免疫层析法检测原理分类介绍.

免疫层析法检测原理分类介绍

作者：佚名文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司点击数：88 更新时间：2005-10-16

双抗体夹心

·以 hCG试剂为例

金标为鼠源性抗β-hCG单克隆抗体与胶体金的复合物，测试线包被羊抗α-hCG多克隆抗体，控制线包被羊抗鼠多克隆抗体。

妇女受孕的“指示剂” hCG是一种肽，包含一条和FSH（促卵泡成熟激素），FLH 具有同源性的α链和一条高度特异的β链。当待测尿液或血清中含有一定量的hCG时，样本通过层析作用到达金标位置hCG的β链和单抗β-hCG发生免疫反应，再层析到测试线位置，hCG的α链和多抗α-hCG 发生免疫反应，这样就把金标通过hCG桥连到测试线上，达到一定量后，金标显色为肉眼可见的水平，多余的金标继续泳动到控制线位置，由于多抗鼠和鼠源性抗β-hCG 单抗发生免疫反应，从而桥连胶体金显色，这样就得到阳性结果。

当尿液或血清中不含 hCG时，金标和测试线抗体不发生桥连，而控制线则显色，这样就得到了阴性结果。当测试线和控制线均不显色时，表示试剂盒无效。

该产品检验灵敏度25mIU/ml hCG。

测HbsAg的HbsAg产品的检测原理是双抗体夹心。

竞争反应原理

·以 MOP 为例（BSA 为牛血清白蛋白）

金标为鼠源性抗体Morphine单抗和胶体金的复合物，T线（为取得较强的免疫应答，故免疫原采用Morphine-BSA 偶联物）包被Morphine-BSA。C 线包被羊抗鼠抗体。

当待测尿液中含一定量以上的 Morphine时，样本到达金标位置，和单抗Morphine-BSA发生

免疫反应并完全饱和之，再层析到T线位置时，由于单抗Morphine-BSA lgG胶体金复合物已无空余的位点和测试线上的Morphine-BSA结合，故T线不显色，C线显色，这样得到的是阳性结果。

当待测尿液中不含 Morphine时，样本与金标不反应，再层析到T线位置时，固定在NC膜上

的Morphine-BSA会“捕捉”单抗 Morphine-BSA胶体金复合物，故T线显色，C线也显色，得到

阴性结果。当无C、T线时，表示试剂盒失效。

其它产品如 DPC、DTH、DME、DAM、DCO等依次类推。

应用proteinA金标的试剂盒检测原理

蛋白 A是金黄色葡萄球菌的一种胞壁蛋白，有与哺乳动物的lgG结合的特性，亲和力根据物种的差异而有区别。而人体中所有的抗体均是lgG因此能用来检测人体血液中的抗体用已知抗原测未知抗体。

·以IHI为例说明

HIV试剂盒金标为protein A-金标复合物,T线包被HIV抗原。C线包被鸡抗protein A多克隆抗体。

当待测血清中含有HIV抗体时，该抗体先和protein A胶体金复合物免疫结合，到T线位置时，该抗体又和固定在NC膜上的HIV抗原免疫结合，从而桥连protein A胶体金，T线显色。到达C线位置时，固定在NC膜上的鸡抗protein A 多抗桥连protein A多抗桥连protein A胶体金，C线显色，得到阳性结果。

若待测血清中不含HIV抗体，则T线上的HIV抗原和protein A不发生免疫结合，T线不显色，

艾康HIV1/2型抗体诊断试剂说明书

作者：佚名文章来源：艾康生物技术（杭州）有限公司点击数：85 更新时间：2005-10-16 HIV

艾滋病毒1/2 型抗体乳胶层析法

全血/血清/血浆快速检测试剂盒

使用说明书

（产品编号：IHI-402）

本品是一种不需要任何仪器设备的全血检测法，是利用免疫层析分析原理、双抗原夹心法快速检测血液中是否含有HIV1/2 抗体，从而用于临床判断人体是否受到HIV1/2 型病毒的感染。

【测定原理】

ACON HIV1/2 试剂盒采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术来定性检测血液中是否含有HI V1/2抗体，试剂盒中含有被事先固定于膜上测试区(T)的重组HIV 抗原和质控区(C)的相应抗体。

测试时，血标本滴入试剂盒加样孔（S）内，血标本中的HIV1/2抗体与预包被在膜上的重组抗原-乳胶结合物反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析，在测试区（T）与固定在膜上的重组HIV抗原反应。如果血液中含有抗HIV-1或HIV-2抗体，在测试区内（T）会出现一条红色条带，表明是阳性结果。如果在测试区内（T）没有出现红色条带，则血液中不含有抗HIV1/2 抗体，表明是阴性结果。无论抗-HIV1/2抗体是否存在于血液中，混合物都会继续向上层析至质控区（C），质控区的相应抗体与乳胶结合物反应出现一条红色条带。质控区内（C）所显现的红色条带是判定层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。

【包装组成】

l ACON HIV1/2 乳胶层析法全血/血清/血浆/检测试剂盒

(40人份)

l 反应缓冲液（5ml）

l 使用说明书一份

l 一次性使用吸管(40支)

【检测所需设备】

l 采血针

l 秒表

l 止血棉球

【标本收集】

血标本的采集：指尖、耳垂末梢或静脉标本采集后应尽可能立即使用，抗凝血应在24小时内使用以避免融血。

血清/血浆标本的收集：血清/血浆标本由静脉采血后离心获得，标本在2-8°C可保存一周。

如长期保存需冷冻。避免反复冻融

【操作步骤】

在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明，使用前将检测试剂盒和全血/血清/血浆标本恢复至室温（20-3 0oC），取出反应缓冲液并放置20分钟使其恢复至室温。

1．从原包装铝箔袋中取出试剂盒（注意：在打开铝箔袋前应先恢复至室温）。在1小时内应尽快地使用，特别是在室温高于30°C或是在高度潮湿的环境中应尽快地使用。

在一小时内测试将会得到最佳效果。

2．将试剂盒置于干净平坦的台面上，用吸管吸取指尖血或静脉血后滴入1滴全血/血清/血浆（约25ml）于加样孔S中，随后加入1 滴缓冲液于加样孔S 中。切勿将指尖血直接滴入加样孔内。

3．等待红色条带的出现，在15分钟左右读取测试结果。关键要注意，在红色条带出现以前，背景要清晰，特别当样本中含有低滴度的抗-HIV1/2抗体，会导致出现的T线颜色很淡，此时更需注意背景要清晰。在2 0分钟后读取的结果无效。

【结果判定】

阳性（+）：两条红色条带出现。一条位于测试区内（T），另一条位于质控区内（C）。

阴性（-）：仅质控区（C）出现一条红色条带，在测试区内（T）

无红色条带出现。

无效：质控区（C）未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。在任何情况下，应重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此批号产品，并与当地供应商联系。

注意：由于样本中抗-HIV 抗体滴度的不同，测试区（T）内的红色条带会显现出不同深浅的颜色。但是，本试剂盒的测试结果不能做为判定样本中抗体滴度高低的依据。

【灵敏度】

ACON HIV乳胶层析法全血/血清/血浆检测试剂盒在临床标本中用HIV 的EIA 的检测试剂盒进行比较，结果表明

ACON HIV 乳胶层析法全血/血清/血浆检测试剂盒对HIV-1和HIV-2抗体具有很高的灵敏度，其相对灵敏度达100%。

【特异性】

运用在ACON HIV乳胶层析法全血/血清/血浆检测试剂盒中的重组HIV抗原为病毒包膜上的糖蛋白。同EI A检测试剂盒相比，ACON HIV 乳胶层析法检测试剂盒对HIV-1 和HIV-2抗体具有很高的特异性，其相对特异性达99.6%。

【使用限制】

l ACON HIV1/2乳胶层析法检测试剂盒仅用于体外诊断，并适用于检测全血/血清/血浆样本中的抗-HIV1/ 2抗体。

l 这项测试仅表示样本中抗-HIV1/2 抗体的存在，而不能作为机体感染HIV-1或HIV-2的标准。

l 为了确保结果的准确性，可对样本用ELISA 或Western Blot 作进一步的分析。