布氏杆菌试验检测步骤

布氏杆菌检测

1. 虎红平板凝集试验(RBPT)：

在玻片上准确加30μl待检血清，然后加30μl虎红平板凝集抗原，立即混匀后5分钟观察结果。在光线充足处以出现肉眼可见的颗粒判定为阳性结果，反之为阴性结果。

图1：虎红平板凝集试验检测试剂

图2：试验方法:

评价：简便快速、容易操作，漏检率极低，适用于基层大面积检疫；容易出现假阳性，临床上需要借助SAT来确认。

2. 试管凝集试验(SAT):

每份血清取9支小试管，在第一支管加0.5%石碳酸生理盐水2.3毫升，第二支不加，第三支到第九支管各加0.5毫升，然后取待检血清0.2毫升加入第一管中，混匀后吸1毫升加入第二、三管各0.5毫升，第三管混匀后再吸0.5毫升加入第四管，以此类推到到第八管吸0.5毫升弃去，从第二管开始每管加入经0.5%石碳酸生理盐水10倍稀释的试管凝集抗原0.5毫升。血清最终的稀释度为1：25、1:50、1:1001:200……1:1600第一管为血清对照。最后一管为抗原对照。混匀置37℃孵育20-22小时，取出置室温1-2小时观察结果。较薄的伞状沉淀覆盖在试管底部且上清液为50%混浊者判为该份受检血清的效价。效价1:100及以上者判为阳性。

图3：试管凝集试验检测试剂

图4 ：试验方法

图5：操作方法

评价：（1）实验室诊断标准之一

（2）滴度1︰100及以上或病程一年以上者滴度为1︰50及以上为阳性

（3）特异好，实用性、敏感性强

（4）主要检查血清中的IgG和IgM，适合于急性期病人的诊断。（5）缺点：有前带现象，有时出现假阴性结果；产生一定的交叉反应；出结果慢，需要两天。