大鼠MCAO模型制作学习(第二版)

大鼠MCAO模型的制作
制作原理:
大脑中动脉栓塞模型并不是把线栓插进大脑中动脉,而是经颈内动脉入颅并插入大脑前动脉,从而阻塞来自栓塞侧的大脑前动脉的血供,以及堵塞接受后交通动脉血供的的颈内动脉颅内段.
大脑前动脉通过前交通动脉和对侧大脑前动脉相连通,颈内动脉通过后交通动脉和基底动脉相连接,从图中可以看出,大脑中动脉的血供被线栓阻断.
大鼠体重的选择:
国内一般选用250-280g的雄性大鼠,SD和WISTAR应该都可以.
麻醉剂的选择:
国内常用水合氯醛,戊巴比妥钠,氯胺酮,或者用气体麻醉机麻醉,我觉得用氯胺酮比较经济方便,适合国内使用.用水合氯醛和戊巴比妥钠术后大鼠死亡较多,气体麻醉太代价太高,一个是气体麻醉机一般实验室没有,第二个是气体麻醉剂很贵.
氯胺酮的优点:大鼠苏醒较快,术后状态较好,能较早进食,有效降低术后死亡率.氯胺酮的用法: 100g体重用氯胺酮8~10mg. 我们采用的方法是2支氯胺酮(2X2ml)加一支异丙嗪(2ml)加4ml生理盐水配成10ml,(本来想用甲苯噻嗪的,但买不到),使用时每100g体重用0.5ml,并且术用用点阿托品,减少呼吸道分泌物产生(1支稀释成10ml,每只大鼠注射0.1~0.2ml).
线栓的选择:
目前常用医用尼龙线,或者用渔线代替,大家所用的直径,粗细都不太相同,处理头端的方法或者用明火或者蚊烟熏或者在砂纸上磨,使头端变钝,外表面或者涂清漆或者涂石蜡. 这种线栓制作比较简便,但缺点就是头端或者比较尖,或者火烧后头端直径不一,有时候不能入颅,容易造成脑出血,以前差点被这种线栓搞死,术后头三天大鼠大量死亡,很伤心.死亡的大鼠解剖后很多都是脑出血.
国外有用医用尼龙线外涂硅胶的, 但方法我认为缺点多多,国内可能由于材料的限制,用的人不多.
关于线栓的直径:国内一般用0.2-0.3mm的尼龙线,外面如果涂层石蜡或者清漆直径差不多在0.3mm
关于线栓的硬度,我觉得直径在0.2以下的普通渔线较软,而0.2以上的就比较硬了,但0.2以下可能不能完全堵住血管.
我们经过实践摸索,采用了国外所用的尼龙线硅胶线,但发明了自已的制作工艺,有一定的设备要求和比较高的技术要求,这种线栓比较柔软光滑,头端为硅胶所包裹,钝圆形,栓塞效果比较理想.
附图一: 硅胶栓模式图
上面的线栓很粗，有时很难入颅或者插到所需要的深度，且制用过程很费硅胶,再者就是头端处理仍然不够好，下面的线栓制作比较麻烦，但很好使用，效果也比上面的线栓好。

附图二:线栓在ICA内部,其头端进入ACA约1mm
操作技巧:
1.建议作正中切口,这样鼓泡腺(很多人称这为甲状腺)容易钝性分
开;
2.小心分离血管神经,建议用显微镊,不过较贵,一把要300RMB,迷走
神经有一根分支斜跨颈总动脉,如果你有足够的技术能把线栓穿进颅内,建议不要分离这处血管和神经,在此处的头端和尾端各分离一处穿线,毕竟减少损伤能降低术后死亡率.
3.尽量不要分离结扎翼腭动脉,因为此动脉位置较深,分离的话损伤
较大,并且需要较多时间来做这个工作.如果线栓较好,一般可以顺利进入颅内.个别大鼠实在进入去,可以略加分离,用镊子夹住翼腭动脉,让线栓不要进入翼腭动脉可入颅.
4.尽量减少出血,有一个小技巧,在颈总切口上部打一个活结,待线栓
插进颈动脉分叉处时把活结稍稍打紧,再松开动脉夹,此时把线栓送入颈内动脉,入颅,但不要插到应该插的深度,这时稍稍松开切口
上的那个活结,减少因这个活结所引起的送栓阻力,这时轻轻地把线栓插到位,再把活结扎紧,并打死结,防止线栓滑出.
5.保证线栓插入颅内的深度,一般要求在颈动脉分杈以上要有
18-20mm,太浅会没有梗塞,太深梗死灶太大(因为大脑前动脉也会被阻止血供)或者出血.
术后评分:
比较常用的bederson评分,一般2分以上梗塞比较肯定.
模型成功率低的原因:
1线栓插入的深度不够,没有堵住大脑前动脉,这种情况大脑中动脑就不会缺血
2线栓直径太小,不能够堵住来自willis环的血供
3线栓太尖,入颅即穿破血管,线栓然后进入脑实质,只有出血,没有梗塞模型出血的类型:
A处出血:A处为入颅处,血管有一生理弯曲,A处出一般是由于线栓太硬或太尖,刚入颅即把颈内动脉给穿破,线栓然后进入脑实质,这样的出血术后解剖大鼠一般只会看到出血,没有明显的硬死灶,直径在0.2以上的尼龙线质地较硬,很容易在A处出血.
B处出血:如果达到了1.8-2.0Cm,还向颅内推进线栓,B处就比较危险了,容易把大脑前动脉给穿破,即使所使用的线栓头端处理得很好,也较细,穿得很深,也会把前交通动脉给堵住,这样就不是大脑中动脉栓塞模型了,大脑前动脉也会缺血,造成梗死面积过大,或者大鼠梗死灶均一性不好,所以不要超过20mm.
模型死亡率高的原因:
1麻醉剂不好:根据我的经验,其它条件一样,采用水合氯醛比采用氯胺酮麻醉术后死亡率高得多.
2脑出血:脑出血的原因如上述.
3 梗死面积过大,比如永久性梗塞就比再灌的死亡率高,或者线栓插入太深,大脑前动脉也被栓塞
4操作水平和技巧还不够，操作中对大鼠损作过大，出血过多等等。