIL B-I)
TdT
++
CD34 +
始细胞占有核细胞20%以上， ②原始细胞髓外增生。 70%的病例BP是急髓变，包括中性粒、嗜酸
性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核系、巨核系 或者红系急变，或者上述组合，20-30%为淋 系急变。
MDS/MPN
• CMML • aCML, BCR-ABL1• JMML • MDS/MPN, U
CMML诊断标准
最低检测抗体2
5、AML： • 原始细胞标志：CD34、CD117、HLA-DR • 髓系标志： CD11b、CD13、CD14、CD33、CD64、
胞浆MPO • 伴系表达标志：CD7、CD56、CD19 6、B-ALL： • 原始细胞标志：CD34 • B系标志： CD10、CD20、CD19、胞浆CD79a（或者
• 慢性中性粒细胞白血病(CNL) • 真性红细胞增多症(PV) • 原发性骨髓纤维化(PMF) • 特发性血小板增多症(ET) • 慢性嗜酸性粒细胞白血病，NOS(CEL) • 肥大细胞增多症(mastocytosis) • 髓系增殖性肿瘤，不能分类的(MPN.U)
CML加速期(Accelerated Phase,AP)
髓系和淋系肿瘤 – MDS/MPN – MDS
• 急性髓系白血病和急性未定系列白血病 • 前体淋巴肿瘤 • 成熟淋巴增殖性疾病
– B细胞淋巴瘤 – T或者NK细胞淋巴瘤 – 何杰金氏淋巴瘤 – 免疫缺陷病 • 组织细胞和树突细胞肿瘤
MPN（髓系增殖性肿瘤）
• BCR-ABL1阳性慢性髓系白血病（chronic myelogenous leukemia,CML)
M7 原始巨核20%以上
原始巨核，PAS粗颗粒阳性
表型 干祖+全 髓标志 干祖+全 髓标志 界限不 清，出现 分化标志 3群细胞
单核标志 R6明显
巨核标志
LBL/ALL定义
• 定义：以局部团块为主，没有或者很 少PB、BM侵润，为淋巴瘤。根据细 胞成熟阶段分为成熟淋巴瘤或者淋巴 母细胞淋巴瘤(LBL)
急性白血病(acute leukemia)诊断标准
• BM：建议用瑞氏染色，计数500个分化细胞，PB计 数200个
• 如果有明显的细胞减少，可以使用棕色层（buffy coat）涂片。
• 如存在骨髓纤维化，不能涂片，如果blast表达 CD34,活检片子CD34+≥20%也可以诊断。
急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)诊断标准
CD64 2、成熟B系肿瘤：CD5、CD10、CD19、CD20、CD23、
kappa、lambda 3、成熟T/NK系肿瘤：CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、
CD8、CD56（如果CD4/CD8双阳，要求做CD1a） 4、浆细胞肿瘤/疾病：CD19、CD38、CD56、CD138、
胞浆kappa、胞浆lambda
幼稚细胞<骨髓中 非红系的20%
M6 MDS
注意：非红系的计算，红系前体、淋巴细胞、浆细胞都不计在内。
AML，NOS亚型：参照FAB
亚型 髓系幼稚占非红系比例 M0 不定
形态学 像原始淋巴，POX,SBB<3%
M1 原粒≥90% M2 原粒<90%，单核系<20%
原粒为主，分化阶段少， POX,SBB ≥ 3%
• BM或者PB中：髓系原始细胞≥20%，或者有髓外侵 润。
• 特例： 1、重现性遗传学异常，髓系幼稚细胞<20%也可以
诊断。 2、骨髓有核红细胞50%以上，见鉴别诊断。 • 主要标准根据BM涂片、PB涂片、BM活检。 • 分类标准仅适用于化疗前。
红系前体细胞>=骨髓有核细胞的50%时的 可能诊断
亚型 cCD3 CD7 CD2 CD1a CD34 CD4 CD8 CD3
Pro + + - - +/- - - -
Pre + + + - +/- - - -
皮质 + + + + - 双阳 双 阳
髓质 + + + - - 单阳 单 + 阳
每种临床表现应该评价的细胞系
（来自2006 Bethesda）
最简单的急性白血病抗体组合
髓系 CD13或者CD33、CD117、MPO B/浆系 CD19、c/m kappa、c/m lambda、CD20、
cCD79a或者CD22、CD138 T 系 CD2、CD4、CD5、CD7、CD8、CD56、cCD3 单核 CD14、 CD64 其他 HLA-DR、CD10 干细胞 CD34
1、持续性PB单核细胞增多>1X109/L（>20%) 2、无Ph染色体或者BCR/ABL1基因 3、无PDGFRA或者PDGFRB重排（尤其是伴嗜酸性粒细
胞增多的病例） 4、PB和BM中幼稚细胞<20% 5、至少1个髓系增生不良，如果没有或者只有轻微
髓系增生不良，需要其它条件：①造血细胞中存 在获得性、克隆性细胞或者分子遗传学异常，或 者②单核细胞增多至少持续3个月和③排除其它所 有导致单核细胞增多的原因。
• 如果局部和PB/BM都有，分类比较武 断，有的以25%为界，一般骨髓幼稚 细胞<20%不考虑ALL，而为LBL。
淋巴肿瘤的定义
累及范围
成
髓外为 BM、 都有BM、 都有BM、
熟
主 PB PB>25% PB<20%
度 幼稚 LBL ALL
ALL
LBL
Fra Baidu bibliotek
成熟
NHL
成熟 淋巴 白血 病/淋 巴瘤
成熟淋巴 白血病/淋
CD22-PE/胞浆CD22） 7、T-ALL： • 原始细胞标志：CD34、胞浆TdT • T系标志：CD1a 、CD2、胞浆/胞膜CD3、CD4、CD5、
CD7、CD8、CD56
一个完整的免疫分型做多少抗体？
普通免疫分型： • 1步法建议做20个抗体 • 2步法做15个抗体。
复杂的免疫分型，如罕见疾病、混合白血病、 T细胞淋巴瘤、异常细胞群比例较低的疾病 等，可能需要增加抗体种类，有些抗体需 要重复使用。
（CD1a、CD99str) • 泛B：CD19、cCD79a、CD22 • 泛T：胞浆CD3、CD7、CD2、CD5 • 不表达成熟标志：B系胞膜轻链；T系CD4、
CD8、CD3
2008 WHO分类
• 偏成熟髓系疾病 –髓系增殖性肿瘤(MPN)（包括肥大细胞增多症） –伴有嗜酸细胞增多和PDGFRA、PDGFRB、FGFR1异常的
临床表现 贫血 白细胞减少 血小板减少 全血细胞减少 中性粒细胞增多 单核细胞增多 淋巴细胞增多、肝脾大 嗜酸性粒细胞增多
评价的细胞系 B、T、M、P B、T、M、P B、T、M、P B、T、M、P M M B、T T、M
注：B:B细胞系;M:髓系;P:浆细胞系;T:T细胞系
最低检测抗体1
1、成熟髓系肿瘤/疾病： • 原始细胞标志：CD34、CD117 • 髓系标志： CD11b、CD13、CD14、CD15、CD16、