毛细管进样技术

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光学门进样
荧光标记后的样品在高 压的驱动下进入分离毛细管, 当样品到达毛细管的“前门” (entrance)时,用第一 束激光(gating beam) 来减灭大部分荧光标记的样 品,只允许很窄宽度的样品 塞通过,实现分离后用激光 致荧光检测器检测。
由于样品引入是采用光学形式而不是机械控制的,样 品塞宽度很小,同时可以在维持高压状态下进样。
3 扩散进样
扩散进样方式通过调整样品池高度,使其液面
与毛细管出口端的液面严格水平,利用进样端管口
处样品溶质与毛细管中电解质缓冲液存在浓度梯度
的原理使样品组分直接扩散进入管内。因为该进样

方法不采用电压,所以在一定程度上,克服了因淌
度不同产生的组分岐视。并且该方法具有较好的定
量特性,较强的抗样品基质干扰和一定的抗区带电
由于试样各组分具有不同的μep,淌度大的组分进入
毛细管内的质量要比淌度小的组分多,因此导致了电渗流
进样方式的最大一个不足之处――样品进样时存在组份歧
视。
电动力学进样的动力来自电泳介质本身,因此可用于
高粘度样品的分析,从而扩展了分析样品类型的范围。
场放大技术
在分析一些含量极小的组分时,为了提高分析的灵敏 度通常采用了场放大进样技术,这是电动力进样的扩展。 该方法是将样品溶于电导较小的缓冲液,当进样时,在 离子强度低的稀缓冲液中的组分,就处于电场强度较高 的状态,运动比在管内大部分高电导的缓冲液中要快多。 于是,样品中的阳离子(如果进样端为正极时) 就会迅速 迁移至样品液与缓冲液的边界上,随后速度开始下降, 阳离子便堆积在这一界面上形成一个被浓缩了的区带, 中性离子仍分布于整个样品液,而阴离子则浓缩在样品 液的尾部与后续缓冲液的界面附近。
7 HPLC/CE联用进样技术
毛细管电泳进样端制成锥形,毛细管电泳的几 样由气动阀控制缓冲液的横流来实现。通常情况 下,加高压时,由横流带着样品由色谱柱流向废 液口,阻止样品进入毛细管电泳部分,在进样的 时侯,电压降到0,但仍保持横流,以防止运行电 压变为进样电压过程中样品进入毛细管电泳。然 后通过转换气动阀来停止横流,电动进样,撤出 进样电压后,横流继续送样品到废液口,通过一 阵缓冲液,把夹缝处多余的样品清除后,再加分 离电压,避免了峰的拖尾现象。
毛细管进样技术
1 流体力学进样
利用流体力学进样的 技术通常有虹吸进样法, 毛细管进样端加压法,和 毛细管尾端抽真空进样法 三种形式。进样量大小的 控制是通过改变毛细管进 出两管口之间位差或压差, 以及作用时间来实现的。
2 电动力学进样
毛细管的进样端先不和缓冲液接触,而直接置于样品
溶液中,然后再很短的时间内施加进样电压,使样品通过 电迁移进入毛细管,在这种情况下,样品进样的迁移率有 两部分组成:μ=μep+μeo 其中μep是进样条件下单个 组分的迁移率(淌度),μeo则是电渗流引起的淌度。
8 FI/CE联用进样技术
传统的电动进样是由静态的均相溶液中引入样 品,在流动注射毛细管电泳中,样品的引入是在不 断流动的非均相溶液中进行的。它是在流动注射和 毛细管电泳入口之间加了一个带锥形入口的流通池。 两个蠕动泵,分别输送缓冲液和样品。引入样品的 时侯,样品充满采样环,多余的样品溶液,在采样 时,启动进样阀,采样环中的样品就被缓冲液带进 分离毛细管进行分离。流动注射毛细管电泳可以实 现连续进样而体系不停止流动。
优点
进样时,样品体积变 小,管壁影响力减弱,在 线进样不受外界干扰,可 用于封闭体系,可以实现 毛细管电泳与其它分析仪 器的联用。
5 高速毛细管电泳的进样技术
高速毛细管电泳是上世纪90年代发展 起来的采用细内径和较短的毛细管来实现 高速分离的一种分离技术。与传统毛细管 电泳相比,它的特点就是分析时间很短。
场畸变的能力。同时,也可用于毛细管凝胶电泳及
电色谱进样。但该种扩散方法使得工作效率大大减
慢了,该方法应用得并不普遍。
4 直接在线进样
在线进样由一个微交叉的组件通过高压转换来实现。 它的取样毛细管于分离毛细管相垂直,样品在取样毛细 管电渗流的作用下进入取样毛细管,并充满微交叉部分, 然后使分离毛细管两端的缓冲池之间产生电压梯度,样 品进入分离毛细管进行分离。如果采样时,分离毛细管 中没有电流,则交叉部分充满样品,进样时这部分样品 完全进入分离毛细管。如果在采用过程中使得两分支分 离毛细管中产生一个小于采样毛细管中的电流使很小的 液流流向交叉部分,其叠加的结果是样品在交叉部位形 成针形。
优点:(1)分离时间短,只需要几秒钟或者几分钟,有文 献报道,在140ms内实现了4种荧光标记的氨基酸的分离; (2)高分离效率,由于进样量只有几个皮升,可以达到几 十万的理论塔板数。
缺点:(1)这也是一种电动进样,因此存在进样偏向; (2)荧光减灭的效率比较低,只有80%左右。
流动门进样
装载样品的毛细管与分离 毛细管距离的间隙大概是75 微米, 流动泵时,样品毛细 管出口处的样品被流动的缓冲 液带走,无法进入分离毛细管 柱。当流动泵关闭时,样品由 于电动力学效应而被引入分离 毛细管中。这种进样的标准偏 差小于4%,流动相流速控制 79nL/min~1μL/min ,特 别适于超微分析。
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