遗传学实验整理讲解

实验02、有丝分裂染色体制片及观察原理2 步骤1 注意1

二、实验原理 2

有丝分裂是一个连续过程，可分为分裂间期和分裂期，分裂期又分为前期、中期、后期、末期。

植物细胞有丝分裂主要在根尖、茎间、芽的生长点、幼叶叶缘及茎间形成层等分生组织，将生长旺盛的植物分生组织经过取材、固定、解离、染色、压片等处理，就可以观察到植物细胞的有丝分裂现象。

由于植物根尖容易取材、操作方便，经常被用来进行植物细胞有丝分裂过程的观察：

①根尖取材容易，操作和鉴定也比其它器官与组织方便；

②实验室内采用种子萌发后所长出的新鲜幼嫩根尖，不受植物生长季节的影响和限制，并且可以大量获得；

③对于某些珍贵而又稀少的试验材料，取用自然条件下生长植株的根尖，比取用茎尖、花器等对材料的伤害要小得多；

④采用实验室内种子发根，切取根尖后的种苗通常还可以进行正常种植，利于后续研究进行。

五、实验方法1

1.发根：①水培法②砂培法

取材：上午10:00～11:00；下午4:00～5:00

2.预处理：将剪下的根尖立即放入0.1％秋水仙碱水溶液中，以药液浸没根尖为度，处理3～4h。抑制和破坏纺锤丝的形成，使根尖细胞延迟其染色体的分离，增加中期分裂相，并使染色体分散于细胞中，以便观察计数。

3.固定

材料经预处理后用流水冲洗，然后投入卡诺液(3份甲醇:1份冰乙酸，现配现用)中固定20～24h，用95％的乙醇洗两次，转入70％乙醇中保存备用。

固定的目的是将材料迅速杀死，并使染色体形态、结构尽可能保持不变和便于染色。

4. 解离

常用酸解法：从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗3min→吸水纸吸干→放入盛有适量1mol/L HCl，60±0.5℃水浴保温的青霉素瓶中→解离10min。

5.染色与压片（改良石炭酸品红染色）：

解离后材料水洗3min并吸干，取1/2个根尖的乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加1～2滴染液，染色10～15min，将滤纸放在盖玻片上，用拇指用力压盖玻片，再用手固定住盖玻片，同时用铅笔的橡皮头在材料部位垂直轻敲几下，使材料分散均匀。

6.镜检

通常染色清晰而又分散得很好的分裂相只是少数，因此压片后要认真仔细地进行镜检。先在低倍镜下寻找有分裂相的视野，再用高倍镜仔细观察、记数或拍照。调节可变光栏与反光镜，使光线明暗合适，视场亮度适中。

注意观察有丝分裂全过程的染色体形态变化，找出染色体分散好的中期细胞进行染色体计数，对好的分裂图像作上标记，以便再观察。

七、注意事项 1

1.酒精和解离液都要清洗干净，并认真吸干，否则影响染色效果。

2.染色时间10分钟是个参考时间，应以实际染色效果判断，不太长也不能太短。

3.镊子敲打时，应用力均匀，开始不要太重，避免细胞挤压在一起。用力太轻不易使细胞处于同一平面, 故应适当控制敲打力度。

实验03、减数分裂染色体制片及观察

二、实验原理 2

减数分裂是发生在配子形成过程中一种特殊形式的有丝分裂，分裂过程中染色体结构呈周期性变化，并在特定时期呈现稳定的形态特征，是进行染色体形态、结构与数目鉴定的有利时期。

减数分裂包含两次连续的有丝分裂——第一次减数分裂（Ⅰ）和第二次减数分裂（Ⅱ）。每次分裂都可分为紧密衔接的前、中、后、末四个时期。前期Ⅰ变化最为复杂，分为细线期、偶线期、粗线期、双线期和终变期。通过减数分裂所形成的细胞(或雌、雄配子), 其染色体数目只有体细胞的一半。

减数分裂过程中染色体出现同源配对、非姊妹染色单体片段交换、同源染色体相互分离等一系列独特行为，为远缘杂种的分析及三大遗传定律的论证等遗传研究提供了证据。

减数分裂细胞染色体制片多以高等动、植物雄性个体为材料。在适当的时机采集动物精巢或植物花蕾(花序)，经适当技术处理，压片就可在显微镜下观察到减数分裂过程。

五、实验方法 1

蝗虫精巢减数分裂装片

（1）取材：剪去翅膀，在翅基部后方的背端，仔细剪开体壁，可见上方两侧（第4～7背板之间）各有一团黄色团状块（精巢）。

（2）固定：卡诺氏固定液固定2～4小时，经95%酒精洗2～3次后，转入70%酒精保存。

（3）染色：夹取一小枚管状精巢，放置于载玻片上，滴加适量醋酸洋红（或改良品红液）染色10～20min。

（4）压片：用解剖针挑取少量材料（一条精小管）到一张新载片上，加1滴新鲜染料或45%醋酸，拔碎，加盖玻片，复吸水纸压片。

（5）镜检。

减数分裂染色体装片的注意事项2

实验04、人工诱发多倍体植物的鉴定

二、基本原理 1

秋水仙素是诱导多倍体形成最为有效和常用的药品之一。在适宜浓度的秋水仙素的作用下，它既可以有效地阻止纺锤体的形成，又不至于对细胞发生较大的毒害。因此，当细胞继续分裂后，可以使细胞的染色体数加倍。如果用秋水仙素处理植物的根尖，则在根尖分生区内可检测到大量染色体加倍的细胞；若处理植物幼苗的芽，则可以得到染色体加倍的植株。

四、操作步骤

1.生根：将搪瓷盘的盘口用线绳编织成许多网格，在盘内注人清水。把洋葱的鳞茎洗干净，用刀片将鳞茎上的老根削除，再把其放在搪瓷盘的网格上，使其生根部位恰好接触到水面，在25℃下培养几日至根尖长1.5-2cm。

2.秋水仙素处理：将搪瓷盘内的清水换成0.1％的秋水仙素水溶液，培养36-48小时，当根尖明显膨大时，将根尖取下，长度大约在1.5cm 左右，放入固定液中固定24h。于70％乙醇中保存。

3．酸解：从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲洗３min→吸水纸吸干→放入盛有适量1mol/L HCl，60℃水浴保温的青霉素瓶中→解离10min。

4．染色：解离后材料水洗3min并吸干，挑取1/2个根尖的乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴加1～2滴染液，染色10～15min，压片。

5．压片：在经染色的材料上加一滴染液，盖上盖玻片，覆一层吸水纸，用带橡皮头的铅笔垂直敲打，或以拇指垂直紧压盖片(注意勿使盖片搓动)，使材料分散压平，便于观察。

6．镜检：经显微镜观察，找到染色体分散良好，染色体形态清楚的4n=32 的细胞。