植物组织培养重点粗略整理

题型：填空15分选择20分判断10分名词解释20分简答35分附加题未知

一般培养基不含哪种维生素：培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。

培养基部分

名称解释：

微室悬滴培养：利用表面张力将细胞培养液置于一张盖玻片表面制成悬滴，将组织或器官外植块接种培养液中，然后翻转盖玻片使外植块及培养液悬挂在盖玻片下，再置放于一凹形载片之上，最后用熔蜡密封盖玻片四周后放入培养箱中培养的技术。

外植体

由活植物体上切取下来的可以用于组织培养的组织或器官。外植体是指植物离体培养中的各种接种材料。包括植物体的各个器官、组织、细胞和原生质体等。

愈伤组织

在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞（细胞排列疏松、无规则）。

体细胞胚（体胚）

体胚-离体培养下没有经过受精过程，但经历了胚胎发育过程所形成的胚的类似物，统称为体细胞胚或胚状体。

体胚还可以从花药或花粉培养、离体器官培养、单细胞悬浮培养中产生。

体胚来源于根、茎、叶和它们的组织和细胞，经离体培养而发生的类胚结构，染色体组为两套，可发育成为正常植物体。

胚性感受态

植物组织或器官对外界环境条件所存在的特殊反应状态。

脱分化再分化

脱分化：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程，又称去分化。

再分化：脱分化产生的愈伤组织在培养过程中重新分化根或芽等器官的过程。

指示植物

对病毒反映敏感，症状特征显著的植物

指示植物法

将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。即指示植物法。特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只能测出病毒的相对感染力。

试管内生根

试管(瓶)内诱导茎芽生根形成小苗时期

试管外生根

瓶外生根技术把生根诱导与驯化培养有机地结合起来，有效缩短育苗周期，节约生产成本，提高了移栽成活率，是一项值得应用与推广的技术。

植物离体保存

将离体培养的植物细胞、组织、器官或试管苗，保存于人工环境下，一般需要在低温或超低温条件下进行，以抑制其生长，达到长期保存的目的。

植物&种质保存

种质保存:在适宜的环境条件下，贮存植物种质，使其保持生命力与遗传性的技术。一般有两种方式，即就地保存与迁地保存。

植物种质资源低温保存意义:防止资源灭绝、节约人力物力、便于交流

填空：

培养基灭菌方法:高温高压蒸汽灭菌、过滤灭菌

不耐热的灭菌：过滤灭菌

获取原生质体的方法：酶解法、机械法

愈伤组织类型（两种）：紧密型、紧密型

简答题：

体细胞杂交诱导融合方法：NaNO3法、高pH-高Ca2+离子法、PEG法、电融合法

NaNO3：中和质膜的负电荷，使原生质体不再相互排斥，而紧密结合在一起不足：诱导频率不高。

高pH-高Ca2+离子法：优点：杂种产量高。不足：高pH值对细胞有毒害作用；

PEG法：融合频率高、可重复性强、诱发融合无特异性、毒性较低

芽的增殖途径：

（一）通过愈伤组织

利用植物细胞在培养中无限增殖的可能性以及它们的全能性，可以对若干种植物类型进行快速繁殖。由这些植物的器官或组织诱导形成的愈伤组织，通过器官发生或体细胞胚胎发生都可以分化出植株。在能够适用的情况下，这常常是进行植物繁殖的最快的方法，因而也是克隆植物物种的一种潜在的方法。

这种方法的缺点

（1）细胞在遗传上的不稳定性。例如，当通过细胞和愈伤组织培养繁殖石刁柏时，所得到的植株表现多倍性和非整倍性，而由茎芽培养所得到的植株都是二倍体的。

（2）随着继代保存时间的增加，愈伤组织最初表现的植株再生能力可能逐渐下降，最后甚至完全丧失。对于某些重要的物种如柑橘、咖啡、小苍兰和棕榈来说，这是目前进行离体营养繁殖的惟一方法。

（二）不定芽形成

凡是在叶腋或茎尖以外任何其他地方所形成的芽统称为不定芽。

产生不定芽的器官：

根（福禄考属植物、苹果的某些无性系、悬钩子属植物）、鳞茎（风信子—基部受伤以后）

叶（秋海棠、天竺葵等）

通过培养基中适当配比激素的影响，就是那些在正常情况下不能进行营养繁殖的植物，如芸苔属植物、除虫菊、亚麻以及番茄等，也能由叶段和茎段上长出不定芽来。

1.优良的愈伤组织的特性（1.

2.

3.4）

愈伤组织的特点：生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或白色，有光泽；也有浅绿色或绿色；而老化的愈伤组织多转变为黄色甚至褐色。

优良的愈伤组织特性：

•高度的胚性或再分化能力，易于得到再生植株

•容易散碎，易建立优良的悬浮系

•旺盛的自我增值能力，建立大规模的愈伤组织无性系

•不易丧失胚性，以便有可能对它们进行各种遗传操作

2.植物离体培养会出现的问题及解决方法？？？化现象的克制（试管玻璃化？）

（1）污染的原因及其预防措施:

1）污染：植物组织培养过程中培养基和培养材料滋生杂菌，导致培养失败的现象。

2）污染的原因：一是病原菌污染（细菌、真菌）；二是外植体、培养基、培养器皿带菌；三是

操作人员未遵守操作规程

3）预防措施：防止材料带菌；防止用具带菌；操作室要处于无菌状态；操作人员要按照操作程序进行

（2）外植体的褐变及其防止措施

1）褐变是指外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激后活，使细胞内的酚类物质氧化成棕褐色醌类物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散致使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其他酶的活性，严重影响外植体的脱分化和器官分化，最后变褐而死亡的现象。

2）影响褐变的因素：

A.植物种类：一般木本植物，单宁、色素含量高的植物易发生褐变。

B.基因型

C.外植体的生理状态：一般幼龄材料，幼嫩器官和组织，春季取外植体，褐变发生较轻。

D.培养基的成分：培养基中6－BA或KT能促进褐变发生，而生长素类如IAA可减轻褐变发

生。

E.材料转移时间

3）预防措施：

a、选择适宜的外植体及最佳培养基：适当降低培养基无机盐浓度，降低PH值，降低细胞分

裂素水平等，可显著减轻培养物褐变；

b、连续转移

c、加抗氧化剂:如硫代硫酸钠、抗坏血酸

d、加活性碳

e、加多胺类物质，如精胺、亚精胺

（3）试管苗的玻璃化

1）植物组培玻璃化苗的叶和嫩梢呈水晶透明或半透明水渍状；整株矮化肿胀、失绿；叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎；叶表缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具栅栏组织，仅有海绵组织。玻璃化苗中因其体内含水量高，干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和酶活性降低，组织畸形，器官功能不全，分化能力降低，所以很难成活，严重影响组培苗繁殖率的提高。

2）预防措施

1、适当控制培养基中无机盐浓度

2、适当控制培养基中蔗糖和琼脂浓度

3、适当降低细胞分裂素和赤霉素浓度

4、增加自然光照，控制光照时间

5、控制好温度

6、改善培养皿的气体交换状况

7、在培养基中添加其他物质

3.影响体细胞胚胎的因子

一、外植体：产生部位，生理状态，基因型

胚性感受态（embryogenic competence):体胚发生的相对容易程度

幼胚、成熟胚、幼苗和成花结构中的非分生组织细胞的胚性感受态通常较高

从营养器官诱导出体胚的木本植物以胚或幼苗作为外植体的居多

不同品系的植物在体细胞胚培养中激素的选择与搭配以及浓度的选择，培养条件等部分具有很

大差异，这与不同植物千差万别的基因型有关。

二、植物生理状态的影响：

植物的每个细胞均有成胚的潜力，但成胚频率最高的是那些具有较高胚性感受能力