植物组织培养第三章植物器官和组织培养
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• 2、胚状体的诱导率（%） 产生胚状体的外植体数 / 外植体总数
• 3、芽的诱导率——芽分化率（%） 产生芽的外植体数 / 外植体总数
• 4、根诱导率（%） 发根芽数 / 培养芽数
陈传红 制作 2007 / 5
第二节 植物营养器官培养
一、根段培养
• 是以根为外植体进行的离体培养
• 1、根无性系的建立
同植物、不同基因型、不同部位、不同年龄 • d 培养方式
固体、固—液培养基 • e 光照和温度 • f pH
陈传红 制作 2007 / 5
二、 植物茎段培养
• 茎段培养指不带芽和带1个以上定芽或不定芽。
• 包括：块茎、球茎在内的幼茎切段的无菌培养。 • 主要目的：快繁；其次也可探讨茎细胞的生理特
点，以及进行育种上的筛选突变体的过程。 • 优点：培养技术简单易行，繁殖速度较快；芽生
蝴蝶兰腋芽萌发
三、叶培养
• 以叶器官为外植体进行的离体培养。 • 叶器官包括：叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、
叶肉、子叶。 • 再生成植株的方式： • 直接诱导形成芽， • 先诱导形成愈伤组织，再经愈伤组织分化
成植株。
陈传红 制作 2007 / 5
1．叶形
陈传红 制作 2007 / 5
椭圆形 扇形
心形
(如叶柄和子叶)
接种在MS或其他培养基上
• 3)培养基：MS ＋ BA1-3mg／L ＋ NAA0．25mg／L • 4)培养： 叶接种后培养条件为每天10-12h光照，光强
1500-30001x。
陈传红 制作 2007 / 5
2、影响离体根发生和生长的因素
• a 培养基的种类 多采用MS ，Heller 基本培养基
陈传红 制作 2007 / 5
二、 初代培养物的建立
• 1、无菌环境
• 外植体处理：表面灭菌 + 抗生素 • 环境要清洁。 • 无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体，
或经其它物理的或化学灭菌方法处理过后的物体， 是无菌的。 • 用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌
陈传红 制作 2007 / 5
• 2、规范操作
• 什么是组织培养（即狭义的）？
• 包括分生组织、表皮组织、薄壁组织等及产生的愈 伤组织的培养
陈传红 制作 2007 / 5
第一节 器官和组织培养基本程序
• 包括以下几方面： • 无菌外植体的获得 • 初代培养物的建立 • 形态发生和植株再生 • 培养物的观察记录。
陈传红 制作 2007 / 5
一、无菌外植体的获得
待用。
陈传红 制作 2007 / 5
• 3、花蕾的灭菌
• 自来水冲洗
70%酒精浸泡数秒钟
洗2-3次
漂白粉上清液浸10min
洗2-3次，待用。
无菌水 无菌水
• 4、果实、种子的灭菌
• 果实和种子的消毒：自来水冲洗10-30min
酒精漂洗
2%Naclo液浸10min
2-3次
取出பைடு நூலகம்子培养，待用。
70% 无菌水
• 1、茎尖、茎段、叶片的灭菌
• 茎尖、茎段及叶片等的消毒：用清洁剂清洗
75%酒精浸泡10-20min
无菌水洗2-3次或
Naclo或升汞泡10-15min
无菌水洗3-4次
• 2、根、块茎、鳞茎的灭菌（灭菌较困难）
• 自来水冲洗
纯酒精漂洗
10min或2%Naclo液浸10-15min
升汞浸5无菌水洗3次，
• 根的直接增殖
• 根的数量增加，形成主根与侧根之分
• 根的间接增殖
• 愈伤组织
植株再生
• 根的形成过程
• 以不定根的方式进行
陈传红 制作 2007 / 5
2、影响离体根发生和生长的因素
• a 培养基的种类 多采用MS，½ MS，B5，White等基本培养基
• b 生长调节剂 多使用NAA IBA • c 植物材料
第四章 植物的器官和组织培养
2007 / 5
• 本章内容提要：
• 一、器官和组织培养基本程序 • 二、植物营养器官培养 • 三、植物繁殖器官培养 • 四、植物组织培养
陈传红 制作 2007 / 5
概念
• 什么是器官培养？
• 是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行 离体培养技术
• 分为：营养器官和繁殖器官培养。 • 包括:根、茎、叶、花、果实、种子。
• 茎段培养在适当条件下可能形成：
• 单苗 • 丛生芽 • 愈伤组织 • 完整植物
• 茎段能否增殖受到以下情况影响：
• 生长素 / 分裂素的比值 • 高 有形成愈伤组织的趋势 • 低 易形成丛生芽
陈传红 制作 2007 / 5
月季花 茎段培养
陈传红 制作 2007 / 5
陈传红 制作 2007 / 5
• 3、条件合适
• 培养基种类、 激素种类与浓 度、其他附加 物、外植体类 型等要合适。
陈传红 制作 2007 / 5
无菌操作
三、 形态发生和植株再生
体细胞胚
• 外植体
愈伤组织 具根茎器官
器官分化 单极器官
植株
•
陈传红 制作 2007 / 5
先茎后根 先根后茎
四、培养物的观察记录
• 1、愈伤组织诱导率（%） 产生愈伤组织的外植体数 / 外植体总数
陈传红 制作 2007 / 5
一、花器官培养
• 定义：指对植物的整朵花或花的组成部分（花 托、花柄、花瓣、花丝、子房、花药、胚珠等） 进行离体培养。
• 意义：进行花性别鉴定、果实和种子发育、花 形态发生等研究
芽方式增殖的苗木质量好，且无病，性状均一； 解决不能用种子繁殖的无性繁殖植物的快速繁殖 问题等。
陈传红 制作 2007 / 5
陈传红 制作 2007 / 5
植物的茎
茎段培养 过程
去叶片用自来水冲洗 健康植株上选健壮的枝梢
0.1%升汞
再生
陈传红 制作 2007 / 5
MS培养基 1%次氯酸钠
75%酒精1分钟
陈传红 制作 2007 / 5
叶的器官培养
陈传红 制作 2007 / 5
• 方法：
• 1）外植体消毒：幼嫩叶片冲洗干净
用70％酒精
10s
饱和漂白粉液浸3～15min（或在0．1％L汞
中浸3-5min）
无菌水冲洗3～4次
无菌干滤纸
吸干
待用。
• 2）接种：灭菌过的叶组织切成约0．5cm见方小块或薄片
• b 生长调节剂 多使用NAA TDZ 2，4—D等 • c 植物材料
不同植物、不同基因型、不同叶龄 • d 培养方式
固体培养 • e 光照和温度 • f pH
陈传红 制作 2007 / 5
第三节 植物繁殖器官培养
• 意义：
• 可离体快速繁殖 • 可改变染色体倍性 • 挽救远源杂种胚 • 诱导三倍体植株
• 3、芽的诱导率——芽分化率（%） 产生芽的外植体数 / 外植体总数
• 4、根诱导率（%） 发根芽数 / 培养芽数
陈传红 制作 2007 / 5
第二节 植物营养器官培养
一、根段培养
• 是以根为外植体进行的离体培养
• 1、根无性系的建立
同植物、不同基因型、不同部位、不同年龄 • d 培养方式
固体、固—液培养基 • e 光照和温度 • f pH
陈传红 制作 2007 / 5
二、 植物茎段培养
• 茎段培养指不带芽和带1个以上定芽或不定芽。
• 包括：块茎、球茎在内的幼茎切段的无菌培养。 • 主要目的：快繁；其次也可探讨茎细胞的生理特
点，以及进行育种上的筛选突变体的过程。 • 优点：培养技术简单易行，繁殖速度较快；芽生
蝴蝶兰腋芽萌发
三、叶培养
• 以叶器官为外植体进行的离体培养。 • 叶器官包括：叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、
叶肉、子叶。 • 再生成植株的方式： • 直接诱导形成芽， • 先诱导形成愈伤组织，再经愈伤组织分化
成植株。
陈传红 制作 2007 / 5
1．叶形
陈传红 制作 2007 / 5
椭圆形 扇形
心形
(如叶柄和子叶)
接种在MS或其他培养基上
• 3)培养基：MS ＋ BA1-3mg／L ＋ NAA0．25mg／L • 4)培养： 叶接种后培养条件为每天10-12h光照，光强
1500-30001x。
陈传红 制作 2007 / 5
2、影响离体根发生和生长的因素
• a 培养基的种类 多采用MS ，Heller 基本培养基
陈传红 制作 2007 / 5
二、 初代培养物的建立
• 1、无菌环境
• 外植体处理：表面灭菌 + 抗生素 • 环境要清洁。 • 无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体，
或经其它物理的或化学灭菌方法处理过后的物体， 是无菌的。 • 用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌
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• 2、规范操作
• 什么是组织培养（即狭义的）？
• 包括分生组织、表皮组织、薄壁组织等及产生的愈 伤组织的培养
陈传红 制作 2007 / 5
第一节 器官和组织培养基本程序
• 包括以下几方面： • 无菌外植体的获得 • 初代培养物的建立 • 形态发生和植株再生 • 培养物的观察记录。
陈传红 制作 2007 / 5
一、无菌外植体的获得
待用。
陈传红 制作 2007 / 5
• 3、花蕾的灭菌
• 自来水冲洗
70%酒精浸泡数秒钟
洗2-3次
漂白粉上清液浸10min
洗2-3次，待用。
无菌水 无菌水
• 4、果实、种子的灭菌
• 果实和种子的消毒：自来水冲洗10-30min
酒精漂洗
2%Naclo液浸10min
2-3次
取出பைடு நூலகம்子培养，待用。
70% 无菌水
• 1、茎尖、茎段、叶片的灭菌
• 茎尖、茎段及叶片等的消毒：用清洁剂清洗
75%酒精浸泡10-20min
无菌水洗2-3次或
Naclo或升汞泡10-15min
无菌水洗3-4次
• 2、根、块茎、鳞茎的灭菌（灭菌较困难）
• 自来水冲洗
纯酒精漂洗
10min或2%Naclo液浸10-15min
升汞浸5无菌水洗3次，
• 根的直接增殖
• 根的数量增加，形成主根与侧根之分
• 根的间接增殖
• 愈伤组织
植株再生
• 根的形成过程
• 以不定根的方式进行
陈传红 制作 2007 / 5
2、影响离体根发生和生长的因素
• a 培养基的种类 多采用MS，½ MS，B5，White等基本培养基
• b 生长调节剂 多使用NAA IBA • c 植物材料
第四章 植物的器官和组织培养
2007 / 5
• 本章内容提要：
• 一、器官和组织培养基本程序 • 二、植物营养器官培养 • 三、植物繁殖器官培养 • 四、植物组织培养
陈传红 制作 2007 / 5
概念
• 什么是器官培养？
• 是指对植物某一器官的全部或部分或器官原基进行 离体培养技术
• 分为：营养器官和繁殖器官培养。 • 包括:根、茎、叶、花、果实、种子。
• 茎段培养在适当条件下可能形成：
• 单苗 • 丛生芽 • 愈伤组织 • 完整植物
• 茎段能否增殖受到以下情况影响：
• 生长素 / 分裂素的比值 • 高 有形成愈伤组织的趋势 • 低 易形成丛生芽
陈传红 制作 2007 / 5
月季花 茎段培养
陈传红 制作 2007 / 5
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• 3、条件合适
• 培养基种类、 激素种类与浓 度、其他附加 物、外植体类 型等要合适。
陈传红 制作 2007 / 5
无菌操作
三、 形态发生和植株再生
体细胞胚
• 外植体
愈伤组织 具根茎器官
器官分化 单极器官
植株
•
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先茎后根 先根后茎
四、培养物的观察记录
• 1、愈伤组织诱导率（%） 产生愈伤组织的外植体数 / 外植体总数
陈传红 制作 2007 / 5
一、花器官培养
• 定义：指对植物的整朵花或花的组成部分（花 托、花柄、花瓣、花丝、子房、花药、胚珠等） 进行离体培养。
• 意义：进行花性别鉴定、果实和种子发育、花 形态发生等研究
芽方式增殖的苗木质量好，且无病，性状均一； 解决不能用种子繁殖的无性繁殖植物的快速繁殖 问题等。
陈传红 制作 2007 / 5
陈传红 制作 2007 / 5
植物的茎
茎段培养 过程
去叶片用自来水冲洗 健康植株上选健壮的枝梢
0.1%升汞
再生
陈传红 制作 2007 / 5
MS培养基 1%次氯酸钠
75%酒精1分钟
陈传红 制作 2007 / 5
叶的器官培养
陈传红 制作 2007 / 5
• 方法：
• 1）外植体消毒：幼嫩叶片冲洗干净
用70％酒精
10s
饱和漂白粉液浸3～15min（或在0．1％L汞
中浸3-5min）
无菌水冲洗3～4次
无菌干滤纸
吸干
待用。
• 2）接种：灭菌过的叶组织切成约0．5cm见方小块或薄片
• b 生长调节剂 多使用NAA TDZ 2，4—D等 • c 植物材料
不同植物、不同基因型、不同叶龄 • d 培养方式
固体培养 • e 光照和温度 • f pH
陈传红 制作 2007 / 5
第三节 植物繁殖器官培养
• 意义：
• 可离体快速繁殖 • 可改变染色体倍性 • 挽救远源杂种胚 • 诱导三倍体植株