浅谈马铃薯脱毒快繁流程步奏及配方

浅谈马铃薯脱毒快繁流程步奏及配方马铃薯：(Solanumtuberosum)为茄科茄属作物．是全球重要的粮菜兼用作物。马铃薯具有生长期短、产量高、适应性强、营养丰富、耐储运的特点，因此深受生产和消费者的喜爱。但在马铃薯生产中普遍存在种性退化的问题，而病毒侵染是马铃薯退化的根源。由于马铃薯是无性繁殖作物，所以病毒侵染后会世代相传，危害逐年加重。目前，世界上公认的解决马铃薯病毒危害，防止品种退化的有效途径是茎尖离体培养。通过茎尖离体培养培育脱毒基础苗，再通过建立合理的良种繁育体系生产优良种薯是马铃薯高产、稳产、优质的可靠保证。

一脱毒种薯繁育工艺流程

马铃薯脱毒种薯繁育工艺流程如图所示。

二脱毒技术

2.1 脱毒方法

2.1.1 外植体选择及处理

外植体的选择途径一般有3条：①在生长季节从田间挖取植株种植在无菌的盆土中，温室内栽培，取其新长成枝条的芽；②从田间切取枝条，插入营养液中生长，取新抽生枝条上的芽；③块茎在室内发芽，芽经热处理(38℃)2周后再取芽。另外，定期给植株喷施内吸杀菌剂，如0.1％多菌灵和0.1％链霉素的混合液，可以有效提高灭菌效果。经过上述处理之后，要比直接取自田间枝条污染少得多。再加上茎尖分生组织又被彼此重叠的叶原基保护．只要仔细剥取，无须再进行消毒，就能得到无菌的外植体。但为保险起见，在切取外植体之前，可以先进行简单的表面消毒，一般在5％次氯酸钠中处理8～10min即可。虽然顶芽和腋芽都能作为外植体，但顶芽的茎尖生长要比腋芽的快，成活率也高，所以一般取顶芽作为外植体。

2.1.2 剥离茎尖和接种

在超净台上的解剖镜(8～40倍)下进行茎尖剥离。解剖时必须注意使茎尖暴露的时间越短越好．以免超净台的气流风干茎尖。在材料下垫上一块湿润的无菌滤纸也可达到保持茎尖新鲜的目的。在解剖镜下用解剖针将叶片和叶原基剥掉，直到露出圆亮的茎尖生长点。将带有l～2个叶原基的茎尖切下．接种到培养基上。要注意防止交叉污染，尤其是当芽未曾进行过表面灭菌时更要谨慎。

2.1.3 培养

对马铃薯茎尖培养来说，MS和white基本培养基都是较好的培养基，而且附加少量(0.1～0.5 mg／L)的NAA或BA或二者都加，培养效果更好。只有生长点的

极小茎尖的培养最好采用液体培养，多放在滤纸桥上培养。

茎尖培养初期的最适光照强度为1000lx，4周后增加到2000 lx，6周后增加到4000lx。培养温度21～25℃，光照时间以16h／d为宜。1个月左右茎尖再生成有可见小叶的小植株，保存部分原苗，准备扩繁用；另一部分用于病毒检测。茎尖培养时需要注意以下3个问题：①茎尖接种后基部无明显膨大，茎尖变绿，成绿色小点，这是激素浓度或温度偏低造成的；②接种后茎尖明显膨大，3～5d可见淡绿色愈伤组织，这是由于激素浓度或温度偏高，光照偏弱造成的。③培养基添加0.8 mg／L的GA有利于茎尖的成活和促长，但不要浓度过高或作用时间过长，否则会使茎尖不易转绿，导致叶原基迅速伸长，生长点并不生长，整个茎尖变褐而死。

2.2 脱毒效果检测

马铃薯经过茎尖培养脱毒后，只有部分植株是脱病毒植株。因此，在用作脱病毒原种苗之前，必须进行病毒检测证明无病毒后才能推广。在繁殖中还要不断重复检测，以防重新感染。常用的病毒鉴定方法有指示植物测定法、血清学方法和电

子显微镜法。

三脱毒苗快繁技术

3.1 继代培殖与生根培养

将经鉴定无毒的马铃薯脱毒苗，采用固体与液体培养基相结合的方法进行继代增殖培养效果好。取试管苗单节切段扦插在MS固体培养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左右便可发育成5～10cm高的小植株，然后进行切段繁殖。此法速度快，每月可繁殖5～8倍。如果多茎节的试管苗接种在液体培养基上，进行浅层静止液体培养，则比固体培养基生根快，长得粗壮。便于栽植，同时省去大量琼脂，降低了生产成本，同时提高了试管苗成活率。培养基可选用MS培养基，其中的烟酸、肌醇都可以减去，琼脂浓度也可降低。在25～28℃、光照强度3000~4000lx、连续光照的条件下，切段繁殖速度很快，一般每月能增加7～8倍。

另外，也可将1～2cm高的苗转人MS、IAA 0.1～0.5 mg／L，活性炭0.1～0.2g ／L的生根培养基中培养，7～10d生根。

3.2 驯化移栽

为增强试管苗对温室内环境条件的适应能力，移植前对试管苗要进行光、温锻炼。具体方法是：移植前7d左右，将长有3～5片叶、高2～3cm的试管苗瓶摆放在温室内的驯化畦内，畦内浇上水，畦上方半遮阳进行驯化，以防止强光、高温灼伤试管苗和维持试管苗周围的温度。移至温室的试管苗，尽管仍处于封口的瓶内，但由于封口膜透气性好，瓶内的湿度下降，使试管苗的茎叶变硬，加上光照增强，茎秆变粗，叶片肥厚浓绿，有效地抑制了徒长和真菌的侵染，从而提高了试管苗的抗逆性和对环境条件变化的适应能力，提高了移栽成活率。炼苗期温室内的温度一般要求白天23～27℃，夜间不低于10℃。

移栽方法采用单芽茎段或双芽茎段扦插式移栽。边剪取边扦插。扦插基质可采用灭过菌的珍珠岩或疏松土壤。扦插成活后每隔2~3d喷1次营养液（表4-5），后期每隔10d喷一次，以促进扦插苗健壮和顺利结薯。

四微型薯生产技术

由试管苗生产的重l～30g的微小马铃薯称为微型薯。虽然温室或实验室内都可以诱导产生微型薯，但以实验室内诱导生产为主，为马铃薯的种质保存、交换以及脱毒种薯的繁育和运输提供了一种便利的途径，也便于马铃薯种薯的大面积推广。

4.1 实验室生产微型薯

组织培养生产微型薯要求条件较严格，费用较高，但产品的质量好，整齐度高，粒重一般只有1～5g，由于是在三角瓶中或试管中培养，因此可作为不带病原菌的原种使用，或作为基础研究材料和病原鉴定的实验材料。实验室微型薯生产(图

4—12)一般分单茎段扩大繁殖和微型薯诱导两个阶段。

4.1.1 单茎节扩大繁殖

从试管苗中获得茎切段，每个切段上带有1～2个叶片和腋芽。每个三角瓶中接4～5个茎段进行培养。培养条件是温度22℃、光照16h／d、光照强度1000lx。所采用培养基：①节段培养基，MS、3％蔗糖、0.8％琼脂；②液体振荡培养基，MS、2％蔗糖；③微型种薯诱导培养基，MS、香豆素50～100 rag／L；④离体保存培养基，MS、3％蔗糖、4％甘露醇、0.8％琼脂。在此条件下，由腋芽形成的小植株生长很快，当小植株长到4～5 cm时，就可以进行第二步培养。

4.1.2 微型薯诱导

微型薯要求有一定量的激素，并且要在黑暗条件下培养。采用廉价的香豆素代替CCC和BAP，用食用白糖代替蔗糖，同样结薯很好。采用MS、香豆素50～100 mg／L的液体或固体培养基。培养基的液固状态和光照条件对微型薯诱导有很大作用。与单茎节扩大繁殖不同，微型薯的诱导必须在黑暗条件下进行，否则只