_UPLC-MS_MS法快速检测减肥类保健食品中7种违法添加的药物

2.2 质谱条件 离子源为 ESI 源；正离子方式检测：西布曲明，芬氟拉明，
酚酞，麻黄碱 , 咖啡因，N,N- 双去甲基西布曲明；负离子方 式检测：呋塞米；毛细管电压：3.5 kV；锥孔电压：21 ～ 35 V； 萃取锥孔电压：3V；聚焦电压：0.1 V；脱溶剂温度：300 ℃； 鞘气流速：500 L·h － 1；碰撞能量：13 ～ 35 V。 2.3 对照品溶液的配制 2.3.1 对照品储备溶液的配制 分别取盐酸西布曲明、盐酸 芬氟拉明、盐酸麻黄碱、酚酞、咖啡因、呋塞米、N，N- 双 去甲基西布曲明对照品约 10 mg 置 50 mL 容量瓶中，精密称 定，以甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品储备液。 2.3.2 混合对照品溶液的配制 取上述对照品储备溶液各 1 mL 置于 100 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得。 2.4 样品处理 2.4.1 固体试样 取研细，混匀后样品适量（相当于一次服 用量），于具塞三角瓶中，精密称定 , 精密加入 50 mL 甲醇， 称重，超声处理 30 min（功率 250 W，频率 33 kHz），取出， 放冷至室温，用甲醇补重，过滤 , 作为供试品溶液。 2.4.2 液体试样 取 50 mL 以上液体试样，混匀，精密吸取 10 ～ 20 mL（相当于一次服用量），减压浓缩至近干，转移 至 50 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀 , 过滤，作为供 试品溶液。 2.5 样品测定
色谱柱：Agilent EC-C18（150 mm×2.1 mm，2.7 μm）； 柱温：30 ℃。进样量：5 μL；流速：0.3 mL·min － 1。流动相： 甲 醇（A）-0.1% 乙 酸 铵 溶 液（B）， 梯 度 洗 脱：0 min， 90.0%A；6 min，50.0%A；10 min，90.0%A；12 min， 90.0%A。
653-656. [8] 徐国勇，廖永福，黎荣明 . 氯诺昔康复合罗哌卡因用于子宫全
切术后硬膜外镇痛的临床观察 [J]. 中国误诊学杂志，2010， 10(22)：5372-5373.
( 收稿日期： 2012-06-28； 修回日期： 2012-07-15）
UPLC-MS/MS 法快速检测减肥类保健 食品中 7 种违法添加的药物
752
中南药学 2012 年 10 月 第 10 卷 第 10 期 Central South Pharmacy. October 2012, Vol. 10 No. 10
was at 0.01 － 1.00 ng. Conclusion The method is specific and sensitive, can be used to identify 7 drugs illegally added into health foods. Key words: UPLC-MS/MS; MRM; health foods; illegal adding
Abstract: Objective To develop a specific, sensitive and rapid UPLC-MS/MS method to identify 7 drugs illegally added into health foods. Methods The ultra performance liquid chromatography-electrospray ion trap mass spectrometry method was used to detect the samples extracted with methanol. The separation was performed on Waters UPLC using Agilent ECC18 (150 mm×2.1 mm×2.7 μm ) column with a gradient elution. The column temperature was 30 ℃ . The mobile phase consisted of 0.1% ammonium acetate solution and methanol at 0.3 mL·min － 1. The mass spectrometer conditions were as follows: the fragmentation pattern of these drugs was analyzed by the mass spectrometer after being separated by UPLC, operated in positive or negative ion mode and in two scan modes including full scan MS and multiple reaction monitoring ( MRM ). The obtained retention time, pseudomolecular ions and fragmentions were used to identify the 7 drugs in health foods. Results A good resolution of 7 anti-obesity chemical drugs was obtained by UPLC-MS/MS. The determination limits
随着人们对健康体重的日益关注，减肥已成为爱美人士 的最大话题，各类减肥产品相应而生。一些商家为了使自己 的产品具有快速、明显的减肥效果，在减肥类保健品中非法 添加具有减肥效果的药物成分（如西布曲明等），这样虽然 使产品有了显著的降低体重的效果，但同时对使用者的身体 健康会产生危害甚至可能危及生命 [1-2]。因此亟需建立一种 快速、准确的分析方法来检测减肥类保健食品中违法添加的 化学药物。目前这些成分的测定方法主要为：① 薄层色谱 法（TLC）[3]，该方法简便直观，分离时间短，耐“污染”， 但分离效率较低，常常有假“阳性”干扰，主要用于初筛； ② 高效液相色谱法 （HPLC） [4]，该方法的优点是分离性能 高，通过比较色谱峰与对照品色谱峰的保留时间及紫外光谱 图，可以基本确证是否含有与对照品一致的化学成分，但对 于有些同分异构体来说，鉴别仍较困难；③ 气相色谱 - 质 谱法（GC-Fra Baidu bibliotekS）[5-6]，该方法准确，可靠，但检测成分必须 能气化，大大限制了采用一种方法检测多个成分的可能；④ 液相色谱 - 质谱法（HPLC-MS）[7-8]，它以液相色谱作为分 离系统，质谱为检测系统。样品在液相部分经色谱柱分离， 质谱部分与流动相分离并被离子化后，在质谱的质量分析器 将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。由于同时 结合了 HPLC 技术的高分离能力与质谱较高的灵敏度与较强 的定性能力等优点，HPLC/MS 技术能够对检测目标进行准 确地定性、定量，可以在一次运行中同时完成筛选和确证。 本文采用液质联用法（UPLC-MS/MS）分析测定，其中超高 效液相色谱（UPLC）法有利于提高流动相流速、缩短分析 时间、提高分析通量。因而，UPLC-MS/MS 不仅能发挥超 高效液相色谱快速高效的分离能力，而且能利用质谱能给出 结构信息的能力，达到了对检测目标进行快速准确定性的效 果，为打击非法添加行为提供可靠的科学依据。 1 仪器与试药
基金项目：湖南省科学技术厅科技计划一般项目（编号：2011SK3191）。 作者简介：黎银波，男，主管药师，主要从事药品、食品、化妆品质量控制研究，Tel：（0731）82275847，E-mail：2004liyinbo@163.com * 通讯作者：孟庆玉，女，研究员，主要从事药品、食品、化妆品质量控制研究，Tel：（0731）82275836，E-mail：mqy.hn@163.com
Rapid identification of 7 drugs illegally added into weight reducing health foods by UPLC-MS/MS
LI Yin-bo1, MENG Qing-yu1*, ZHONG Qing-yuan1, LI Wen-li1, JIANG Qiu-tao1, PENG Liu-bao2 (1. Hunan Institute for Food and Drug Control, Changsha 410001; 2.Second Xangya Hospital,Central South University, Changsha 410011)
黎银波 1，孟庆玉 1*，钟庆元 1，李文莉 1，蒋秋桃 1，彭六保 2 （1. 湖南省食品药品检验研究院，长沙 410001；2. 中
南大学湘雅二医院，长沙 410011）
摘要：目的 建立专属、灵敏的 UPLC-MS/MS 方法快速检测保健食品中 7 种违法添加的药物。方法 样品经 甲醇提取后，采用超高效液相色谱 / 电喷雾离子化质谱法测定。色谱条件：Agilent EC-C18（150 mm×2.1 mm× 2.7 μm），柱温 30 ℃，以甲醇 -0.1% 乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱，流速 0.3 mL·min － 1；质谱条件：以电 喷雾电离源，正、负离子模式进行质谱数据采集，选择正负离子全扫描、多反应监测（MRM）方式检测 7 种违法 添加减肥药物。通过比较样品峰与对照品峰的保留时间、相对分子质量和二级质谱碎片信息，确定样品中是否违 法添加了化学药物。 结果 在上述色谱及质谱条件下 , 7 种违法添加药物的色谱图分离度良好 , 质谱分辨率符合鉴 别要求。UPLC-MS/MS 方法测定上述化学物质的最小检出量为 0.03 ～ 1.00 ng。结论 该方法专属性强、灵敏度高， 快捷 , 可作为 N，N- 西布曲明等 7 种违法添加药物的有效检测方法。 关键词：超高效液相色谱 - 质谱；多反应监测；保健食品；非法添加 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：1672-2981(2012)10-0752-05 doi:10.3969/j.issn. 1672.2981.2012.10.011
Central South Pharmacy. October 2012, Vol. 10 No. 10 中南药学 2012 年 10 月 第 10 卷 第 10 期
[5] 周弘峰，佘守章，许立新，等 . 罗哌卡因硬膜外持续输注联合 氯诺昔康 PCA 效应及病人血浆 IL-6、IL-10 的变化 [J]. 中国疼 痛医学杂志，2006，12(2)：72-75.
[6] 龚明富，吕雯，邵静，等 . 罗哌卡因联合用药在腹腔镜胆囊切 除 术 后 镇 痛 效 果 的 影 响 [J]. 实 用 疼 痛 学 杂 志，2009，5(4)：
275-278. [7] 周弘峰，佘守章，许立新，等 . 罗哌卡因硬膜外持续输注下氯
诺昔康 PCIA 的临床效应 [J]. 中华麻醉学杂志，2002，22(11)：
美国 Waters 公司的 Quattro Premier XE 三重四极杆液质 联用仪，ESI 电离源；美国 Waters 公司的超高效液相色谱仪， 四元泵、脱气机、自动进样器、柱温箱及二极管阵列检测器。
盐 酸 西 布 曲 明、 盐 酸 芬 氟 拉 明、 盐 酸 麻 黄 碱、 酚 酞 对照品（均来源中国食品药品检定研究院，批号分别为： 100624-200401、100073-200002、171241-200506、00919601，均为供含量测定用）；咖啡因对照品（供含量测定 用，USP REFEREN CE STANDA R，批号：J1D241）；N， N- 双去甲基西布曲明对照品（LGC，批号：991.03.09.01， 供含量测定用）；呋塞米对照品（DR.，批号：00820，供含 量测定用）。水为超纯水，其他试剂均为色谱纯。样品：从 市场上购买获得。 2 方法与结果 2.1 色谱条件