肾活检病理组织染色

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、常规染色技术(HE 染色)

苏木素-伊红染色简称HE 染色,是最常用的染色方法,苏木素是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,伊红是一种酸性染料,能将细胞质染成红色或淡红色。HE 染色可以显示肾小球的细胞增生、炎细胞浸润。还能很好的显示肾小管上皮细胞的损伤和肾间质水肿情况。

(一)需要试剂

①苏木素染液;②1%盐酸乙醇液;③氨水;④1%伊红液。

(二)具体染色步骤

1. 切片常规脱蜡入水。

2. 苏木素染细胞核1〜2 min,水洗。

3. 入1% 盐酸乙醇分化数秒,水洗。

4. 氨水返蓝数秒。

5. 流水冲洗,镜下观察细胞核成蓝色。

6.1% 伊红染数秒,水洗。

7.梯度乙醇脱水,二甲苯透明,树胶封片。染色结果:胞核呈蓝色,胞浆呈红色,红细胞呈橘红色,其他成分呈深浅不同红色。

(三)注意事项

1. 组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色,影响观察。

2. 伊红染色的时间需严格控制。过长胞浆染色红色过深。

3. 染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

二、特殊染色技术

(一)过碘酸- 希夫氏染色(PAS 染色)

PAS 染色可以显示肾小球内的细胞增生、浸润和系膜基质等,并能很好地显示基底膜,是显示糖原和糖蛋白的基本染色。

1. 需要试剂①1%过碘酸;②schiff氏液染;③苏木素染液;④氨水。

2. 具体染色步骤

(1 )切片常规脱蜡入水。

(2)入1% 过碘酸氧化10 〜15 min ,水洗。

(3)入schiff氏液染10〜30 min,水洗。

(4)苏木素染细胞核 1 〜 2 min ,水洗。

(5)入1% 盐酸乙醇分化数秒,水洗。

(6)氨水返蓝数秒。

(7)流水冲洗,镜下观察细胞核成蓝色,基底膜染成粉红色。

(8)梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。

3. 染色结果PAS 阳性物质(多糖和糖原)呈红色,核呈蓝色。

4. 注意事项

( 1 )组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色。

(2)Schiff 氏液染色的时间需严格控制。时间过长标本基底膜着色过深,时间过短标本基底膜着色

淡。

(3)入1% 盐酸乙醇分化时间要短,时间长容易使标本退色。

(4)染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

(二)六胺银- 马松染色( PAM-Masson 染色)

PAM-Masson 染色能更清晰地显示基底膜、免疫复合物和胶原纤维,免疫复合物的定位更为精确。

1. 需要试剂

①1%过碘酸;②六胺银液;③苏木素染液;④氨水;⑤Mass on液;⑥1%亮绿液。

2. 具体染色步骤

(1 )切片常规脱蜡入水。

(2 )入1% 过碘酸氧化10〜15 min,水洗5 min。

(3)入六胺银液72C染30〜50 min,以显微镜下见基底膜呈黑色即可。

( 4)加2% 氯化金数滴于组织,5% 硫代硫酸钠洗。

( 5)苏木素染细胞核 1 〜 2 min ,1% 盐酸乙醇分化,氨水返蓝。

( 6)入Masson 液约10 min ,1% 醋酸洗。

(7)入1% 亮绿5 〜8 min,1% 醋酸洗。

( 8)梯度乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。

3. 染色结果基底膜及系膜基质黑色,免疫复合物红色。

4. 注意事项

( 1 )组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色。

(2)染色时间与室温和切片厚度有关,室温低、切片厚需染色时间长,反则需染色时间短。入六胺银液染色的时间需严格控制。时间过长基底膜着色过深,时间过短基底膜着色淡。

( 3) 2% 氯化金分化时间要短,时间长容易使银染退色。

( 4)染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

(三)马松染色( Masson 染色)

Masson 染色能显示各部位的免疫复合物,肾小球硬化和肾间质纤维化程度。

1. 需要试剂①苏木素染液;②氨水;③ Masso n液;④1%亮绿液。

2. 具体染色步骤

( 1 )切片常规脱蜡入水。

(2)媒染剂(10%重铬酸钾、10%三氯醋酸等量混合)染10〜30 min,水洗。

(3)苏木素染细胞核1〜2 min,水洗。

( 4)入1% 盐酸乙醇分化数秒,水洗,氨水返蓝数秒,水洗。

(5 )入Mass on液约10 min,水洗,1% 醋酸洗。

(6)入2.5%磷钨酸约30 s,水洗,1%醋酸洗。

(7)入2%橘黄G约2 min,水洗,1%醋酸洗。

(8)入1% 亮绿5 〜8 min, 1% 醋酸洗。

( 9)入100% 乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。

3. 染色结果细胞核红色,胶原纤维绿色,免疫复合物红色。

4. 注意事项

(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色。

(2)入Masson 液染色的时间需严格控制。时间过长着色过深,时间过短着色淡。

(3)入1% 亮绿染色时间需要镜下控制,时间长容易覆盖Masson 液红色。

(4)染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

(四)刚果红染色在肾脏病理染色中,刚果红染色能够将淀粉样物质染成砖红色,是诊断淀粉样变肾病的常用染色方法之一。

1需要试剂①高锰酸钾一硫酸液;②苏木素染液;③氨水;④碱性刚果红液。2.具体染色步骤(1)切片常规脱蜡入水。

(2)高锰酸钾-硫酸混合处理3 min,水洗。

(3)5%草酸处理3 min,水洗。

(4)苏木素染核2 min,水洗,蓝化。

(5)碱性刚果红液染10〜30 min。

(6)入100% 乙醇脱水、二甲苯透明、树胶封片。

3.染色结果细胞核蓝色,淀粉样物质呈砖红色(图3-12)。

4.注意事项

(1)组织切片的脱蜡步骤应彻底,否则组织无法着色。

(2)碱性刚果红液染色时间应该镜下控制,染色液现配现用着色好。

(4)染色后的组织切片要将组织四周的污染物痕迹擦掉。

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