(整理)HLC活性成分.

一、HLC活性成分
墨旱莲是菊科鳢肠属植物鳢肠的干燥地上部分，具有滋补肝肾，凉血止血的功能，研究证明墨旱莲含有三萜皂苷类、黄酮类、挥发油、噻吩类、香豆草醚类及甾体类等化学成分，现代药理学研究表明墨旱莲具有止血、保肝、免疫调节等药理作用，黄酮类成分也被认为是墨旱莲止血、调节免疫的药效物质。

1.三萜皂苷
墨旱莲中三萜皂苷分别为齐墩果烷型和蒲公英赛烷型两种类型。

三萜皂苷类成分主要有eclalbasaponins(Ⅰ-Ⅺ、Ⅷ) , 旱莲皂苷A、旱莲皂苷B、旱莲皂苷C、旱莲皂苷D、刺囊酸、齐墩果酸、熊果酸等。

赵越平等[1]研究中药墨旱莲Eclipta prostrata L. 中的三萜皂苷化合物,分离并鉴定了5 个三萜皂苷,其中1 ,2 ,3 为已知化合物eclalbasaponins II , I和III[2] ，4 和5 为新化合物，结构分别为:3-O-[β-D-吡喃葡糖(1 →2)-β-D-吡喃葡糖]-16α-乙氧基-齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡糖苷(4) 和3-O-[ (2-O-硫酰基-β-D-吡喃葡糖) (1 →2)-β-D-吡喃葡糖]-刺囊酸-28-O-β-D-吡喃葡糖苷(5)。

且经稻瘟霉生物活性测试模型跟踪筛选表明,皂苷1 和5 具有诱导稻瘟霉菌丝变形活性, 其最小变形浓度分别为197μmol/L和30μmol/L ，结构如图1。

1.1提取溶剂选择
苷元为三萜类的皂苷称为三萜皂苷，主要存在于五加科、豆科、远志科及葫芦科等，其种类比甾体皂苷多，分布也更为广泛。

组成皂苷的糖常见的有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸等。

苷的化学结构中，由于苷元具有不同程度的亲脂性，糖链具有较强的亲水性，使皂苷成为一种表面活性剂，水溶液振摇后能产生持久性的肥皂样泡沫。

三萜皂苷多具有羧基，因此大多呈酸性，少数呈中性。

由于糖分子的引入，皂苷的极性基团明显增多，致使极性增强，故具有较大的极性而易溶于醇类溶剂、含水醇及水。

皂苷在提取的过程中会产生次级苷，水溶性下降，溶于中等极性有机溶剂（醇，乙酸乙酯）。

因此可以判断，HLC三萜皂苷主要存在于醇提物中，水提物中也存在一部分。

1.2生物活性
张云峰等[2006]在综合许多文献研究的基础上，总结出了三萜皂苷类物质的生物活性：（1）抗癌活性：三萜皂苷对多种癌细胞系有很强的细胞毒作用，能够有效抑制
肿瘤细胞的增殖；（2）降血糖、降血脂：齐墩果酸型三萜皂苷对糖尿病小鼠可产生明显的降糖作用，从构效关系看，齐墩果酸的3位单糖氧苷是降血糖的基本结构；（3）保肝作用：三萜皂苷能显著降低CCl4所致的肝损伤，抑制天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶，减轻肝脏组织脂肪变性程度，对酒精引起的肝损伤具有干预、保护作用；（4）抗病毒作用：三萜皂苷可通过抑制病毒吸附、复制及酶活等途径，达到抑制或杀伤病毒之功效；（5）保护心脑血管系统：三萜皂苷可以抑制血小板聚集，抗血栓形成，改善神经功能症状，保护脑损伤，抗心肌缺血，防止心肌损伤；（6）抗炎、抗过敏作用：三萜皂苷具有良好的消炎活性，豆科植物中的三萜皂苷还可抑制组织中白三烯（LT）C4 的释放，从而抑制皮肤过敏反应。

有资料显示：齐墩果酸具有抗炎、镇静、防肿瘤等作用，是治疗急性黄胆性肝炎和慢性迁延性肝炎的有效药物。

熊果酸具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应。

其生物活性还有待研究与证实。

齐墩果酸熊果酸
1.3含量测定
中药中三萜类成分的测定一般采用分光广度法，该方法结果稳定、重现性好、准确度高。

但需针对不同的样品进行显色条件优化。

罗汉果中三萜皂苷的比色测定方法：用香草醛-高氯酸为显色剂，最佳条件为:加入待测试样后,加热挥去溶剂,再加入0.2mL新制的5%香草醛-冰醋酸溶液及0.8mL高氯酸试剂, 在60℃恒温水浴加热15min,冷却,摇匀,在波长为595nm处测定。

2. 黄酮类
文献报道墨旱莲黄酮类成分主要有芹菜素, 木犀草素、槲皮素以及芹菜素-7-氧-葡萄糖苷, 木犀草素-7-氧-葡萄糖苷等。

刘翔等[2007]试验测定了不同产地墨旱莲中的总黄酮含量，总黄酮的质量分数在0.780%-2.469%之间，差别较大。

2.1 提取溶剂选择
王雪梅等[2009]采用85乙醇提取旱莲草中黄酮类物质，样品中总黄酮得率为
3.96%，并通过体外抗氧化活性研究，证实旱莲草中黄酮类物质有很好的清除氧自由基作用, 并且能有效抑制MDA生成, 具有很好的抗脂质过氧化及保护DNA 免受自由基氧化损伤的能力。

林朝朋等[2004] 采用水提法对墨旱莲的茎部和叶中黄酮类化合物的提取率进行了对比，证明墨旱莲叶的黄酮类化合物提取率高于茎部的黄酮类化合物提取率，并通过正交试验，获得一次提取墨旱莲全草黄酮类物质的最佳水提工艺条件：提取温度：90℃；提取时间：2.5h：料液比：1:30，在此水平下，墨旱莲黄酮类化合物提取率为3.08％。

林朝朋等[2005]考察各种提取条件对墨旱莲总黄酮乙醇提取和水提取结果的影
响，并通过正交实验优化工艺条件，得到最佳醇提工艺条件是：提取温度80℃、提取时间3h、乙醇浓度70％；最佳水提工艺条件是：提取温度90℃、提取时间2.5h、料液比1：30。

在此条件下，得到的墨旱莲总黄酮的乙醇提取得率是2.97％，稍高于水提取得率2.87％。

证明：墨旱莲总黄酮可以用乙醇提取，也可以用水提取。

2.2 生物活性
张梅等[1997]考察了木樨草素和槲皮素对淋巴细胞转化的影响及对白介素I(IL一2)生成的影响，发现木樨草素和槲皮素在0.01～0 .0001 ug／mL浓度范围内，可显著促进T、B淋巴细胞转化并增强IL一2的产生，结果提示: 旱莲草具有免疫调节作用的分子基础是早莲草中的黄酮成分一木樨草素和槲皮素。

林朝朋等[2005]通过测定小鼠血清SOD、GSH-Px活性和MDA含量的变化,发现墨旱莲黄酮类提取物可显著增强小鼠血清SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量;并可有效地清除羟自由基和超氧自由基，具有明显的抗自由基作用及体内抗氧化功能。

2.3含量测定
准确称取芦丁标准品0. 013 2 g, 用70%的乙醇溶解转移至50 ml的容量瓶(浓度为0. 264 mg/ml ),精密量取1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0, 6. 0, 7. 0, 8. 0 ml置于25 ml比色管中, 用30%乙醇溶液补充至10 ml 加入5%亚硝酸钠溶液0. 7ml 摇匀, 放置5 min后, 加入10% 硝酸铝溶液0. 7 ml 摇匀, 5m in后再加入1 mol/L氢氧化钠溶液5 ml 摇匀, 用30%乙醇溶液稀释至刻度, 10 min后在510 nm 处测定吸光度, 以蒸馏水为空白参比。

以芦丁浓度对吸光度作标准曲线, 并计算回归方程。

吸取2 ml旱莲草提取液于25 ml比色管中, 按上述标准曲线的操作方法测定吸光度Y值, 并通过标准曲线的回归方程换算成浓度X ( mg/ml) 。

2.香豆草醚类
从旱莲草中已分离得到蟛蜞菊内酯, 去甲蟛蜞菊内酯, 异去甲蟛蜞菊内酯, 去甲蟛蜞菊内酯葡萄糖苷及coumestan 。

3.噻吩类成分
此类成分为墨旱莲中的脂溶性成分, 分为噻吩、二联噻吩和三联噻吩化合物, 主要有5-( 丁烯-3-炔-1-基) 2, 2’-二联噻吩[ 5-( 3-buten-1-ynyl)-2 , 2’-bithienyl] 、α-三联噻吩(α-terthienyl) 、α-醛基三聚噻吩(α-formylterthienyl) 等。

4.挥发油类成分[营大礼，2008]
挥发油类成分主要类型为单萜及倍半萜, 其主要成分是: 1, 5, 5, 8-四甲基-12-氧双环[ 9, 1, 0] 十五炭-3, 7-双烯, 6, 10, 14-三甲基-2-十五酮, δ-愈创木烯, 新二氢香芹醇, 3, 7, 11, 15-四甲基-2-十六烯-1-醇, 十六烷酸, 环氧石竹烯及十七烷。

5.甾体类成分和其他
此外墨旱莲中还含有胡萝卜苷、豆甾醇-3-氧葡萄糖苷O 和β-谷甾醇等甾体化合物, 还有鞣质、维生素A 等。

6.
7.多糖
许小华等[2010]研究墨旱莲多糖的最佳水提工艺，以多糖含量及提取率为指标，最佳工艺参数为：料水比1:10,提取3次,每次3.5h,提取温度100℃。

在此条件下,测得墨旱莲多糖提取率为11.39%,多糖含量为18.43%。

许瑞波等[2011]在单因素试验的基础上，优化的提取墨旱莲多糖的适宜工艺条件为：料液比1:15、提取温度90℃、提取时间1h、提取3次; 并且对墨旱莲多糖(PEA)与墨旱莲黄酮类化合物(FEA)的抗氧化活性进行比较，结果表明PEA、FE A对两种自由基都具有良好的清除能力,而且对-OH的清除能力大于对O-2.的清除能力。

参考文献
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