凝血酶敏感蛋白-1对体外培养的大鼠肺成纤维细胞的影响
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ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｉ ｂ ｌ ｅ ｎ ｉ ｔ ｉ ｒ ｃ ｏ ｘ ｉ ｄ ｅ ｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ａ ｓ ｅ ｉ ｎ ｅ ｘ ｐ ｅ ｉｍｅ ｒ ｎ ｔ ａ ｌ ｌ ｙ ｉ ｎ －
凝 血 酶 敏感 蛋 白 一１ 对 体 外 培 养 的大 鼠肺 成 纤 维 细 胞 的影 响 冰
（ Ｔ Ｓ Ｐ一１ ） 能 否促进 肺成 纤 维细 胞增 殖 目前还 不 十分 清楚 ， 为研究此 因子是否促进肺成纤维 细胞增殖 ， 我 们
下完整 的肺组织置于无菌的培养皿 中， ０ ． Ｏ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ 冲洗去除肺组织的血液 ， 眼科 剪剔 除肺组织 内小 血管 ， 后将肺组织 剪成大小 约 １ ｍ ｍ×１ ｍ ｍ 的组 织块 ， 贴 于 用 明胶包被过 的 ６孔板 上 ； 放于 ３ ７ ℃， ５ ％Ｃ Ｏ ： ， ９ ５ ％ 饱 和湿度条件下微干涸 ２ ｈ后每孔加入含 １ ０ ％胎牛血清 的Ｄ ＭＥ Ｍ（ 高糖 ） 新鲜培养基 １ ｍ Ｌ ， 放 回二氧化碳 培养 箱培养 ， ４ ｈ 后补充培养基至 ２ ｍ Ｌ 。３ ｄ 换液 １ 次， ５ ｄ后
杨艳 娟 ，郑 西卫 ， 杨 桂 兰 ， 侯 嘉 ，程德 云
宁夏医科 大学总 医院呼 吸内科（ 银川 ７ ５ ０ ０ ０ ４ ） ； 四川 大学华西医院呼吸 内科（ 成都 ６ １ ０ ０ ４ １ ）
【 摘要 】 目的 了解凝血酶敏感蛋 白 一 １ （ Ｔ Ｓ Ｐ— １ ） 对体 外培 养的大鼠肺 成纤维细胞（ Ｌ Ｆ ） 的影 响。方 法
［ １ ４ ］邓艳秋 ， 赵纲 ， 焦卓敏 ， 等． 局灶性脑缺血耐受 和星形胶 质细
胞反应 ［ Ｊ ］ ．１ 临床神经病学杂志 ， ２ ０ ０ ３， １ ６ （ ４ ）： ２ １ ８— ２ ２ ０ ． （ 收稿 日期 ： ２ ０ １ ３—０ ３—１ ０ 编辑 ： 王冰）
［ １ ３ ］Ｋ Ｏ Ｐ Ｍ ＷＳ ＫＩ Ｈ， Ｚ Ｈ Ｅ Ｎ Ｇ Ｙ Ｍ，Ｈ Ｅ Ｂ Ｅ Ｒ Ｉ Ｔ Ｉ Ａ Ｔ Ｚ Ｅ， ｅ ｔ ａ １ ．Ｉ ｎ ｖ ｉ ｖ ｏ
广东 医学
２ ０ １ ３年 １ ０月 第 ３ ４卷第 ｌ ９期
Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ Ｏ ｃ ｔ ．２ ０ １ ３， Ｖ ｏ １ ．３ ４， Ｎ ｏ ．１ ９
・
２９ ４１ ・
［ Ｊ ］ ．Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｄ ｅ ｖ Ｎ ｅ ｕ ｒ ｏ ｓ ｃ ｉ ， １ ９ ９ ３，１ １ （ ２ ）： ２ ３ ９— ２ ４ ７ ． ［ １ ２ ］ＭＥ Ｓ Ｓ Ｉ Ｎ Ｇ Ａ， Ｂ Ｒ Ｅ Ｎ Ｎ Ｅ Ｒ Ｍ． ＧＦ Ａ Ｐ ：ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｉ ｍ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｇ ｌ ｅ ａ ｎ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｌ ｙ ｅ ｎ ￣ ｎ ｅ ｅ ｒ ｅ ｄ ｍｉ ｃ ｅ［ Ｊ ］ ．Ｇ ｌ ｉ ａ ，
去除肺动脉组织块 即可见 到有一定数量的细胞生长 。
２ ０ １ ０年 １ 月至 ２ ０ １ ２年 １ ２月采用离体培养大 鼠肺成 纤
维细胞 ， 用Ｔ Ｓ Ｐ一 １处理后观察其对肺纤维细胞增殖 的
影响。 １ 材 料 与 方 法
细胞 纯 化 及 收 集 ： 小 心倒 掉 旧培 养 液 ， 用０ ． ０ １
２ ０ ０ ３，４：８ ７ —９ ０ ．
ｒ ｏ ｃ Ｎａ ｔ ｌ Ａｃ ａ ｄ Ｓ ｃ ｉ Ｕ Ｓ Ａ，１ ９ ９ ３ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｎ ｅ ｕ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ［ Ｊ ］ Ｐ
ຫໍສະໝຸດ Baidu
９ ０ （ ７ ） ： ３ ０ ４ —３ ２ ０ ２ ７ ．
细胞增 殖 ． 流式 细胞 术检 测细胞周期。结果
加， ４ ８ ｈ达 高峰 。 结 论
体
外培养 大鼠 Ｌ Ｆ ， 加入 不同浓度（ １ ０ 、 １ ０ 和１ ０ 。 ｍｏ ｌ ／ Ｌ ） Ｔ Ｓ Ｐ一１ 处理 １ ２ 、 ２ ４和 ４ ８ ｈ ， 采 用四唑盐 （ Ｍ Ｔ ｒ ） 法检 测 Ｔ Ｓ Ｐ一１刺激后 ， Ｍ ＭＴ法 实验 显示 Ｔ Ｓ Ｐ一１显著促进大 鼠 Ｌ Ｆ增殖 ， 此
低氧性肺动脉 高压 以肺血 管重建 为主要病 理生理
存 。５ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ ＭＴ Ｆ ： ０ ． ５ ｇ Ｍ Ｔ Ｔ ， 用 Ｐ Ｂ Ｓ 定 容至 １ ０ ０ ｍ Ｌ ， ０ ． ２ ｍ滤器过滤除菌 ， ４ ￣ Ｃ避光保存 。
改变 ， 而肺血 管重建 不仅表 现为肺 动脉平 滑肌细胞 的 增殖 和肌 型的转化 ， 肺血管 外 的成 纤维细 胞 的增 生亦 是导致肺血管重建发生发展 的一个 重要原 因…。成纤
作 用 呈 浓度 和 时 间依 赖 性 。Ｆ Ｃ Ｍ 分析显示 Ｔ Ｓ Ｐ一１处理 Ｌ Ｆ １ ２ ｈ后 ， Ｇ １期 比例 下 降 ， Ｇ ２＋Ｓ期 细 胞 比例 即 出 现 增 Ｔ Ｓ Ｐ—ｌ呈 浓 度 和 时 间依 赖 方 式促 进 大 鼠 Ｌ Ｆ增 殖 。
【 关键词 】 Ｔ Ｓ Ｐ一 １ ； 肺成纤维细胞 ； 细胞 增殖
维细胞 是组织 连接 细胞家族 中功 能最多 的一员 ， 具 有
１ ． ２ 大 鼠肺成 纤维细胞 培养
原 代分 离培 养 ： 取ｓ Ｄ
大 鼠新生 鼠（ ４ ｄ以内） ， 碘伏 常规 消毒 ， 打开胸腔 ， 取
多 向分化 、 高度增殖及 自我更新 能力 ， 多种因子都 能促 进成纤 维 细 胞 增 殖 及 分 化 ， 但凝血酶敏感 蛋 白
凝 血 酶 敏感 蛋 白 一１ 对 体 外 培 养 的大 鼠肺 成 纤 维 细 胞 的影 响 冰
（ Ｔ Ｓ Ｐ一１ ） 能 否促进 肺成 纤 维细 胞增 殖 目前还 不 十分 清楚 ， 为研究此 因子是否促进肺成纤维 细胞增殖 ， 我 们
下完整 的肺组织置于无菌的培养皿 中， ０ ． Ｏ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ 冲洗去除肺组织的血液 ， 眼科 剪剔 除肺组织 内小 血管 ， 后将肺组织 剪成大小 约 １ ｍ ｍ×１ ｍ ｍ 的组 织块 ， 贴 于 用 明胶包被过 的 ６孔板 上 ； 放于 ３ ７ ℃， ５ ％Ｃ Ｏ ： ， ９ ５ ％ 饱 和湿度条件下微干涸 ２ ｈ后每孔加入含 １ ０ ％胎牛血清 的Ｄ ＭＥ Ｍ（ 高糖 ） 新鲜培养基 １ ｍ Ｌ ， 放 回二氧化碳 培养 箱培养 ， ４ ｈ 后补充培养基至 ２ ｍ Ｌ 。３ ｄ 换液 １ 次， ５ ｄ后
杨艳 娟 ，郑 西卫 ， 杨 桂 兰 ， 侯 嘉 ，程德 云
宁夏医科 大学总 医院呼 吸内科（ 银川 ７ ５ ０ ０ ０ ４ ） ； 四川 大学华西医院呼吸 内科（ 成都 ６ １ ０ ０ ４ １ ）
【 摘要 】 目的 了解凝血酶敏感蛋 白 一 １ （ Ｔ Ｓ Ｐ— １ ） 对体 外培 养的大鼠肺 成纤维细胞（ Ｌ Ｆ ） 的影 响。方 法
［ １ ４ ］邓艳秋 ， 赵纲 ， 焦卓敏 ， 等． 局灶性脑缺血耐受 和星形胶 质细
胞反应 ［ Ｊ ］ ．１ 临床神经病学杂志 ， ２ ０ ０ ３， １ ６ （ ４ ）： ２ １ ８— ２ ２ ０ ． （ 收稿 日期 ： ２ ０ １ ３—０ ３—１ ０ 编辑 ： 王冰）
［ １ ３ ］Ｋ Ｏ Ｐ Ｍ ＷＳ ＫＩ Ｈ， Ｚ Ｈ Ｅ Ｎ Ｇ Ｙ Ｍ，Ｈ Ｅ Ｂ Ｅ Ｒ Ｉ Ｔ Ｉ Ａ Ｔ Ｚ Ｅ， ｅ ｔ ａ １ ．Ｉ ｎ ｖ ｉ ｖ ｏ
广东 医学
２ ０ １ ３年 １ ０月 第 ３ ４卷第 ｌ ９期
Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｄ ｏ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ Ｏ ｃ ｔ ．２ ０ １ ３， Ｖ ｏ １ ．３ ４， Ｎ ｏ ．１ ９
・
２９ ４１ ・
［ Ｊ ］ ．Ｉ ｎ ｔ Ｊ Ｄ ｅ ｖ Ｎ ｅ ｕ ｒ ｏ ｓ ｃ ｉ ， １ ９ ９ ３，１ １ （ ２ ）： ２ ３ ９— ２ ４ ７ ． ［ １ ２ ］ＭＥ Ｓ Ｓ Ｉ Ｎ Ｇ Ａ， Ｂ Ｒ Ｅ Ｎ Ｎ Ｅ Ｒ Ｍ． ＧＦ Ａ Ｐ ：ｆ ｕ ｎ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｉ ｍ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｇ ｌ ｅ ａ ｎ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ｓ ｔ ｕ ｄ ｉ ｅ ｓ ｏ ｆ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｌ ｙ ｅ ｎ ￣ ｎ ｅ ｅ ｒ ｅ ｄ ｍｉ ｃ ｅ［ Ｊ ］ ．Ｇ ｌ ｉ ａ ，
去除肺动脉组织块 即可见 到有一定数量的细胞生长 。
２ ０ １ ０年 １ 月至 ２ ０ １ ２年 １ ２月采用离体培养大 鼠肺成 纤
维细胞 ， 用Ｔ Ｓ Ｐ一 １处理后观察其对肺纤维细胞增殖 的
影响。 １ 材 料 与 方 法
细胞 纯 化 及 收 集 ： 小 心倒 掉 旧培 养 液 ， 用０ ． ０ １
２ ０ ０ ３，４：８ ７ —９ ０ ．
ｒ ｏ ｃ Ｎａ ｔ ｌ Ａｃ ａ ｄ Ｓ ｃ ｉ Ｕ Ｓ Ａ，１ ９ ９ ３ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｎ ｅ ｕ ｒ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ［ Ｊ ］ Ｐ
ຫໍສະໝຸດ Baidu
９ ０ （ ７ ） ： ３ ０ ４ —３ ２ ０ ２ ７ ．
细胞增 殖 ． 流式 细胞 术检 测细胞周期。结果
加， ４ ８ ｈ达 高峰 。 结 论
体
外培养 大鼠 Ｌ Ｆ ， 加入 不同浓度（ １ ０ 、 １ ０ 和１ ０ 。 ｍｏ ｌ ／ Ｌ ） Ｔ Ｓ Ｐ一１ 处理 １ ２ 、 ２ ４和 ４ ８ ｈ ， 采 用四唑盐 （ Ｍ Ｔ ｒ ） 法检 测 Ｔ Ｓ Ｐ一１刺激后 ， Ｍ ＭＴ法 实验 显示 Ｔ Ｓ Ｐ一１显著促进大 鼠 Ｌ Ｆ增殖 ， 此
低氧性肺动脉 高压 以肺血 管重建 为主要病 理生理
存 。５ ｍ ｇ ／ ｍ Ｌ ＭＴ Ｆ ： ０ ． ５ ｇ Ｍ Ｔ Ｔ ， 用 Ｐ Ｂ Ｓ 定 容至 １ ０ ０ ｍ Ｌ ， ０ ． ２ ｍ滤器过滤除菌 ， ４ ￣ Ｃ避光保存 。
改变 ， 而肺血 管重建 不仅表 现为肺 动脉平 滑肌细胞 的 增殖 和肌 型的转化 ， 肺血管 外 的成 纤维细 胞 的增 生亦 是导致肺血管重建发生发展 的一个 重要原 因…。成纤
作 用 呈 浓度 和 时 间依 赖 性 。Ｆ Ｃ Ｍ 分析显示 Ｔ Ｓ Ｐ一１处理 Ｌ Ｆ １ ２ ｈ后 ， Ｇ １期 比例 下 降 ， Ｇ ２＋Ｓ期 细 胞 比例 即 出 现 增 Ｔ Ｓ Ｐ—ｌ呈 浓 度 和 时 间依 赖 方 式促 进 大 鼠 Ｌ Ｆ增 殖 。
【 关键词 】 Ｔ Ｓ Ｐ一 １ ； 肺成纤维细胞 ； 细胞 增殖
维细胞 是组织 连接 细胞家族 中功 能最多 的一员 ， 具 有
１ ． ２ 大 鼠肺成 纤维细胞 培养
原 代分 离培 养 ： 取ｓ Ｄ
大 鼠新生 鼠（ ４ ｄ以内） ， 碘伏 常规 消毒 ， 打开胸腔 ， 取
多 向分化 、 高度增殖及 自我更新 能力 ， 多种因子都 能促 进成纤 维 细 胞 增 殖 及 分 化 ， 但凝血酶敏感 蛋 白