中药血清药理学以与实验设计思路

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目前采集动物血清后，多用加温法，
经56℃，30min灭活。
• 含药血清的保存:
-20 ℃或更低温度环境下保存。
血清添加量
• 药物血清加入量的逐渐增加，其药理效应曲线是 呈正态分布状。 • 研究含药血清的加入量来评价血清中药物的真实 有效浓度。 • 设立正常血清空白对照组来排除血清本身所含干 扰性物质对实验结果的影响。
实验设计思路
实验设计思路
• 黄连解毒汤抗氧化作用的血清药理学研究
• 采用血清药理学方法，研究黄连、黄 芩、黄连解毒汤含药血清对氧化应激损伤 保护作用的时间-效应关系；并研究黄连、 黄芩、黄连解毒汤提取物和小檗碱、黄芩 苷纯品对氧化损伤保护作用的剂量-效应 关系。 • 黄芩的含药血清灭活与否抗氧化作用 有很大差异，两者的时-效曲线上也有明
中药血清药理学
• 中药血清药理学是将中药
或中药复方经口服给动物
灌服一定时间后采集动物
血液、分离血清，用含有
药物成分的血清进行体外
实验的一种半体内实验方 法。
血浆 血清 凝血
• 血浆是指血液中除血球、血小板之外的部 分, 是一种无色透明的液体, 含有水、无机 盐、营养物、激素、尿酸等。 • 血清是指血浆中除去纤维蛋白后得到的淡 黄色液体, 在血液凝固后才能分离出来。 • 凝血是指凝血酶与纤维蛋白原相作用生成 纤维蛋白, 再与血球结合而使血液发生凝固 的现象。
血浆 血清 凝血
无凝血直接离心的为血浆； 有凝血再离心的为血清。
ห้องสมุดไป่ตู้
优 点
防止中药粗制剂理化性质 反映药物的代谢产物和 对体外试验的干扰 给药后产生的内源性成分
便于从细胞分子水平 体外实验条件可控性强、 阐述药物的作用机制 药物效应易于检测
缺 点
• 无确定的最佳给药方案 • 体外培养体系药物浓度与血药浓度不确定 • 药效最佳的采血时间难以确定 • 含药血清灭不灭活，方法不统一 • 无去除血清影响的理想措施 • 成分复杂，影响因素太多，结果重复性差
实验设计思路
• 荆芥、桂枝挥发油含药血清体外抗病 毒的实验研究 • 荆芥、桂枝挥发油含药血清对 MDCK细胞的最大无毒浓度 TC0 均为 5%，即在相应培养基中血清含量为 5%。荆芥、桂枝挥发油含药血清5%、 3.5%、2.5%浓度对10 TCID50的甲型 流感病毒的增殖均有显著抑制作用， 且5%、3.5%浓度的荆芥、桂枝挥发油
实验设计思路
• 根据实验的要求选择动物，以及必要的药 理造模； • 优选含药血清的制备方法（采用正交试验 法等）：以药物和观察指标不同，需要首 先对含药血清的时效和量效进行研究，以 便确定给药方案 、采血时间 、血清或血浆、 灭活与否、血清添加量。
实验设计思路
• 复方黄连注射剂血清药理学研究
• 以大白兔为实验动物，采用肌内 注射复方黄连注射剂，2次/d，连续3d。 末次给药后15 、30 min，1、2、3 h 后从兔颈静脉取血，分离含药血清。 采用反相高效液相色谱法测定含药血 清中小檗碱含量，用微量稀释法和药 敏纸片法测定复方黄连注射剂含药血
采血时间
• 理想的采血时间应落在血药浓度的高峰期。
• 李仪奎通过对96个药物达峰时间统计后提出药后
1~ 2h采血较为合理。
• 最可靠的方法是先通过对少量动物进行预实验，
根据不同的实验要求，将不同时间的采集的含药
血清进行实验比较，再确定采血时间。
含药血清的处理与保存
• 药物血清处理：灭活与否？
• ①丙酮法； ②乙醇法 ；③加温法。
给药剂量
给 药 剂 量 临 床 常 用 量 给 药 剂 量 给 药 剂 量
给药方案
• 灌胃次数和时间间隔：各种给药方式都是为了使
药物达到稳态血药浓度，从而便于药物作用和机 理的研究。 • 由于中药及其复方化学成分复杂，半衰期很难测 定，所以采用7～10d 给药法也是权宜之计。当然， 若是进行药物血清时效关系的研究，给药方法又 另当别论。
实验设计思路
• 茵陈蒿汤保肝作用的血清药理学研究
• 建立 CCl4 诱导的大鼠肝细胞损伤 细胞模型，SD 大鼠为含药血清供体， 以含药血清对损伤肝细胞增殖(WST-8 法 ) 的影响为指标，采用正交试验法优 选含药血清的制备方法，并确定体系 中血清添加量。 • 以动物是否造模、取血时间、取 血成分为考察因素，每个因素设2个水
• 血清药理学方法增加了分析药物成分的难度
中药血清药理学步骤
实 验 动 物 的 选 择 含 药 血 清 的 处 理 与 保 存 血 清 添 加 量
给 药 剂 量
给 药 方 案
采 血 时 间
实验动物的选择
实 验 动 物 的 选 择
动物种类：大鼠、家兔、豚鼠 动物数量
雌雄是否各半 正常生理状态与病理状态