大肠杆菌

大肠杆菌

大肠杆菌革兰氏阴性小杆菌，肠道菌，容易受污染；

形态染色：

革兰氏染色，呈卵圆形或杆状，如图：

培养条件：

需氧或兼性厌氧，最适温度37℃，PH值7.2-7.4，

菌落形态：

1、普通培少数生长成红色。

2、鲜血琼脂表面出现β溶血。

3、接种麦康凯培养基37 ℃24 h后，呈现边缘整齐或波状、稍突起，表面光滑湿润，直径1 mm~2 mm、粉红色或深红色的圆形菌落；

4、伊红美蓝琼脂上呈紫黑色带金属光泽的圆形菌落，在普通琼脂平板上呈灰白色，直径1.5 mm~2 mm的圆形菌FL) 落；细菌涂片染色检查为革兰氏阴性、大小一致的杆菌/

5、SS琼脂上不生长或生长较差，生长者呈红色；

采样部位：

关节液、肝、脑、肠系膜淋巴结，败血病例从病变的内脏组织中取材，仔猪黄白痢，猪水肿病等可在各段肠壁粘膜或病变处的肠系膜淋巴结处取材。

敏感药：

氟苯尼考、新霉素、磺胺、诺氟沙星

致病性：

对幼畜的消化道产生有毒物质

流行病学：

禽通过消化道和呼吸道传播，各种家禽均可感染，幼鸡最易感。

仔猪黄痢：以1-3日龄多见，7日龄以上很少发生。

仔猪白痢;10-30日龄，1月龄以上很少发生。

症状和病变：

禽：气囊炎、肝周炎、心包炎

仔猪黄痢：腹泻、排黄色粥样便，小肠病变严重。

仔猪白痢：突然腹泻、排乳白色或石灰样稀便，含有气泡并有腥臭味，肠粘膜卡他性肠炎

注意事项

1、酒精灯的内焰温度达不到灭菌效果，必须用外焰。

2、无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。

3、培养细菌用的培养基与培养皿，玻棒、试管、烧瓶和吸管，实验操作者的双手等需要消毒和灭菌。

4、培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板

5、灭菌及消毒：无菌操作台用超净紫外灯和过滤风灭菌；桌面及人手用酒精棉球消毒

6、操作时右手无名指和小指夹住封口膜,另外三指持三角瓶,左手拿培养皿并打开上盖的一边,在酒精灯火焰旁操作.

7、需要使锥形瓶的瓶口通过火焰，灼烧灭菌

8、平板冷凝后，要将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染.

大肠杆菌的扩大培养：

9、火焰旁从斜面上用接种环取菌;

10、取菌前接种环要用酒精灯灼烧

灭菌,冷却后方能取菌;

11、取菌后封口膜和棉塞复原.

12、不要划破培养基

一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。

接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.

13、划线首尾不能相接。

14、划线后,培养皿倒置培养12-24h

15、划线的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。

16、在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，以免接种环温度太高，杀死菌种。

17、在作第二次以及其后的划线操作时，要从上一次划线的末端开始划线，划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。

涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。

在培养后判断是否有杂菌污染?

（1）菌落的形态看，是否湿润，透明，粘稠，颜色等。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。

（2）显微镜观察其形态、大小、看是否有菌丝、孢子、芽孢。是区别细菌、酵母、放线菌和霉菌关键指标。

（3）上述方法较难区别同类的不同物种，需借助化学和进一步的形态观察，如用革兰氏染色法等。

18、恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸气凝结成水滴留在盖上；如果正放，则水分形成的水滴会落入培养基表面并扩散开。如果培养皿中已形成菌落，则会导致菌随水扩散，很难再分成单菌落，达不到分离目的。