病毒与细胞相互作用
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按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜 神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯 疱疹病毒接种于家兔角膜。
鸡胚接种：一种比较经济简便的方法。
一般采用孵化9-12天的鸡胚，按病毒种类不同 接种于鸡胚的不同部位。
医学ppt
3
可采用绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔接种。
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4
细胞培养
人或动物细胞在一定条件下可在实验室的培养瓶内生长。
能够使半数组织细胞在一定条件下发生细胞
病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。
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18
涉及细胞膜的CPE 有囊膜的病毒出芽过程中
能将其融合蛋白直接插入宿主细胞膜，结果导
致膜融合以及合胞体（syncytia）形成。
慢病毒、副粘病毒、麻疹病毒、肺病毒、某
些疱疹病毒等感染
涉及细胞骨架的CPE 微丝（如actin）、中介
妨碍，细胞继续分裂， 某些分化的细胞可失去
是
某些功能
通常无影响
否，但可通过共培 养等诱导
细胞形态改变，细胞可 否，致肿瘤DNA病
无限制传代
毒
移植至实验动物可产生 是，致肿瘤反录病
肿瘤
医学pp毒t
例证
甲型疱疹病毒、肠 病毒、呼肠孤病毒
瘟病毒、砂粒病毒、 狂犬病毒、大多数 反录病毒
脑组织的犬瘟热病 毒 多瘤病毒、腺病毒 鼠、禽白血病病毒
优点：
每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等 无个体差异，准确性和重复性好 可严格执行无菌操作 细胞培养本身就能显示病毒的生长特征 应用空斑技术可进行病毒的克隆化
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5
（一）细胞的类型
原代细胞（primary cell） 动物组织经胰蛋白酶消化
处理，使细胞分散而得到的细胞。
二倍体细胞株（diploid cell strain） 将长成单层
来自百度文库
于悬浮状态，并补充营养和校正pH，使之生长或维持存
活。
微载体培养（micro-carrier culture） 是在悬浮培养
的基础上，结合微载体的细胞培养技术。
微载体是直径100~35μm的微小颗粒，对细胞无毒
性，细胞可贴附其上长成单层。
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8
第二节 病毒与细胞的相互作用
杀细胞感染 非杀细胞感染
第四章 病毒与细胞间的相互作用
第一节 病毒的培养 第二节 病毒与细胞的相互作用
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1
第一节 病毒的培养
病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养 病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏 感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或 离体细胞进行分离培养（细胞培养）。
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2
动物接种： 接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。
丝（如vimentin）及微管（如tubulin）等细
胞骨架与细胞结构的完整性、物质运输及运动
性等有关。
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19
病毒引致的细胞凋亡与坏死
坏死（necrosis）、 凋亡（apoptosis）
图2432-2 感染犬瘟热病毒凋亡的 Vero细胞的电镜照片
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20
病毒感染抗体依赖的增强作用（Antibody-
常用。细胞悬液装瓶，5%CO2温箱静置培养， 细胞沉降并贴附在玻面上生长分裂，最后长成单 层。
2. 旋转培养（roller culture） 大规模生产疫
苗。细胞在玻瓶内生长时，玻瓶不断缓慢旋转， 细胞帖附于玻瓶四周，长成单层。
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7
悬浮培养（suspensive culture） 通过搅拌使细胞处
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22
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23
空斑是由一个感染性病毒粒子复制形成的，类似于细菌的菌落， 称为空斑形成单位（PFU）。病毒悬液中的感染性病毒量以每 毫升含有的PFU来表示。
的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色 体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称 为二倍体细胞。
传代细胞系（established cell line）能在体外持
续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而
成。
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6
（二）细胞培养的方法
1. 静置培养（stationary culture） 实验室
11
一、病毒引致的杀细胞变化
细胞病变效应(cytopathic effect,CPE) 由病 毒感染导致的细胞损伤。CPE能在光学显微镜 下观察。常见的细胞形态学变化为细胞变圆、 坏死、溶解、脱落或形成合胞体。有些病毒能 形成包涵体。
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12
细胞肿大
细胞圆缩
病毒所致的细胞病变
形成合胞体
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uninfected
slides from CDC
early infection
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late infection
16
Formation of multinucleated cells.
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17
半数组织细胞感染量（tissue culture infectious dose 50, TCID50）
13
tissue culture cells
epithelial
epithelioid 医学ppt
fibroblastic
14
epithelial cells
uninfected
slides from CDC
early infection late infection
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15
fibroblastic cells
引致持续感染，对细胞代谢无影响。
产生干扰素
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9
生产性感染（productive），病毒感染后能产生和释放 子代病毒颗粒。宿主细胞感染病毒发生的变化可能是细 胞死亡或细胞转化
非生产性感染（nonproductive）或称顿挫感染 （abortive infection） 病毒感染后不形成完整的病毒 颗粒
dependent enhancement of viral infection, ADE） 在病毒感染过程中，宿主产生的抗体与病 毒结合，非但未能阻断病毒吸附宿主细胞，反而增 强了病毒对细胞的感染，提高了病毒的滴度。
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21
（一）空斑试验
将适当浓度的病毒悬液加入单层细胞培养 中，当病毒吸附细胞后，再覆盖一层融化 的琼脂。病毒在细胞内复制后产生局限性 病灶，病灶逐渐扩大，肉眼也能看见，此 即空斑(plaque)。
持续性感染（persistent infection）是指持续长时间 的感染，感染过程中不形成感染性的病毒颗粒
病毒与细胞的相互作用
感染的类型 杀细胞
持续性、生产性 持续性、非生产性
转化
对细胞的影响
是否产生传染性病 毒颗粒
细胞病变（CPE），细
胞蛋白质、RNA、DNA
是
合成被抑制。细胞死亡
无CPE，细胞代谢无甚
鸡胚接种：一种比较经济简便的方法。
一般采用孵化9-12天的鸡胚，按病毒种类不同 接种于鸡胚的不同部位。
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可采用绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔接种。
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细胞培养
人或动物细胞在一定条件下可在实验室的培养瓶内生长。
能够使半数组织细胞在一定条件下发生细胞
病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。
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18
涉及细胞膜的CPE 有囊膜的病毒出芽过程中
能将其融合蛋白直接插入宿主细胞膜，结果导
致膜融合以及合胞体（syncytia）形成。
慢病毒、副粘病毒、麻疹病毒、肺病毒、某
些疱疹病毒等感染
涉及细胞骨架的CPE 微丝（如actin）、中介
妨碍，细胞继续分裂， 某些分化的细胞可失去
是
某些功能
通常无影响
否，但可通过共培 养等诱导
细胞形态改变，细胞可 否，致肿瘤DNA病
无限制传代
毒
移植至实验动物可产生 是，致肿瘤反录病
肿瘤
医学pp毒t
例证
甲型疱疹病毒、肠 病毒、呼肠孤病毒
瘟病毒、砂粒病毒、 狂犬病毒、大多数 反录病毒
脑组织的犬瘟热病 毒 多瘤病毒、腺病毒 鼠、禽白血病病毒
优点：
每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等 无个体差异，准确性和重复性好 可严格执行无菌操作 细胞培养本身就能显示病毒的生长特征 应用空斑技术可进行病毒的克隆化
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（一）细胞的类型
原代细胞（primary cell） 动物组织经胰蛋白酶消化
处理，使细胞分散而得到的细胞。
二倍体细胞株（diploid cell strain） 将长成单层
来自百度文库
于悬浮状态，并补充营养和校正pH，使之生长或维持存
活。
微载体培养（micro-carrier culture） 是在悬浮培养
的基础上，结合微载体的细胞培养技术。
微载体是直径100~35μm的微小颗粒，对细胞无毒
性，细胞可贴附其上长成单层。
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第二节 病毒与细胞的相互作用
杀细胞感染 非杀细胞感染
第四章 病毒与细胞间的相互作用
第一节 病毒的培养 第二节 病毒与细胞的相互作用
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第一节 病毒的培养
病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养 病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏 感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或 离体细胞进行分离培养（细胞培养）。
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2
动物接种： 接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。
丝（如vimentin）及微管（如tubulin）等细
胞骨架与细胞结构的完整性、物质运输及运动
性等有关。
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病毒引致的细胞凋亡与坏死
坏死（necrosis）、 凋亡（apoptosis）
图2432-2 感染犬瘟热病毒凋亡的 Vero细胞的电镜照片
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病毒感染抗体依赖的增强作用（Antibody-
常用。细胞悬液装瓶，5%CO2温箱静置培养， 细胞沉降并贴附在玻面上生长分裂，最后长成单 层。
2. 旋转培养（roller culture） 大规模生产疫
苗。细胞在玻瓶内生长时，玻瓶不断缓慢旋转， 细胞帖附于玻瓶四周，长成单层。
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悬浮培养（suspensive culture） 通过搅拌使细胞处
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空斑是由一个感染性病毒粒子复制形成的，类似于细菌的菌落， 称为空斑形成单位（PFU）。病毒悬液中的感染性病毒量以每 毫升含有的PFU来表示。
的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色 体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称 为二倍体细胞。
传代细胞系（established cell line）能在体外持
续增殖传代的细胞，大多数由癌细胞或二倍体细胞突变而
成。
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（二）细胞培养的方法
1. 静置培养（stationary culture） 实验室
11
一、病毒引致的杀细胞变化
细胞病变效应(cytopathic effect,CPE) 由病 毒感染导致的细胞损伤。CPE能在光学显微镜 下观察。常见的细胞形态学变化为细胞变圆、 坏死、溶解、脱落或形成合胞体。有些病毒能 形成包涵体。
医学ppt
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细胞肿大
细胞圆缩
病毒所致的细胞病变
形成合胞体
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uninfected
slides from CDC
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医学ppt
late infection
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Formation of multinucleated cells.
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半数组织细胞感染量（tissue culture infectious dose 50, TCID50）
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tissue culture cells
epithelial
epithelioid 医学ppt
fibroblastic
14
epithelial cells
uninfected
slides from CDC
early infection late infection
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fibroblastic cells
引致持续感染，对细胞代谢无影响。
产生干扰素
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生产性感染（productive），病毒感染后能产生和释放 子代病毒颗粒。宿主细胞感染病毒发生的变化可能是细 胞死亡或细胞转化
非生产性感染（nonproductive）或称顿挫感染 （abortive infection） 病毒感染后不形成完整的病毒 颗粒
dependent enhancement of viral infection, ADE） 在病毒感染过程中，宿主产生的抗体与病 毒结合，非但未能阻断病毒吸附宿主细胞，反而增 强了病毒对细胞的感染，提高了病毒的滴度。
医学ppt
21
（一）空斑试验
将适当浓度的病毒悬液加入单层细胞培养 中，当病毒吸附细胞后，再覆盖一层融化 的琼脂。病毒在细胞内复制后产生局限性 病灶，病灶逐渐扩大，肉眼也能看见，此 即空斑(plaque)。
持续性感染（persistent infection）是指持续长时间 的感染，感染过程中不形成感染性的病毒颗粒
病毒与细胞的相互作用
感染的类型 杀细胞
持续性、生产性 持续性、非生产性
转化
对细胞的影响
是否产生传染性病 毒颗粒
细胞病变（CPE），细
胞蛋白质、RNA、DNA
是
合成被抑制。细胞死亡
无CPE，细胞代谢无甚