光温条件对三叶青愈伤生长及黄酮积累的影响

求 ，因此利 用组织 培养 生产 次生代 谢物 是解决 供需
矛盾 的可行 途径之 一 。 目前对三叶青黄酮 的研究集 中在药理作用上 ，对
将 三叶青 叶 片来 源 愈 伤 组织 接 种 在 ＭＳ＋ ６ － Ｂ Ａ ２ ． ０ ｍ ｇ・ Ｌ ＋ Ｎ Ａ Ａ ０ ． ２ ｍｇ・ Ｌ 培养 基 中 ，每个 处 理５ ． 瓶 ，每瓶 接 种 ７个 愈 伤块 ，培养 温度 为 （ ２ ７． － － Ｉ １ ）℃ ，分 别进 行 ２ ４ ｈ・ ｄ 和 １ ２ ｈ・ ｄ 光照 及 暗 培养 ３ ０ ｄ后 ，测 定 各 处 理 愈 伤 组 织 中 总 黄 酮 的
皿 圆
澎 江 右 种 学 ２ ０ １ ３ 年 第 ９ 期
பைடு நூலகம்
文 献 著 录格 式 ：钱 丽 华 ，毛 碧 增 ．光 温 条 件 对 三 叶青 愈伤 生 长 及 黄 酮 积 累 的 影 响 ［ Ｊ ］ ． 浙 江农 业 科学 ，２ ０ １ ３（ ９ ） ：１ ０ ９ ８—１ １ ０ ０
光 温条 件 对 三 叶青 愈伤 生 长 及 黄 酮积 累 的影 响
钱 丽 华 ，毛 碧 增
（ １ ．浙 江 大 学 ，浙 江 杭 州 ３ １ ０ ０ ５ ８ ； ２ ．杭 州 市 农 业科 学研 究 院 ，浙 江 杭 州 ３ １ ０ ０ ２ ４ ）
摘
要 ：以 三 叶 青 叶 片诱 导 的 愈 伤 组织 为 试 材 ，接 种 继 代 增 殖 ，进 行 不 同 温 度 和 光 周 期 培 养 试 验 。结 果 表
含量 。 １ ． ３ 总 黄 酮 测 定
愈伤组织 的研究集 中在诱导分化上 ，对光 照和温度条 件的研究还较少 。本研 究 旨在探索温 度、光周期 等培养条件对三叶青愈伤生长及次生代谢 物形成积 累 的影响 ，为规模化生产三叶青黄酮提供参考。
ｌ 材 料 与 方 法
１ ． １ 材 料 、 试 剂 及 仪 器
三 叶青是 中 国特 有珍 稀 中药植 物 ，又名 三 叶崖
１ ． ２ 处 理 设 计
１ ． ２ ． １ 温度试验
爬藤 、金 线 吊葫 芦 、蛇 附子等 ，含有 黄酮 、多糖 等 生 物活性 成分 ，对 多种癌 症细胞 株 系具有促 进 细胞 凋 亡 的作 用 ，且 对ｄ ， Ｊ Ｌ 高 热 、支气管 炎 、病 毒性 脑
光 周 期 ，总 黄 酮 含 量 达 到 ２ ０ ． ２ ３ ｍ ｇ・ ｇ ～。
关 键词 ：愈 伤 组 织 ； 继代 ； 温度 ； 光 周 期 ；鲜 重增 长 率 ； 总 黄 酮
中 图分 类号 ：Ｓ ５ ６ ７ 文 献标 志 码 ：Ａ 文章 编 号 ：０ ５ ２ ８ — ９ ０ １ ７ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ９ — １ ０ ９ ８ — ０ ２
明 ，三 叶 青 愈 伤 组 织 的 最 适 培 养 温 度 为 ２ ８℃ ，其 愈 伤 平 均 鲜 重 增 长 率 达 到 ３ ９ ４ ． ２ ０ ％ ，显 著 高 于 其 他 各 处 理 ；而 ３ ４℃ 下 愈 伤 组 织 全 部 死 亡 。 光 照 能诱 导 三 叶青 愈 伤 组 织 中黄 酮 类 化 合 物 的 形 成 和 积 累 ，２ ４ ｈ・ ｄ 光 照 为 其 适 宜
外植 体试验 材料 采 自建德 市 ，取 其 叶片为外 植 体诱 导愈 伤组 织 ，并 以此 为试 验材料 。
培养 基采 用 ＭＳ基本 培养基 ，芦 丁标 准 品 （ 德
国Ｄ ｒ ．Ｅ ｈ ｒ ｅ ｎ ｓ ｔ ｏ ｒ ｆ ｅ ｒ Ｇ ｍ ｂ Ｈ） ，微 波 萃 取 仪 （ 美 国
Ｃ Ｅ Ｍ 公 司生产 ） ，ｕ Ｖ 一 ２ ５ ５ ０紫外 分 光 光度 计 。无 水 乙醇 （ 国药 集 团 化 学 试 剂 有 限公 司 ） ，亚 硝 酸 钠 （ 天津博 迪化 工 股 份 有 限 公 司 ） ，硝 酸 铝 （ 上 海 山 浦 化 工有 限公 司 ） ，Ｎ ａ Ｏ Ｈ （ 杭 州 化 工 试 剂 有 限公 司） ，以上均 为分 析纯 。
膜 炎 、血 液病 、心 脑血管 疾病 、抗艾 滋病 毒和抗 肿 瘤 治疗 方 面 具 有 疗 效 ，被 称 为 安 全 无 毒 的 “ 植 物 青霉素” 。 目前 因 过 度 采 挖 其 野 生 资 源 已 濒 临 灭
将 三叶青 叶片来 源 愈 伤组 织 接 种 在 ・ ＭＳ＋ ６ 一 Ｂ Ａ ２ ． ０ ｍ ｇ・ Ｌ ＋Ｎ Ａ Ａ ０ ． ２ ｍ ｇ・ Ｌ‘ 。 中 ，每 处 理 ８瓶 ， 每 瓶接 ５个 。称 取 愈伤 块 原 始 质 量 ，分别 放 置 在 ２ ３℃ ，２ ５℃ ，２ ８℃ ，３ ０℃ ，３ ４℃ 的光 照 培养 箱中１ ２ ｈ・ｄ 培养 ３ ０ ｄ后 ，再 称 取 愈 伤 块 质 量
洗去 愈伤组 织 表面琼 脂 ，吸干 表面水 分 ，置于 电热 干燥 箱 中 于 １ ０ ５℃ 下 干 燥 ０ ． ５ ｈ ，使 酶 失 活 ； 然后 ６ ０℃干燥 后 ，用研 钵磨 细 ，继 续干燥 至 恒重 。 测定 方 法参 照文献 ［ ６ ］（ 经改 良） 。 对照品溶 液。精密称取 １ ２ ０℃干燥 至恒重的芦丁 标准品 ２ ． ３ ９ ４ ５ ｍ ｇ于 ２ ５ ｍ Ｌ容量瓶中 ，加适量 ５ ０ ％ 乙 醇超声溶解 ，放冷 ，用 ５ ０ ％ 乙醇定 容至 ２ ５ ｍ Ｌ ，即为 对 照品溶液 （ 芦丁浓度为 ０ ． ０ ９ ５ ７ ８ ｍ ｇ・ ｍ Ｌ ） 。
，
绝 。虽 三 叶青 组培 快 繁 和扦 插 技 术 均 已得 到解 决 ，
但 其块 根形 成 周 期 长 ，产 量 低 ，无 法 满 足 市 场 需
计算 ３ ０ ｄ内愈伤 鲜 重增 长 率 。愈 伤鲜 重 增 长
率／ ％ ＝ （ 一 ）／ Ｗｏ ×１ ０ ０ 。
１ ． ２ ． ２ 光周期 试验