金线莲组织培养增殖培养基的筛选

高、芽茎及生根情况。40 d后观察并记录试验结果。
1. 3 培养条件 光照时间 12 h / d,光照强度 1 200 lx,温度
(25 ±2 ) ℃, pH值 5. 8。
2 结果与分析
2. 1 不同激素浓度对茎段生长的影响 无菌外植体的茎节
段和顶芽接种到不同激素及配比培养基中 , 40 d后观察到的
金线莲 (A noectochilus roxburghit)又叫花叶开唇兰 ,是兰 科开唇兰属多年生草本植物 。在我国主要分布于广西 、福 建、台湾、浙江、江西、云南、贵州等地 [1] 。金线莲生长于海拔 300～1 200 m的山地林下阴湿处 ,生态环境条件独特 ,自然 繁殖率低 ,生长缓慢 ,加上人为的大量采挖及自然环境的严 重破坏 ,使得其野生资源日渐枯竭 [2] 。金线莲有着很高的药 用价值 ,对膀胱炎、糖尿病、血尿、风湿性关节炎、肿瘤等疑难 病症有着很好的疗效 ,素有“药王 ”、“金草 ”、“神药 ”、“乌人
Rootage Multip lication Growth status coefficient status
株高 ∥cm Plant height increment
20
6
根长 0. 30
粗
2. 6
8
25
6
有根 0. 24
粗
3. 0
9
25
8
有根 0. 32
粗
2. 5
10
25
0ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
有根 0
粗
2. 5
11
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·1476·
安徽农业科学 2009年
1. 0
100. 0
1. 0
作者简介 刘伟 (1977 - ) ,男 ,湖南祁东人 ,硕士 ,讲师 ,从事植物资源育 种及开发利用的研究 。
收稿日期 2008211220
1 材料与方法 1. 1 试验材料 试验材料用文山师范高等专科学校组培室 培养出来的组培苗 ,取其带节茎段和顶芽作为外植体。
ca tion
培养 基号 No.
接种数 新增株数
Inoculation quantity
N ew ly added p lants
生根状况 Rootage status
增殖系数 生长状况 株高 ∥cm Multip lication Growth Plant height
coefficient status increment
1 cm高 ,其他 4个组合的增殖系数分别是 1. 9、1. 6、1. 6、1. 5。
试验表明 ,芽体的增殖与 BA、NAA 浓度有密切关系 ,一定量
的 BA、NAA对茎段和顶芽有促进分化和增殖的作用。
表 2 不同激素浓度对增殖的影响 Table 2 The effect of d ifferen t horm one concen tra tion s on the m ultipli2
1. 2 试验方法 在基本培养基上添加不同浓度的细胞分裂 素、生长素和添加物 ,共 20个处理 (表 1) ,所有的培养基中琼
脂粉的浓度为 7 g/L,糖的浓度为 25 g/L。从无菌苗上切取带
1～2个节的茎段和顶芽接种于各种不同的培养基上 ,每个处
理接种 5瓶 ,每瓶 5个材料 ,记录每个外植体生长的芽数、芽
25
8
有根 0. 32
较粗
2. 3
12
25
8
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri. Sci. 2009, 37 (4) : 1475 - 1476
责任编辑 王淼 责任校对 刘祖尚
金线莲组织培养增殖培养基的筛选
刘 伟 王牛柱 ,
(文山师范高等专科学校生化系 ,云南文山 663000)
摘要 [目的 ] 筛选最佳的金线莲增殖培养基。 [方法 ]以金线莲组培苗的茎段和顶芽为外植体进行增殖培养 ,在光照时间 12 h / d,光照 强度 1 200 lx,温度 (25 ±2 ) ℃, pH值为 5. 8 培养条件下比较不同基本培养基、细胞分裂素、生长素、添加物等因素对金线莲生长状况的 影响。[结果 ] 通过对不同培养基的培养效果进行对比分析后筛选出适宜的培养基分别是 :生芽增殖最佳配方为 MS +琼脂 7g/L +蔗糖 25 g/L +NAA 0. 2 mg/L + 62BA 2 mg/L;壮苗培养基为 MS +琼脂 7 g/L +蔗糖 25 g/L +蛋白胨 2 g/L +花宝 1号 3 g/L +香蕉 100 g/L + 活性炭 1 g/L和 1 /2 MS +琼脂 7 g/L +蔗糖 25 g/L +蛋白胨 2 g/L +香蕉 100 g/L +活性炭 1 g/L。 [结论 ] 添加马铃薯、香蕉、蛋白胨、 花宝一号 、活性炭等添加物能显著地促进金线莲外植体的分化与生长 。 关键词 金线莲 ; 组织培养 ;培养基筛选 中图分类号 S722. 3 + 7 文献标识码 A 文章编号 0517 - 6611 (2009) 04 - 01475 - 02
见表 3。
表 3 不同添加物对幼苗生长的影响
Table 3 The effect of d ifferen t add itive on the growth of seedlings
培养 基号 No.
7
接种数 新增株数生根状况 增殖系数 生长状况
Inoculation quantity
N ew ly added p lants
基本培养基 Basic culture medi2 um MS MS MS
MS MS MS
6 - BA m g /L
0. 5 1. 0 2. 0 0. 5 0. 5 0. 5
NAA m g /L
0. 2 0. 2 0. 2 0. 1 0. 2 0. 5
蛋白胨 ∥g/L 花宝 1号 ∥g/L 马铃薯 ∥g/L
Screen ing on M ultiplica tion M ed ium of T issue Culture for A noectochus roxbu rgh ih L IU W e i et a l (B iochem istry Department,W enshan Teachers College, W enshan, Yunnan 663000) Abstract [ Objective ] The study aimed to screen the op timum multip lication medium of tissue culture for Anoectochus roxburgh ih. [Method ] The stem segment and term inal bud of the tissue culture seedlings of A. roxburghih were taken as the exp lant for multip lication culture to com2 pare the effects of factors such as different basic culture medium , cytokinin, growth hormone, supp lement matter on the growth of A. rox2 burgh ih under the culture conditions as light time of 12 h / d, light intensity of 1 200 lx and temperature of ( 25 ±2 ) ℃ and pH of 5. 8. [ Re2 sult] After the comparative analysis on the culture effect of different media, the screened op timum media were as follows: the op timum formula for budding multiplication was MS + agar 7 g/L + sucrose 25 g/L + NAA 0. 2 mg/L + 62BA 2 mg/L; the strong sp rout media were MS + agar 7 g/L + sucrose 25 g/L + p rotein pep tone 2 g/L + Huabao No. 1 3 g/L + banana 100 g/L + activated charcoal 1 g /L and 1 /2MS + agar
参 ”等美称 [3 - 4] 。近年来市场需求量猛增 ,需求量远远大于 供应量 ,据调查金线莲鲜草达 60～80元 / kg,干草达 1 500～ 2 000元 / kg[5] 。利用组培技术快速繁殖种苗 ,对金线莲的开 发利用和野生资源保护具有很高的经济价值和现实意义 ,但 是金线莲在组培过程中存在瓶苗弱小 、增殖速度过慢的缺 点 ,为了加快组织培养的速度 ,扩大组培苗产量 ,降低生产成 本 ,笔者从影响组培苗增殖的多个方面进行对比 ,以期筛选 出最优的金线莲增殖培养基 。
Pep tone Hyponex No. 1
Potato
MS
1. 0
MS
2. 0
MS 1 /2 MS
5. 0
2. 0
1. 0
1 /2 MS 1 /2 MS
2. 0
3. 0
2. 0
5. 0
1 /2 MS 1 /2 MS 1 /2 MS 1 /2 MS 1 /2 MS 1 /2 MS MS 1 /2 MS
7 g/L + sucrose 25 g/L + p rotein pep tone 2 g /L + banana 100 g/L + activated charcoal 1 g/L. [ Conclusion ] The supp lement matter such as
potato, banana, p rotein pep tone, Huabao No. 1 and activated charcoal could imp rove the differentiation and growth of A. roxburghih exp lant. Key words Anoectochus roxburghih; Tissue culture; Medium screening
2. 0
1. 0 100. 0
2. 0
1. 0
2. 0
1. 0 50. 0
2. 0
1. 0
2. 0
1. 0
2. 0
1. 0
2. 0
2. 0
香蕉 ∥g/L 活性炭 ∥g/L Banana Active carbon
100. 0
50. 0
100. 0
1. 0
100. 0
2. 0
100. 0
5. 0
100. 0
培养基号 No.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
表 1 金线莲增殖培养的培养基
Table 1 Culture m ed ium used in the m ultiplica tion culture of A noectochus roxbu rgh ih
现象见表 2。
通过平时的观察可知 , 7 d后在节间上均有白色细丝状
气生根长出 , 14 d后开始有芽长出 , 21 d后有叶长出 , 28 d顶
芽开始从基部长出芽体。40 d后 3号培养基增殖效果最佳 ,
培养苗生长粗大 ,长出的芽体有 2 cm 多高 ,增殖系数为 2. 2;
其次是 1和 2号 ,生长粗壮 ,增殖系数为 2. 0,但是芽体只有
1
25
26
无根
1. 04 较细
1. 5
2
20
26
无根
1. 30 粗
1. 0
3
25
60
气生根
2. 40 粗
2. 0
4
20
24
气生根
1. 20 较粗
2. 5
5
20
24
气生根
1. 20 细
1. 6
6
20
22
气生根
1. 20 细
2. 1
2. 2 不同添加物对茎段培养的影响 将无菌外植体的茎节
段和顶芽接种到只加有添加物的培养基中 , 40 d后得到结果