基础化学实验
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实验五 葡萄糖相对分子量的测定及渗透压对细胞形态的影响
【目的要求】
1.学习利用凝固点降低法测定溶质的相对分子量及溶液的渗透压。
2.掌握低渗、等渗、高渗溶液的配制。
3.观察细胞在渗透压不同的溶液中之形态。
【基本原理】
将溶质溶于溶剂中,溶剂的凝固点则降低,即溶液的凝固点低于纯溶剂的凝固点。
溶液的浓度很稀时,溶液凝固点降低值与溶液的质量摩尔浓度成正比。
f f f t t t ∆=-0
=K f ·m B
式中,0
f t 为纯溶剂的凝固点;f t 为溶液的凝固点;f t ∆为溶液的凝固点降低值;K f 为溶剂的摩尔凝固点降低常数。
若称取溶质m (g),溶剂W (g)配成稀溶液,则溶液的质量摩尔浓度为:
W
M m m B /=·1000 式中,m B 为溶液的质量摩尔浓度;M 为溶质的摩尔质量。
已知溶剂的K f 值,测得溶液的凝固点降低值f t ∆,可运用下式计算出溶质的摩尔质量,即得溶质的相对分子质量:
f f
t K M ∆=·W
M 1000∙ 根据范托夫渗透压计算公式及溶液的凝固点降低值,可计算出溶液的渗透压:
RT K t RT m f f
B ∆==π
式中,R 为8.314×103Pa ·L ·mol -1·K -1;T 为热力学温度。
人体正常红细胞呈扁圆形,边缘厚,中间薄。在等渗溶液中,其形状不变;在低渗溶液中细胞易溶胀破裂;在高渗溶液中易皱缩形成血栓。
【仪器和药品】
凝固点测定装置,光学显微镜,血色素吸管(20μl ),6号注射针头,0.1℃分度温度计,载玻片,盖玻片,葡萄糖(分析纯),粗食盐,冰,70%酒精消毒棉球,消毒干棉球,5%(W/W) 葡萄糖标准溶液。
【实验步骤】
1.凝固点降低法测定葡萄糖相对分子质量
(1)制冰盐水混合物:在玻璃缸或大烧杯中,加自来水适量,约占容器体积1/3,放入外搅拌器,加足量小冰块和粗食盐至饱和,控制温度在-2~-4℃,为保持此温度,实验过程中应及时补充冰和粗食盐。
(2)纯溶剂水的凝固点测定:取蒸馏水40ml置冰点管中,按图3-5-1装置,然后均匀地上下搅拌冰点管内的水,同时不断搅动冰水浴,直至管内有冰晶析出。此时温度略有回升,待温度恒定时,记录数据,可借助于放大镜观察读数,读取至小数点后第2位。取出冰点管,待冰晶融化,重复测定1次,取
t。
其平均值为纯溶剂水的凝固点0
f
(3)葡萄糖溶液凝固点测定:用待测葡萄糖溶液冲洗冰点管3次。取40ml5%(W/W)葡萄糖标准溶液,注入冰点管中,按上述方法测定葡萄糖溶液的凝固点。重复测定1次,取其平均值即为葡萄糖溶液的凝固t。
点
f
(4)数据处理见下表:
测定项目第1次第2次平均值t
水的凝固点0
f
t
葡萄糖溶液的凝固点
f
葡萄糖的相对分子质量M=
葡萄糖溶液的渗透压π=
2.观察红细胞在低渗、等渗、高渗溶液中的形态
(1)配制不同渗透压的溶液:取固体葡萄糖按下表配制成3种浓度的溶液。
取3支洁净干燥小试管,分别注入1ml上述所配制的溶液备用。
(2)红细胞混悬液的制备:采血可在手指或耳垂部,通常以耳垂取血较好,不易感染。取血时轻柔耳垂片刻,用70%酒精消毒棉球擦洗耳垂部,待酒精稍干后,手指夹住耳垂,用消毒注射针头(酒精灯上烧红亦可)快速刺破耳垂下缘,轻轻挤压耳垂,第一滴血用干棉球擦去,然后用血色素吸管吸耳血液,在上述3支试管各注入血液10μl,摇匀,即得红细胞混悬液。
(3)观察红细胞形态:从上述3支小试管中,各取一滴红细胞混悬液,分别滴于载玻片上,盖上盖玻片,置于显微镜载物台上,转动粗调焦轮,使低倍镜(1∶10)于最低位置(注意勿将盖玻片压碎),然后边观察边调节粗调焦轮,使镜头由低向高移动,调至血涂片中红细胞形态清晰,再换用高倍镜(1∶45)观察,调节微调焦轮至镜内成像清晰可见。观察比较3种浓度溶液中红细胞的形态。必要时,可与标准血涂片比较。
【问题讨论】
1.冰盐水混合物为什么可使温度降至0℃以下?
2.试解释在低渗、等渗、高渗溶液中,红细胞的形态为何不同?3.将所测得的葡萄糖分子量与理论值比较,分析造成误差的因素。