走进分子生物学实验室
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有些塑料用具只能在 42-45℃的烤箱中进行 烘干；用于RNA方面 的实验用具，需要在 250℃烤箱中烘干。
高压蒸汽灭菌锅/箱
主要用于能耐高温 的物品，如培养基、 金属器械、玻璃、 搪瓷、敷料、橡胶 及一些药物的灭菌。
压力升至103.4kPa， 温度达121.3℃，维 持15~20分钟，可达 到灭菌目的。
-80℃适合某些长期低温保 存的样品、大肠杆菌菌种、 纯化的样品、特殊的低温 处理感受态等的保存。
0-10℃的层析冷柜适合低温 条件下的电泳、层析、透 析等实验。
摇床
分为恒温式和常 温式
用于大肠杆菌， 酵母菌等生物工 程菌种的振荡培 养及蛋白的诱导 表达，培养通常 为37℃和28℃
烘箱Leabharlann Baidu
用于灭菌和洗涤后的物 品烘干
个温控设备，能在变性温度，复性温 度，延伸温度之间很好地进行控制。
优点
• 特异性强 • 灵敏度高 • 简便、快速 • 纯度要求低
PCR仪类型
• 普通和梯度PCR仪 • 荧光定量PCR仪 • 原位PCR仪
PCR反应体系
10×扩增缓冲液 4种dNTP混合物（终 浓度）
引物（终浓度）
模板DNA Taq DNA聚合酶
常见问题
• 假阴性 • 阴性 • 假阳性 • 非特异性扩增带 • 片状拖带和涂抹带
That’s all
磁力搅拌器
在配置试剂过程 中，有些试剂较 难溶解，这时需 要借助磁力搅拌 器。磁力搅拌器 可以加速溶解固 体内容物。磁力 搅拌器一般带加 热功能。
电炉和微波炉
生物安全柜和超净工作台
PCR仪、PCR反应及结果检测
聚合酶链式反应
• 高温变性 • 低温退火 • 中温延伸 • 基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一
结果检测
• 荧光素（溴化乙锭，EB）染色凝 胶电泳
• 荧光探针
凝胶电泳
• 琼脂糖凝胶电泳（水平） • 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）（垂直） • 蛋白质的凝胶电泳（SDS-PAGE）
凝胶制备和电泳过程
• 制作胶模 • 融化琼脂糖，冷却后加入EB • 倒模，加入TEB缓冲液 • 加样 • 电泳（电压1-5V/cm） • 成像观察
少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。 • ③引物内部不应出现互补序列。 • ④两个引物之间不应存在互补序列 • ⑤引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超
过70% • ⑥引物3’端应严格要求配对，引物的5’端可以
修饰。
循环数
• 一般为25 ～ 30次。循环数决定PCR扩 增的产量。一般循环数为30个左右， 循环数超过30个以后，DNA聚合酶活 性逐渐达到饱和，产物的量不再随循 环数的增加而增加。
电子天平
按照最大称量的不同分为超 微量（2-5g），微量（350g），半微量（20-100g） 等规格
使用前需要检查是否水平
称量时需要称量纸，决不允 许直接称量 称量腐蚀性和吸湿性物质时 需要用烧杯称量
pH计
玻璃电极平常不用时 应浸泡在蒸馏水中。
甘汞电极在初次使用 前，应浸泡在饱和氯 化钾溶液内，不要与 玻璃电极同泡在蒸馏 水中。不使用时也浸 泡在饱和氯化钾溶液 中。
走进分子生物学实验室
——分子生物学实验室常用设备和 仪器介绍
孙文 宋田源
培养箱
常用培养箱一般为隔水 式恒温培养箱
细菌——37℃ 霉菌——28℃
使用时注意培养箱的水 位，水位过低会引起温 度变化幅度加大，不能 控温
冰箱
4℃适合储存某些溶液、试 剂、药品等。
-20℃适用于酶、血清、配 好的抗生素和DNA、蛋白 质样品等。
10μl
各100～ 250μmol/L 各5～ 20μmol/L
0.1～2μg
5～10 U
Mg2+（终浓度） 补加双蒸水
1～3mmol/L 100 μl
参加PCR反应的物质
• 引物 • DNA聚合酶 • dNTP • 模板链 • 缓冲体系
引物设计原则
• ①引物长度：15-30bp • ②引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太
高压蒸汽灭菌锅/箱
主要用于能耐高温 的物品，如培养基、 金属器械、玻璃、 搪瓷、敷料、橡胶 及一些药物的灭菌。
压力升至103.4kPa， 温度达121.3℃，维 持15~20分钟，可达 到灭菌目的。
-80℃适合某些长期低温保 存的样品、大肠杆菌菌种、 纯化的样品、特殊的低温 处理感受态等的保存。
0-10℃的层析冷柜适合低温 条件下的电泳、层析、透 析等实验。
摇床
分为恒温式和常 温式
用于大肠杆菌， 酵母菌等生物工 程菌种的振荡培 养及蛋白的诱导 表达，培养通常 为37℃和28℃
烘箱Leabharlann Baidu
用于灭菌和洗涤后的物 品烘干
个温控设备，能在变性温度，复性温 度，延伸温度之间很好地进行控制。
优点
• 特异性强 • 灵敏度高 • 简便、快速 • 纯度要求低
PCR仪类型
• 普通和梯度PCR仪 • 荧光定量PCR仪 • 原位PCR仪
PCR反应体系
10×扩增缓冲液 4种dNTP混合物（终 浓度）
引物（终浓度）
模板DNA Taq DNA聚合酶
常见问题
• 假阴性 • 阴性 • 假阳性 • 非特异性扩增带 • 片状拖带和涂抹带
That’s all
磁力搅拌器
在配置试剂过程 中，有些试剂较 难溶解，这时需 要借助磁力搅拌 器。磁力搅拌器 可以加速溶解固 体内容物。磁力 搅拌器一般带加 热功能。
电炉和微波炉
生物安全柜和超净工作台
PCR仪、PCR反应及结果检测
聚合酶链式反应
• 高温变性 • 低温退火 • 中温延伸 • 基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一
结果检测
• 荧光素（溴化乙锭，EB）染色凝 胶电泳
• 荧光探针
凝胶电泳
• 琼脂糖凝胶电泳（水平） • 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）（垂直） • 蛋白质的凝胶电泳（SDS-PAGE）
凝胶制备和电泳过程
• 制作胶模 • 融化琼脂糖，冷却后加入EB • 倒模，加入TEB缓冲液 • 加样 • 电泳（电压1-5V/cm） • 成像观察
少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。 • ③引物内部不应出现互补序列。 • ④两个引物之间不应存在互补序列 • ⑤引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超
过70% • ⑥引物3’端应严格要求配对，引物的5’端可以
修饰。
循环数
• 一般为25 ～ 30次。循环数决定PCR扩 增的产量。一般循环数为30个左右， 循环数超过30个以后，DNA聚合酶活 性逐渐达到饱和，产物的量不再随循 环数的增加而增加。
电子天平
按照最大称量的不同分为超 微量（2-5g），微量（350g），半微量（20-100g） 等规格
使用前需要检查是否水平
称量时需要称量纸，决不允 许直接称量 称量腐蚀性和吸湿性物质时 需要用烧杯称量
pH计
玻璃电极平常不用时 应浸泡在蒸馏水中。
甘汞电极在初次使用 前，应浸泡在饱和氯 化钾溶液内，不要与 玻璃电极同泡在蒸馏 水中。不使用时也浸 泡在饱和氯化钾溶液 中。
走进分子生物学实验室
——分子生物学实验室常用设备和 仪器介绍
孙文 宋田源
培养箱
常用培养箱一般为隔水 式恒温培养箱
细菌——37℃ 霉菌——28℃
使用时注意培养箱的水 位，水位过低会引起温 度变化幅度加大，不能 控温
冰箱
4℃适合储存某些溶液、试 剂、药品等。
-20℃适用于酶、血清、配 好的抗生素和DNA、蛋白 质样品等。
10μl
各100～ 250μmol/L 各5～ 20μmol/L
0.1～2μg
5～10 U
Mg2+（终浓度） 补加双蒸水
1～3mmol/L 100 μl
参加PCR反应的物质
• 引物 • DNA聚合酶 • dNTP • 模板链 • 缓冲体系
引物设计原则
• ①引物长度：15-30bp • ②引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太