总糖含量的测定

实验二总糖含量的测定

一、目的：

1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。

2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。

二、原理：

糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮

(C

14H

10

O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸

收，在150 µg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。

三、仪器、试剂和材料

1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等

2.试剂：

(1)葡萄糖标准液：l00 µg/ml

(2)浓硫酸

(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H

2SO

4

中。当日配制使用。

3.材料：淀粉

四、操作步骤

1.葡萄糖标准曲线的制作

取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：

管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（µg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min

取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。

2.植物样品中总糖的提取：

精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。取10ml滤液定容至100ml

3.测定

吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空

平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A

620

准曲线上查出葡萄糖的含量（µg）。

五、结果处理

C ×V总× D

样品含糖量（%）= ─────────────×100

W ×V测×106

其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（µg），

V总——提取液总体积（ml），

V测——测定时取用体积（ml），

D——稀释倍数，

W——样品重量（g），

106——样品重量单位由g换算成µg的倍数

六、注意事项：

该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。

七、思考题：

1.在从山芋粉中提取总糖时，加入盐酸的目的是什么？

2.简述蒽酮比色法测定植物组织中总糖含量的原理。